PENGARUH STERILAN DAN WAKTU PERENDAMAN PADA EKSPLAN DAUN KENCUR ( Kaemferia galanga L) UNTUK MENINGKATKAN KEBERHASILAN KULTUR KALUS ABSTRAK

11

PENGARUH STERILAN DAN WAKTU PERENDAMAN PADA EKSPLAN DAUN KENCUR ( Kaemferia galanga L) UNTUK MENINGKATKAN KEBERHASILAN KULTUR KALUS Anis Shofiyani dan Oetami Dwi Hajoeningtijas

Fakultas Pertanian Universitas Muhammadiyah Purwokerto Jl. Raya Dukuhwaluh PO Box 202 Purwokerto

ABSTRAK

P

enelitian ini bertujuan mempelajari pengaruh senyawa kimia Bayclin (Natrium hipoklorid/NaClO) dan alkohol 70% terhadap penurunan kontaminasi eksplan daun kencur, mencari pengaruh waktu perendaman senyawa kimia sterilan terhadap pertumbuhan eksplan daun kencur serta mengetahui pengaruh interaksi antara senyawa kimia sterilan dan waktu perendaman terhadap peroleh kultur kalus kencur yang bebas kontaminasi. Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Oktober 2009 sampai dengan bulan April 2010 di Laboratorium Kultur Jaringan Universitas Muhammadiyah Purwokerto. Rancangan yang digunakan adalah Rancanmgan Acak Lengkap (RAL) dengan 3 ulangan. Variabel pengamatan meliputi : Persentase kontaminasi, persentase eksplan yang tumbuh, waktu pertama kontaminasi muncul, dan sumber kontaminan (Bakteri/jamur). Hasil penelitian menunjukkan bahwa Penggunaan senyawa kimia bayclin (Natrium hipoklorid/NaClO) 20%dan alcohol 70% mampu mengurangi kontaminasi baik eksternal maupun internal yang disebabkan oleh jamur maupun bakteri. Waktu perendaman eksplan dalam senyawa kimia sterilan dengan lama waktu perendaman berkisar 5-10 menit mampu menurunkan kontaminasi antara 35-56 % dalam penelitian ini. Kombinasi penggunaan senyawa kimia bayclin 20% selama 10 menit dan alcohol 70% selama 10 menit mampu menurunkan kontaminasi pada eksplan berkisar 42%. PENDAHULUAN

adalah penggunaan obat tradisional

Konsep hidup kembali ke alam (back to nature)

bersumber

dari

tumbuh-

ini semakin

tumbuhan. Berdasarkan hal itu dapat

digalakkan dengan tujuan menekan

diperkirakan bahwa permintaan obat

penggunaan

tradisional baik dalam negeri maupun

(mengingat

saat

yang

bahan-bahan

sampingnya),

luar

hidup

yang

Peningkatan tersebut akan dipacu oleh

konsumtif dan mengoptimalkan potensi

semakin tingginya harga obat sintetis

alam yang ada. Salah satu realisasinya

dan khususnya di Indonesia harganya

mengendalikan

efek

sintetis

pola

negeri

AGRITECH, Vol. XII No. 1 Juni 2010 : 11 – 29

akan

meningkat.

12

naik sampai 400 % akibat krisis

produk akhir yang diinginkan (Otih,

ekonomi (Ruspandy, 2000 cit Shofiyani,

et.al. 2005).

2003).

Senyawa

Salah

satu

tumbuhan

yang

fenol

serta

saponin, minyak

flavonoid, atsiri

yang

berpotensi sebagai obat yaitu kencur

terkandung di dalam kencur merupakan

(Kaemferia galanga L) . Kencur banyak

hasil metabolit sekunder suatu tanaman

digunakan sebagai bahan baku obat

(Indrayanto, 1987). Tanaman obat dan

tradisional (jamu), fitofarmaka, industri

aromatik dapat menghasilkan senyawa

kosmetika,penyedap

metabolit sekunder bernilai ekonomi

minuman,

rempah,

makanan serta

dan bahan

tinggi,

seperti

vinblastina/

campuran saus rokok pada industri

vinkristinapada tanaman tapak dara

rokok kretek. Secara empirik kencur

(Vinca

digunakan sebagai penambah nafsu

(Dioscorea sp),kinina pada tanaman kina

makan, infeksi bakteri, obat batuk,

Cinchoasp.),

disentri, tonikum, ekspektoran, masuk

tanaman

melati

angin, sakit perut karena rimpangnya

piretrin

pada

mengandung

saponin,

(Pyrethrum pelargonium) dan spearmint

flavonoid, fenol serta minyak atsiri (

pada tanaman mentha (Mentha sp.),

Syamsuhidayat dan Johnny, 1991).

(Harris, 1989).

antara

lain

Minyak atsiri didalam rimpang

rosea),ajmalisina, kodeina,

digitalis

yasmin

(Jasminum tanaman

pada

sambac), Piretrum

Dalam kenyataannya, produksi

kencur mengandung etil sinnamat dan

metabolit

metil p-metoksisinamat yang banyak

kencur untuk kebutuhan pabrik-pabrik

digunakan didalam industri kosmetika

industry

dan dimanfaatkan sebagai obat asma

keberadaan dan pertumbuhan tanaman

dan anti jamur. Banyaknya manfaat

di lapang yang ditentukan oleh berbagai

kencur memungkinkan pengembangan

factor lingkungan seperti tanah, nutrisi,

pembudidayaannya dilakukan

iklim serta hama dan penyakit. Salah

intensif

yang

disesuaikan

secara dengan

satu

sekunder sangat

upaya

dari

rimpang

dipengaruhi

untuk

oleh

menghasilkan

A. Shofiyani dan O.D. Hajoeningtijas : Pengaruh Sterilan dan Waktu …

13

metabolit sekunder dengan jumlah yang

perendaman yang tepat merupakan

banyak adalah dengan teknologi kultur

salah satu faktor yang menentukan

jaringan seperti kultur kalus. Kultur in

keberhasilan streilisasi. Ada berbagai

vitro tidak hanya dapat digunakan untuk

bahan kimia sterilant yang dibutuhkan

konservasi dan perbanyakan tanaman,

untuk sterilisasi eksplan yaitu natrium

melainkan dapat juga diterapkan untuk

hipoklorit (NaCLO), Sodium hipoklorit

produksi metabolit sekunder. Melalui

(klorox), merkuri khlorit (Sublimat),

teknik ini, produksi metabolit sekunder

detergent dan alkohol 70%.

tidak

bergantung

kepada

sumber

tanaman di lapang.

Berdasarkan sebelumnya

penelitian

bahwa

penggunaan

Tahap awal kegiatan kultur kalus

senyawa-senyawa kimia seperti bayclin,

yang memiliki peran penting atas

mercury khlorit dan alkohol 70% yang

keberhasilan

dikombinasikan

dengan

waktu

penyediaan bahan tanam/eksplan yang

perendamandalam

proses

sterilisasi

bebas

Metode

eksplan cukup baik untuk menurunkan

dengan

oersentase eksplan yang terkontaminasi.

ketepatan cara, bahan sterilan maupun

Namun demikian sejauh mana peran

waktu sterilisasi yang digunakan akan

senyawa

menentukan

penurunan

dari

sterilisasi

kegiatan

ini

kontaminasi.

yang

digunakan

keberhasilan

adalah

proses

sterilisasi yang dilakukan. banyak dilakukan leh peneliti maupun kultur

in

vitro

dengan

A. Tempat dan Waktu

yang

Laboratorium

yang

terdapat

kontaminasi

METODE PENELITIAN Penelitian

menghilangkan

persentase

terhadap

jauh dalam penelitia ini.

menggunakan berbagai macam cara diharapkan

tersebut

ekplan daun kencur perlu dikaji lebih

Berbagai cara sterilisasi telah pelaksana

kimia

efektif

sumber dalam

untuk

kontaminan eksplan.

Kombinasi bahan sterilan dan waktu

ini

Universitas

dilaksanakan Kultur

di

Jaringan,

Muhammadiyah

Purwokerto, waktu penelitian selama 6 (enam) bulan.


14

B. Alat dan Bahan

NaMoO4.2H2O;

1. Alat

Nikotinat; Piridoksin-HCl; Thiamin-

Laminair air flow cabinet (LAF); botol kultur; timbangan analitis; skalpel dan blade; pinset; pH meter; lampu

NH4NO3;

Asam

HCl; Sukrosa; ZnSO4.7H2O. C. Rancangan Percobaan Perlakuan

untuk

sterilisasi

spirtus; gelas ukur; batang pengaduk;

eksplan kencur terdiri atas dua faktor

otoklaf; lemari es.

yaitu konsentrasi senyawa kimia bayclin

2. Bahan

(natrium

hipoklorid/NaClO),

dan

Alkohol 70%, Bayclin, Detergen,

alkohol 70%. Kombinasi perlakuan

2,4-D; BAP; alumunium foil; HgCl2;

sterilisasi eksplan dapat dilihat pada

aquades; asam sulfat; agar; sukrosa;

tabel 2. Semuanya disusun acak dalam

CaCl2.2H2O;

rancangan acak lengkap (RAL) dengan

CoCl2.6H2O;

CuSO4.5H2O;

FeSO4.7H2O;

Glisin;

H3BO3; KH2PO4; KI; MgSO4.7H2O;

tiga ulangan, dan setiap unit perlakuan menggunakan 5 botol kultur.

MnSO4.4H2O; Myoinositol; Na2EDTA;

Tabel 2. Konsentrasi Bayclin, Akohol 70% dan lama perendaman eksplan daun kencur. Perlakuan

Kombinasi

S1

Bayclin 20% selama 5’ + Alkohol 70% selama 5’

S2

Bayclin 20 % selama 10’ + Alkohol 70% selama 5’

S3

Bayclin 20% selama 5’ + Alkohol 70% selama 10’

S4

Bayclin 20 % selama 10’ + Alkohol 70% selama 10’

S5

Alkohol 70% selama 15’

S6

Bayclin 20% selama 15’


15

D. Tata Laksana Penelitian

sudah terpilih digunakan untuk tahapan

1. Sumber dan Sterilisasi Eksplan

penelitian selanjutnya

Bahan

yang

akan

digunakan

2. Sterilisasi eksplan

sebagai eksplan adalah daun kencur.

Bahan

tanaman

yang

sudah

Penyediaan eksplan dilakukan dengan

diperoleh kemudian diperlakukan sesuai

cara emilih rimpang kencur yang sehat

dengan rancangan penelitian (tabel 2).

dan baik. Kemudian rimpang direndam

Bahan kimia sterilan yang digun akan

dalam

jam,

antara lain Bayclin dan alcohol 70%.

kemudian dibilas dalam air mengalir

Setelah melalui proses sterilisasi eksplan

dan dikeringanginkan. Rimpang kencur

ditanam dalam media induksi kalus

kemudian

detergen

selama

disimpan

dihamparkan

dalam

12

dengan

cara

yang bertujuan untuk menumbuhkan

ruangan

yang

eksplan agar terbentuk kalus.

bersuhu sejuk, aerasi baik dan tidak terkena

cahaya

3. Induksi kalus

langsung

untuk

pertumbuhan

tunas.

pembentukan kalus dari eksplan yang

Tunas yang sudah terbentuk dengan

ditanam dilakukan pada medium dasar

menghasilkan daun kencur yang sudah

MS dengan penambahan 2,4-D 0 - 2

membuka digunakan sebagai bahan

mg/l medium dan BAP 0 - 0,3 mg/l

tanam/eksplan. Potongan daun dengan

medium seperti tampak pada Tabel 3.

mempercepat

Untuk

menginduksi

ukuran 0,5 x 0,5 cm dari daun yang Tabel 3. Konsentrasi 2,4-D dan BAP untuk induksi kalus BAP (mg/l) 2,4-D(mg/l) 0 0,5 1 1,5 2

0

0,1

0,2

0,3

D0B0 D1B0 D2B0 D3B0 D4B0





16

Induksi kalus dilakukan dengan cara menanam eksplan dalam medium

dari 10 hari)

yang

menginduksi

paling

banyak

pembentukan

kalus

kontaminasi

muncul.

induksi tunas. Selanjutnya ditentukan medium

hingga

Dari dalam

variasi

waktu

tersebut,

pengamaan

waktu

pertama

kontaminasi muncul dibagi menjadi 2

setelah delapan minggu kultur

(dua) kelompok sumber kontaminasi

4. Variabel yang diamati

yaitu kontaminasi Eksternal (waktu

Variabel yang diamati meliputi: Persentase

kontaminasi,

pertama kontaminasi muncul kurang

persentase

dari 10 hari) dan kontaminasi internal

eksplan yang tumbuh, waktu pertama

(waktu pertama kontaminasi muncul

kontaminasi

lebih

muncul,

dan

sumber

kontaminan (Bakteri/jamur).

pengamatan

HASIL DAN PEMBAHASAN A. Hasil Penelitian

muncul

rerata

kontaminasi

hari).

Data

waktu

hasil

pertama

kontaminasi muncul dapat dilihat pada tabel 4. waktu pertama kontaminasi

Hasil pengamatan waktu pertama bahwa

10

Dari data Tabel 4. terlihat bahwa

1. Waktu Pertama Kontaminasi Tumbuh kontaminasi

dari

menunjukkan

waktu

muncul

pertama

menunjukkan

variasi waktu yang beragam. Dalam pengamatan

ini

asal

berpengaruh

terhadap

kontaminasi

muncul

dari masing-masing perlakuan sterilisasi menunjukkan (perendaman selama

10

perlakuan dalam

Bayclin

menit

S4 20%

dilanjutkan

perendaman dalam alkohol 70% selama 10 menit) menunjukkan tidak terjadi

yang

kontaminasi eksternal. Perlakuan S3

dibutuhkan sampai sumber kontaminasi

(Bayclin 2 % selama 5’ + Alkohol 70%

muncul dalam media. Waktu yang

selama 10’) memberikan rerata waktu

dibutuhkan bervariasi dengan waktu

4,5 hari, perlakuan S1 ( Bayclin 20%

waktu

yang singkat (kurang dari 7 hari) hingga membutuhkan waktu cukup lama (lebih

selama 5’ + Alkohol 70% selama 5’) memberikan rerata waktu 6,6 hari,


17

Tabel 4. Rerata waktu Pertama kontaminasi muncul (hari setelah inokulasi) Kontaminasi Eksternal Kontaminasi Internal 6,6 18 7,5 16,5 4,5 14 7 16,75 7 16,5 7,5 16

Perlakuan S1 S2 S3 S4 S5 S6

perlakuan S4 ( Bayclin 20% selama 10’

16,75 hari; S2 ( Bayclin 20% selama 10’

+ Alkohol 70% selama 10’) dan S5 (


perendaman

70%

perendaman dalam alkohol 70% selama

selama 15 menit) selama 7 hari,

15’) selama 16,5 hari ; S6 S6 ( Bayclin

sedangkan perlakuan S2 ( Bayclin 20%

20% selama 15’) selama 16 hari dan S3(

selama 10’ + Alkohol 70% selama 5’)

Bayclin 2 % selama 5’ + Alkohol 70%

dan S6 ( Bayclin 20% selama 15’)

selama 10’) selama 14 hari.

dalam

Alkohol

memberikan rerata waktu 7,5 hari. Sedangkan internal

perlakuan

S4

(perendaman

dalam

bayclin 20% selama 10’ dilanjutkan

kontaminasi muncul pada masing-

dengan perendaman dalam alkohol

masing perlakuan menunjukkan variasi

70% selama 10’) dan S5 ( perendaman

waktu antara 14 hari – 18 hari setelah

dalam

inokulasi/tanam.

S1

memberikan pengaruh yang terbaik

(perendaman dalam bayclin 20% selama

terhadap proses sterilisasi pada eksplan

5’

dalam

Alkohol

waktu

kontaminasi pertama

+

rerata

untuk

Dari data tersebut terlihat bahwa

Perlakuan 70%

selama

5’)

alkohol

rangka

70%

selama

15’)

menghilangkan

menunjukkan rerata waktu pertama

mikroorganisme penyebab kontaminasi

kontaminasi muncul 18 hari;

eksternal baik yang disebabkan oleh

S4

(perendaman dalam bayclin 20% selama

jamur

maupun

10’ dilanjutkan dengan perendaman

demikian perlakuan ini masih belum

dalam alkohol 70% selama 10’) selama

mampu menghilangkan kontaminasi


bakteri.

Namun

18

yang

disebabkan

sumber

Dari data diatas dapat terlihat

kontaminan internal yang terbawa dari

bahwa perlakuan sterilisasi eksplan S1 (

bahan tanam /eksplan yang digunakan.

bayclin 20% selama 5’ + alkohol 70 %

2. Sumber Kontaminasi

selama 5’) dan S3 ( Bayclin 20% selama

Pengamatan kontaminasi

terhadap

pada

menunjukkan

oleh

sumber

penelitian

bahwa

ini

sumber

5’

+

Alkohol

menyebabkan

70%

selama

10’)

kontaminasi eksternal

dari sumber kontaminan jamur yaitu

kontaminan pada media disebabkan

masing-masing

oleh

perlakuan S2 (Bayclin 20% selama 10’

jamur

maupun

bakteri.

Alkohol

sebanyak

%,

Kontaminasi berasal dari kontaminan

+

eksternal baik berupa jamur maupun

menyebabkan kontaminasi dari sumber

bakteri, ataupun kontaminan internal

kontaminan

yang pada umumnya berasal dari

perlakuan S5 ( Alkohol 70% selama 15

baktreri yang tumbuh di dalam jaringan

’) dan S6 ( Bayclin 20 % selama 15’)

tanaman. Sumber kontaminan yang

masing-masing kontaminasi oleh jamur

menyerang dapat dilihat pada tabel 5

sebanyak 7%, sedangkan perlakuan S4 (

berikut ini.

Bayclin 20% selama 10’ + Alkohol 70% selama

10’)

70%

35

jamur

selama sebanyak

mampu

5’) 21%,

menghambat

pertumbuhan jamur. Tabel 5. Persentase media terkontaminasi dari berbagai sumber kontaminasi (%) Perlakuan Eksternal Internal Jamur Bakteri Jamur Bakteri S1 35 7 0 7 S2 21 14 0 14 S3 35 14 7 0 S4 0 14 0 28 S5 7 0 0 28 S6 7 28 0 21


19

a. Kontaminasi oleh jamur

b. Kontaminasi oleh bakteri

Gambar 2. Kontaminasi eksternal dengan sumber kontaminan jamur dan bakteri Sumber

kontaminansi

yang

Perkembangan

kontaminan

disebabkan oleh bakteri terlihat pada

internal

perlakuan S6 ( Bayclin 20% selama 15’)

perlakuan

menunjukkan

terbanyak

perlakuan ); S3 ( Bayclin 20% selama 5’

yaitu 28% kontaminasi yang disebabkan

+ Alkohol 70% selama 10’) yang masih

oleh bakteri eksternal, perlakuan S2 (

dapat

Bayclin 20% selama 10’ + Alkohol 70%

internal yang disebabkan oleh jamur,

selama 5’); S3 ( Bayclin 20% selama 5’

sedangkan perlakuan lainnya ternyata


masih


kontaminasi internal yang disebabkan

selama 10’) masing-masing sebanyak

oleh

14% kontaminasi yang disebabkan oleh

perlakuan S1 sebanyak 7%, S2 sebanyak

bakteri, S1 ( bayclin 20% selama 5’ +

14 %, S6 sebanyak 21 % , dan S4 dan

alkohol 70 % selama 5’) sebanyak 7 %,

S5

sedangkan S5 ( Alkohol 70% selama 15

kotaminasi internal yang disebabkan

’) tidak menimbulkan kontaminasi yang

oleh bakteri.

persentase

untuk

masing-masing

menunjukkan

menimbulkan

menyebabkan bakteri,

dengan

masing-masing

disebabkan oleh bakteri eksternal.


hanya

kontaminasi

timbulnya hasil

sebanyak

yaitu

28%

20

Gambar 3. Eksplan yang terkontaminasi bakteri internal (eksudat berwarna merah) 3. Persentase Kontaminasi

Dari tabel 6 terlihat bahwa

Pengamatan terhadap persentase eksplan penelitian

yang terkonaminasi dalam ini menunjukkan

perlakuan S5 ( Alkohol 70% selama 15 ’) menunjukkan persentase kontaminasi

bahwa

terrendah yaitu hanya 35%, perlakuan

secara umum persentase kontaminasi

S4 ( Bayclin 20% selama 10’ + Alkohol

dibawah 50%, hanya pada perlakuan S3

70%

dan S6 persentase kontaminasi diatas

perlakuan S1 ( bayclin 20% selama 5’ +

50%, untuk lebih jelasnya dapat dilihat

alkohol 70 % selama 5’) dan

pada tabel 6.


Tabel 6. Persentase eksplan yang terkontaminasi (%) Perlakuan Persentase Kontaminasi S1 49 S2 49 S3 56 S4 42 S5 35 S6 56

selama

selama 5’)

10’)

sebanyak

42%, S2 (

sebanyak 49%, sedangkan

perlakuan S3 ( Bayclin 20% selama 5’ + Alkohol 70% selama 10’) dan S6 ( Bayclin 20% selama 15’) menunjukkan persentase kontaminasi tertinggi yaitu sebanyak 56%.


21

4. Persentase Eksplan yang tumbuh Pengamatan persentase eksplan

selama 5’) dan S2 ( Bayclin 20% selama 10’

+

Alkohol

70%

selama

5’)

yang tumbuh dapat dilihat pada tabel 7

sebanyak 51%, sedangkan perlakuan S3

dibawah ini.

(Bayclin 20% selama 5’ + Alkohol 70%

Dalam tabel 7 persentase eksplan

selama 10’) dan S6 ( Bayclin 20%

yang tidak terkontaminasi pada masing-

selama 15’) menunjukkan persentase

masing perlakuan menunjukkan bahwa

eksplan

perlakuan S5 ( Alkohol 70% selama 15

terrendah yaitu sebanyak 44%.

’) menunjukkan persentase eksplan tidak terkontaminasi tertinggi

yaitu

yang

tidak

Sedangkan

terkontaminasi

persentase

eksplan

yang tumbuh dari eksplan yang tidak

sebesar 65%; perlakuan S4 ( Bayclin

terkontaminasi

menunjukkan

tidak

20% selama 10’ + Alkohol 70% selama

adanya eksplan yang mampu tumbuh

10’) sebanyak 58%, perlakuan S1 (

pada media yang digunakan dengan

bayclin 20% selama 5’ + alkohol 70 %

perlakuan sterilisasi tersebut.

Tabel 7. Persentase eksplan yang tidak terkontaminasi dan persentase eksplan yang tumbuh Perlakuan Persentase eksplan tidak Persentase eksplan tumbuh terkontaminasi (%) (%) S1 51 0 S2 51 0 S3 44 0 S4 58 0 S5 65 0 S6 44 0


22

Gambar 4. Eksplan yang tidak terkontaminasi umur 20 hst C. Pembahasan Umum Data

perlakuan lainnya yaitu kurang lebih 14

penelitian

menunjukkan

hari

setelah

tanam.

Persentase

bahwa perlakuan yang digunakan baik

kontaminasi pada perlakuan ini tertinggi

jenis

diaplikasikan

sama dengan perlakuan S6 ( Bayclin

perendaman

20% selama 15’) yaitu masing-masing

sterilan

yang

maupun lamanya waktu eksplan

dalam

larutan

sterilan

memberikan hasil yang beragam untuk

sebesar 56%. Perlakuan S5 ( Alkohol 70%

masing-masing perlakuan.

selama 15 ’) menunjukkan persentase

Perlakuan S3

eksplan terkontaminasi terendah yaitu

( Bayclin 20%

selama 5’ + Alkohol 70% selama 10’)

sebesar

menunjukkan

kontaminan

waktu

yang

singkat

35

%,

dengan

berupa

sumber

jamur

untuk

sekitar 4,5 hari untuk memunculkan

kontaminasi eksternal dengan waktu

kontaminasi

berupa

kemunculan 7 hari setelah tanam dan

jamur maupun bakteri. Begitu pula

bakteri untuk kontaminasi internal yang

untuk

muncul setelah 16,75 hari tanam.

eksternal

pertumbuhan

baik

kontaminasi

internal dengan sumber kontaminan

Tingginya

kontaminasi

yang

berupa jamur membutuhkan waktu

terjadi menunjukkan bahwa lamanya

yang

perendaman

lebih

singkat

dibandingkan

dalam

etanol


yang

23

dilanjutkan dengan perendaman dalam

bahan kimia sterilan dan lamanya waktu

larutan clorox yang digunakan belum

perendaman eksplan dalam sterilan

efektif membunuh agensia penyebab

masih

kontaminasi seperti jamur dan bakteri.

kontaminasi eksternal yang cukup tinggi

Gejala yang ditimbulkan dari adanya

khususnya pada perlakuan S1, S2, S3

serangan jamur adalah tumbuhnya hifa-

dan S6 yaitu masing-masing sebesar 42

hifa jamur pada permukaan media

%, 35%, 49% dan 35%dalam penelitian

maupun eksplan setlah inokulasi selama

ini. Tingginya kontaminasi eksternal

rata-rata 4-10 hari setelah tanam. Hifa-

pada perlakuan tersebut dimungkinkan

hifa yang terbentuk berwarna putih

karena kondisi bahan tanam yang

yang selanjutnya dalam kurun waktu

digunakan yaitu berupa rimpang kencur

tertentu berubah menjadi berwarna

mengandung sumber kontaminan yang

coklat

cukup tinggi dari dalam tanah.

dan

Begitu

pula

kontaminasi yang disebabkan

oleh

bakteri

hitam.

lama

penyebaran

agensia

memberikan

persentase

Seperti kita ketahui kencur

tumbuh

didalam

tanah,

kontaminan berkisar anatar 4 – 7 hari

menyebabkan

setelah

dengan

membawa kotoran yang terbawa dari

munculnya lendir berwarna kuning

lapangan. Proses pembersihan rimpang

kecoklatan di permukaan media dan

dari kotoran yang terbawa dari lapangan

eksplan.

membutuhkan ketelitian dan perlakuan

tanam,

dicirikan

Tingginya persentase kontaminasi eksternal jamur

baik yang disebabkan oleh

maupun

bakteri

cenderung

keadaan

rimpang rimpang

yang intensif untuk menghilangkan sumber kontaminan tersebut. Perlakuan yang diberikan ternyata masih belum

terbawa lewat alat maupun eksplan

mampu

yang

kontaminan yang terbawa dari eksplan

digunakan

dalam

penelitian,

terutama yang terbawa oleh eksplan. Perlakuan

sterilisasi

eksplan

menghilangkan

sumber

yang kita gunakan.

yang

Kontaminasi internal juga terjadi

dilakukan dengan menggunakan variasi

dalam penelitian ini. Dimana sumber


24

kontaminan yang mendominasi adalah

menyebabkan

bakteri internal yang berasal dari dalam

kematian.

jaringan tanaman. Bakteri-bakteri ini sampai

sekarang

belum

eksplan

Sulitnya

mengalami

kontaminasi

internal

dapat

diatasi dalam proses sterilisasi ini

diidentifikasi. Kontaminan internal ini

dikarenakn sumber kontaminan berupa

sangat sulit diatasi, karena sterilisasi

jamur

permukaan

terbawa/tumbuh

ternyata

belum

dapat

mengurangi kontaminasi internal ini. Dalam penelitian ini waktu yang

maupun

bakteri

sudah

didalam

jaringan

digunakan

sebagai

tanaman

yang

eksplan.

Permasalahan

seperti

ini

dibutuhkan sumber kontaminan untuk

umum muncul pada jenis-jenis tanaman

tumbuh berkisar antara 10 – 20 hari

yang

setelah tanam. Perlakuan S3 ( Bayclin

vegetatif.

20% selama 5’ + Alkohol 70% selama

digunakan

10’) waktu yang dibutuhkan untuk

menggunakan perbanyakan vegetatif

sumber kontaminan muncul adalah

dengan rimpang kencur sebagai bahan

kurang lebih 14 hari setelah tanam

tanaman dalam perbanyakan secara

dengan

konvensional.

jamur

kontaminan. lainnya

sebagai

Sedangkan

sumber

sumber perlakuan

dilakukan

dengan

cara

Tanaman

kencur

yang

dalam

penelitian

ini

Alternatif yang dapat untuk

mengurangi

yang

kontaminasi internal adalah dengan

muncul adalah bakteri dengan waktu

pemilihan rimpang kencur yang selektif

pertama muncul kurang lebih 16 – 18

sebelum

hari setelah tanam. Gejala kontaminasi

tanam

internal yang ditimbulkan oleh bakteri

menggunakan rimpang kencur yang

ditunjukkan dengan munculnya eksudat

sehat

lendir yang berwarna merah pada tepi-

penyebab kontaminasi eksternal dan

tepi bekas potongan pada eksplan.

internal dicirikan

Beberapa

rimpang

saat

kontaminan

dibudidayakan

kemudian

eksudat

menyebar keseluruh bagian eksplan dan

digunakan

sebagai

(eksplan) dan

diupayakan

terbebas

yang

bahan

dari

agensia

dengan bentuk segar,

padat

dan

ukurannya cukup besar. Selain itu juga


25

dapat dilakukan pencegahan sistemik

selama 5’)

dengan penambahan antibiotik dengan

perlakuan S3 ( Bayclin 20% selama 5’ +

dosis 50 mg/liter media dan fungisida

Alkohol 70% selama 10’) dan S6 (

untuk

Bayclin 20% selama 15’) menunjukkan

mengurangi

infeksi

jamur

sebanyak 51%, sedangkan

internal. Namun demikian penggunaan

persentase

antibiotik harus selektif dan hati-hati

terkontaminasi

karena penggunaan antibiotik yang

sebanyak 44%.

kurang

tepat

akan

menyebabkan

eksplan

yang

terrendah

tidak yaitu

Namun demikian dari jumlah

agensia kontaminan bakteri justru akan

eksplan

yang

tidak

terkontaminasi

menyebabkan toleransi.

belum ada yang mampu menghasilkan

Persentase eksplan yang tidak

kalus sesuai dengan yang diharapkan.

terkontaminasi dalam penelitian ini

Tidak terjadinya kalus dalam penelitian

menunjukkan bahwa proses sterilisasi

ini bukan disebabkan oleh proses

yang dilakukan cukup efektif untuk

sterilisasi yang digunakan namun lebih

mengurangi kontaminasi pada eskplan

cenderung pada zat pengatur tumbuh

yang

auksin dan sitokinin yang ditambahkan

digunakan.

Hasil

penelitian

menunjukkan bahwa persentase eksplan

dalam

yang

untuk

eksplan yang diisolasi dalam medium

adalah

induksi tunas pada umur 20 hari setelah

sebagai berikut perlakuan S5 ( Alkohol

induksi masih menunjukkan kondisi

70%

menunjukkan

yang cukup baik, ditandai dengan warna

persentase eksplan tidak terkontaminasi

eksplan yang masih hijau. Namun

tertinggi yaitu sebesar 65%; perlakuan

demikian

S4 ( Bayclin 20% selama 10’ + Alkohol

mengalami perubahan warna menjadi

70%

58%,

kuning yang menandakan sel-sel dalam

perlakuan S1 ( bayclin 20% selama 5’ +

jaringan daun mengalami kerusakan.

alkohol 70 % selama 5’) dan

S2 (

Hal ini dimungkinkan karena medium


induksi kalus yang digunakan masih

tidak

terkontaminasi

masing-masing selama

selama

perlakuan 15

10’)

’)

sebanyak

medium

lambat


tumbuh.

laun

Kondisi

eksplan

26

belum sesuai untuk induksi kalus

masih

juvenil

(muda/meristematik)

dengan eksplan daun kencur dalam

akan lebih memudahkan induksi kalus

penelitian ini.

dibandingkan

jaringan

yang

sudah

Sesuai pernyataan Santoso (2004),

mengalami pendewasaan seperti organ

membuat kalus berarti menginduksi

daun. Hal ini berkaitan dengan kondisi

dari bagian tanaman tertentu, yang

totipotensi bahan tanam, dimana pada

dirangsang

hormonal.

umumnya sifat totipotensi lebih banyak

Kesesuaian dan ketepatan pemilihan

dimiliki oleh bagian tanaman yang

jenis dan perimbangan konsentrasi zat

masih

pengatur tumbuh yang digunakan akan

dijumpai

mempengaruhi

meristematik tanaman seperti bagian

secara

keberhasilan

pembentukan kalus pada eksplan yang digunakan. Ketidakmampuan eksplan membentuk kalus lebih disebabkan oleh

karena

kurang

tepatnya

penggunakan zat pengatur tumbuh yang

digunakan

khususnya

perimbangan kosentrasi 2,4 D dan NAA yang digunakan. Selain perimbangan zat pengatur tumbuh yang digunakan untuk induksi tunas, penggunakan sumber eksplan juga berpengaruh terhadap keberhasilan induksi tunas. Dalam penelitian ini eksplan yang digunakan berupa daun kencur yang sudah membuka sempurna (dewasa). Menurut Santoso (2004), penggunaan

bagian

tanaman

yang

juvenil,

muda

pada

dan

banyak

daerah-daerah

tunas aksilar. KESIMPULAN DAN SARAN A. Kesimpulan Berdasarkan pembahasan

di

hasil

dan

muka

dapat

disimpulkan bahwa : 1. Penggunaan senyawa kimia bayclin (Natrium

hipoklorid/NaClO)

20%dan alcohol 70% mengurangi

kontaminasi

mampu baik

eksternal maupun internal yang disebabkan oleh jamur maupun bakteri 2. Waktu perendaman eksplan dalam senyawa kimia sterilan dengan lama waktu perendaman berkisar 5-10


27

menit

mampu

menurunkan

kontaminasi antara 35-56 % dalam penelitian ini. 3. Kombinasi

penggunaan

senyawa

kimia bayclin 20% selama 10 menit dan alcohol 70% selama 10 menit mampu menurunkan kontaminasi pada eksplan berkisar 42%. B. Saran Bertitik tolak dari hasil penelitian ini perlu dilakukan kajian lebih lanjut tentang alternatif penggunaan antibiotik dan

fungisida

untuk

mengurangi

kontaminasi internal yang terbawa oleh bahan tanam yang digunakan dalam kultur kalus. Selain itu perlu dikaji lebih jauh

mengenai

penggunaan

zat

pengatur tumbuh 2,4 D dan NAA dengan variasi kosentrasi yang lebih beragam untuk keberhasilan induksi kalus dengan eksplan daun kencur. DAFTAR PUSTAKA Bajaj, Y.P.S, 1983. Production of Normal Seeda from Plants Regenerated from the Meristem of Arachis hypogaea and Cicer arientinum Cryopreserved for 20 Months. Euphica. 32 : 425-430

Davies, P.J., 1987. The Plant Hormone: Their Nature, occurrence and Fuction in Plant Hormones and Their Role in Plant Growth and Develompment. Davies, P.J. (Ed) M. Nijhoff Publ. Dordrecht, Boston, Lancaster. p : 1-11. Ditejabun.2000. Statistik Perkebunan Indonesia 1998-2000. Panili. Jakarta. George, E.F. dan Sherrington, P.D. 1984. Plant Propagation by Tissue Culture. Exergetic Limited. England. p. 39-71; 331-382. Gunawan, L.W., 1988. Teknik Kultur Jaringan . Lab. Kultur Jaringan Tanaman Depdikbud Dirjen Dikti, PAU Bioteknologi, IPB Bogor. Hadipoenyanti,E. D. Seswita dan N. Ajijjah. 2001. Multiplikasi Tunas Panili Hasil Regenerasi Kalus Secara In Vitro. Dalam Prosiding Kongres IV dan Simposium Nasional PERIPI. Yogyakarta. Hal. 283-286. Kartha, K.K. 1981. Meristem Culture and Cryopreservation Method and Application in : Plant Tissue Culture Method and Application in Agriculture . T.A. Thorpe (ed). Academic Pess. Inc, San Diego, California. Pp :181-209.


28

Krikorian, A.D., K. Kelly dan D.L. Smith, 1987. Hormones in Tissue Culture and Micropropagation in Plant Hormones and Their Role in Plant Growth and Development. Davies, P.J. (Ed) M. Nijhoff Publ. Dordrecht, Boston, Lancaster. p : 593-613

Santoso, U. 1995. Induksi Kalus Artemisia vulgaris L dari Sumber Eksplan yang Berbeda. Pusbitan UMM. Malang.

Mulyaningsih T dan A. Nikmatullah, 2008. Kultur Jaringan Tanaman, Fakultas Pertanian UNRAM

Seswita. D., Hadipoenyanti,E. dan N. Ajijjah. 2001. Multiplikasi Tunas Panili Hasil Regenerasi Kalus Secara In Vitro. Dalam Prosiding Kongres IV dan Simposium Nasional PERIPI. Yogyakarta. Hal. 283-286.

Murashige, T. 1974. Plant Propagation through Tissue Culture. Annual Review. Plant Physiology 25 : 135-166. Otih R, Rosita SMDM, M. Rahardjo dan Taryono,2005. Budidaya Tanaman Kencur, Badan Penelitian dan Pengembangan Pertanian Balai Penelitian Tanaman Obat dan Aromatika, Bogor Priyono, 2000. Perbanyakan Abaca (Musa textilis Nee) Melalui Kultur Mata Tunas Secara In vitro. Pelita Perkebunan ( ) 129-133.

Santoso, U. Dan Fatimah N, 2004. Kultur Jaringan Tanaman. Ed. 2. UMM Press. Malang

Shofiyani, A. dan A. Suyadi, 2003. Pemberian Variasi NAA & BAP Terhadap Pertumbuhan Kencur Secara In Vitro, AGRITECH. Vol.V no.2 , Des 2003. 50 – 56 h. Sisunandar dan Julia, D. 2000. Perbanyakan Pisang Abaka (Musa textilis Nee.) cv. Tangongon secara In vitro. Laporan Penelitian. FKIP Univ. Muhammadiyah Purwokerto.

Purseglove,J.W., E.G. Brown, G.L. Green dan S.R.J. Robins. 1988. Species. Vol.2.John Wiley and Sons Inc. New York. 813p.

Stapper,R.E. and C.W. Heuser. 1986. Rapid Multiplikation of Heuchera sengueina Engelm “Rosamundi” Propagation in vitro. Hort. Sci. 21(4):1043-1044.

Rufledge, C.B dan G.C. Douglas, 1988. Tips and Micropropagation of 12 Commercial Clones of Polar In-vitro. Physiol. Plant 72 ; 367-373.

Syamsuhidayat, SS dan Johny, R.H. 1991. Inventaris Tanaman Obat, Balai Penelitian dan Pengembangan Kesehatan, 616 p.


29

Tisserat, B. 1987. Embryogenesis, Organogenesis and Plant Regeneration in Plant Cell Culture a Practical Approuch. Dixon, R.A; I.R L(Ed.). Press Limited Oxford. Tombe,M. dan D. Sitepu. 1987. Penyakit Panili di Indonesia. Edisi Khusus Littro. III92): 103-108. Udarno. L., dan E. Hadipoenyanti. 2001. Perbanyakan Panili Hibrida Secara In Vitro. Dalam Prosiding Kongres IV dan Simposium Nasional PERIPI. Yogyakarta. Hal. 283-286 Zearr, J.B dan M.O. Mapes, 1985. Action of Growth Regulator in Tissue in Tissue Culture in Forestry. Bonga J.M. dan Durzan, D.J. (Ed), M Nijhoff & W. Junk Publ. The Hague, The Netherland, p :231251


PENGARUH STERILAN DAN WAKTU PERENDAMAN PADA EKSPLAN DAUN KENCUR ( Kaemferia galanga L) UNTUK MENINGKATKAN KEBERHASILAN KULTUR KALUS ABSTRAK

Recommend Documents