Sejtterápia
Sejtfeldolgozás Felhasználás Fagyasztva tárolás
Köldökzsinórvér bank Limfocita génterápiás termék
Sejtmosás
Plazma eltávolitás Reagens eltávolítás (pl. citokin, antitest, médium)
Alap sejtszelekció
Incompatibilis vvt eltávolítása Mononuklearis sejtek dúsítása
Komplex sejtszelekció
CD14+ monociták dúsítása CD34+ csontvelői-, vér őssejtek dúsítása CD8+ limfocita depléció Felnőtt őssejtek szaporításon alapuló szelekciója
Ex vivo sejtszaporítás
Gén-manipulált limfociták Antigénnel feltöltött dendritikus sejtek Gén-manipulált őssejtek
Sejtaktiválás
Limfocita-alapú immunterápia NK sejt-alapú immunterápia
Immunizálás
Dendritikus sejt-alapú immunterápia
Génmodifikálás
Génpótlás Szuicid gének bevitele
Őssejtterápia
Az őssejtek terápiás felhasználásának lehetőségei Csontvelő átültetés Szövetek pótlása:
+ máj, porc, csont, vese …
Az őssejt transzplantáció chronológiája Hematopoietic Stem Cell Transplantation (HSCT)
1957-első csontvelő átültetés; Edward Donall Thomas és mtsai; Nobel díj 1990-ben
1973-első magyar őssejt átültetés; Dr. Kelemen Endre 1984-első magyar csontvelő transzplantáció; Dr. Kelemen Endre és Dr. Hollán Zsuzsa
1989-köldökzsinórvér transzplantáció; Broxmeyer és Gluckmann 1998-PBMC transzplantáció; Reiffers és Gorin
Őssejt transzplantációs lehetőségek Allogén: testvér, rokon, idegen Autológ: saját Szingén: egypetéjű ikrek
Az őssejtek gyűjtése 1. embrió (tiltott) 2. csontvelő (aspiráció) 3. perifériás vér (G-CSF, majd aferezis) 4. köldökzsinórvér 5. zsírszövet (kísérleti)
1.
Blastocyta
2. Csontvelővétel
3. Leukaferezis
Sejtszeparáló készülékek GAMBRO
COBE 2991
ELUTRA
Sejtszeparáló készülékek FRESENIUS
AS 104
4. Köldökzsinórvér tárolása születés után
CliniMACS sejtszeparáló készülék
A sejtek jelölése szelekcióhoz
A CliniMACS készülék mágnescsapdája
A CliniMACS készülék működése
Minőségellenőrzés Biztonság
Sterilitás Endotoxin Mycoplasma Fertőző ágensek
Tisztaság/identifikálás
Sejtszám Életképesség (Tripán kék, akridin orange, propidium jodid, 7-ADD) Sejttipizálás (morfológia, immunfenotípus-flow cytometria) Maradék anyagok visszamérése
Hatékonyság
Klonális szaporodási készség Citotoxicitás Antigén prezentáció Metabolikus-, szintetizáló képesség
Stabilitás
Rövid és hosszú idejű tárolást követő funkcionális aktivitás
MINŐSÉGELLENŐRZÉS ŐSSEJT •
Sejtszám
•
Fenotípus vizsgálat (CD34+)
•
Életképesség
•
Endotoxin (LAL)
•
Sterilitás (Ph.Hg.VIII. és Ph. Eur. 4.)
•
Funkcionális tesztek: kolónia képzés, migráció
Csontvelő-transzplantációs szoba
Az allogén őssejttranszplantáció indikációi Veleszületett
Szerzett
Immundeficiencia Vérképzőszervi betegségek anemia neutropenia trombocitopenia Anyagcserezavarok
Aplasztikus anémia Szerzett immunhiány szindróma Tiszta vörösvérsejt aplázia Tiszta megakariocita hiány Langerhans histiocitózis
Őssejttranszplantáció hematológiai betegségekben Autológ
Allogén
Malignus limfómák
Akut leukémiák
Mielóma multiplex Szolid tumorok
Krónikus mieloid leukémia Mielodiszpláziás szindróma Mieloproliferatív betegségek
A sejtregeneráció kinetikája őssejt transzplantáció után 1. 2. 3.
Phagocyták (polymorphonucleáris és mononucleáris) 2-3 hét NK sejtek (CD3-CD16+CD56+ sejtek) 1 hó T lymphocyták (CD3+ sejtek) 3-6 hó • CD8+ • CD4+ CD45RO+ (memória) gyors CD45RA+ (naiv) lassú, évek alatt
4.
B sejtek (évek alatt) IgM
IgG
IgA (oligo/monoklonális ea)
A donor T sejtek szerepe 1. A transzplantált allogén donor őssejtek rejectiójának gátlása 2. Reziduális malignus sejtek elpusztítása (ismételt donor T sejt infúzió) 3. GVHD allogén transzplantáció esetén (T és NK sejtek mediálják)
Dendritikus sejt-alapú tumor vaccina
A dendritikus sejtek physiologiája
Dendritikus sejtek előállítása in vitro
MINŐSÉGELLENŐRZÉS DENDRITIKUS SEJT •
Sejtszám
•
Fenotípus vizsgálat (CD86+, CD1a, CD-SIGN)
•
Életképesség
•
Endotoxin (LAL)
•
Sterilitás (Ph.Hg.VIII. és Ph. Eur. 4.)
•
Funkcionális tesztek: IL-12 termelés, migráció, T sejt osztódás indukciója, IFNγ termelés indukció.
NaCl
NaCl
2h
48h
SZÁMÍTÓGÉPES MONITOROZÓ RENDSZER
„Primum nil nocere”
„Először is ne árts”
