Mahakam Medical Laboratory Technology Journal Volume II No.1, Mei 2017, Hal 27-36

Mahakam Medical Laboratory Technology Journal

Volume II No.1 , Mei 2017, Hal 27 - 36

IDENTIFIKASI METABOLIT SEKUNDER DAN AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DARI DAUN MOJO (Aegle Marmelos L.) TERHADAP RADIKAL BEBAS DPPH (1,1 Difenil-2-pikrilhidrazil) Ahmad Purnawarman Faisal, Azhari Analis Kesehatan, Poltekkes Kemenkes Kaltim, Jl. Kurnia Makmur No.64 Abstract Antioxidants are compounds which can inhibit oxidation reactions by binding the free radicals and highly reactive molecules. Mojo (Aegle marmelos L.) contains saponins, tannins, flavonoids, and alkaloids. The existence of flavonoid compound in Mojo leaves triggered the researcher to conduct a research with the aim to know the antioxidant activity on fraction of nhexane, ethyl acetate fraction, water fraction and ethanol extract to DPPH radical with parameter of IC50 and to know the fraction of ethanol extract of mojo leaf which has the highest antioxidant activity. Mojo leaf powder is macerated using ethanol. The ethanol extract was then fractionated with n-hexane, ethyl acetate and water solvents to separate the compounds based on their polarity. The compound content in the fractions and extracts were analyzed by KLT. The fraction and extract obtained were tested for their antioxidant activity against DPPH radical using spectrophotometer at 517 nm wavelength and determined IC50 price to be used as a positive control in this study. The results showed that the fraction of n-hexane, ethyl acetate fraction, water fraction and ethanolic extract had IC50 value of 76.14 ppm; 48.13 ppm; 59.71 ppm; 65.67 ppm. The ethyl acetate fraction has the highest antioxidant activity. Keywords: Aegle marmelos L., Antioxidant, DPPH, Mojo

Abstrak Antioksidan merupakan senyawa yang dapat menghambat reaksi oksidasi, dengan mengikat radikal bebas dan molekul yang sangat reaktif. Mojo (Aegle marmelos L.) mengandung saponin, tanin, flavonoid, dan alkaloid. Adanya senyawa flavonoid maka dilakukan penelitian ini dengan tujuan untuk mengetahui aktivitas antioksidan pada fraksi n-heksana, fraksi etil asetat, fraksi air dan ekstrak etanol terhadap radikal DPPH dengan parameter IC 50 dan untuk mengetahui fraksi dari ekstrak etanol daun mojo yang memiliki aktivitas antioksidan paling tinggi. Serbuk daun mojo dimaserasi menggunakan etanol. Ekstrak etanol kemudian difraksinasi dengan pelarut n-heksana, etil asetat dan air untuk memisahkan senyawa berdasarkan polaritasnya. Fraksi dan ekstrak dianalisis kandungan senyawa secara KLT. Fraksi dan ekstrak yang didapatkan diuji aktivitas antioksidannya terhadap radikal DPPH menggunakan alat spektrofotometer pada panjang gelombang 517 nm dan ditentukan harga IC50. Rutin digunakan sebagai kontrol positif dalam penelitian ini. Hasil penelitian menunjukan fraksi n-heksana, fraksi etil asetat, fraksi air dan ekstrak etanolik memiliki nilai IC50 sebesar 76,14 ppm ; 48,13 ppm ; 59,71 ppm ; 65,67 ppm. Fraksi etil asetat mempunyai aktivitas antioksidan yang paling tinggi. Kata kunci: Aegle marmelos L., Antioksidan, DPPH, Mojo

27



PENDAHULUAN Indonesia kaya akan berbagai

sel-sel tubuh kita sehingga terjadilah

macam tumbuhan obat. Dari sekitar

berbagai penyakit (Khomsan 2009).

30.000 spesies tumbuhan Indonesia,

Dampak reaktivitas senyawa radikal

sekitar 940 di antaranya adalah

bebas bermacam-macam, mulai dari

tumbuhan

kerusakan sel atau jaringan, penyakit

obat.

Tumbuhan

obat

sebagai obat asli Indonesia, sudah

autoimun,

ada sejak zaman nenek moyang kita

hingga kanker (Winarsi 2007).

yaitu

digunakan

memelihara mengobati

penyakit

degeneratif,

dalam

upaya

Senyawa antioksidan dalam

kesehatan

dan

makanan mempunyai fungsi penting

penyakit.

Masyarakat

untuk

melindungi

kesehatan.

Indonesia telah lama memanfaatkan

Antioksidan adalah susbstansi yang

tumbuhan

menetralkan radikal bebas (Yuliarti

obat

sebagai

obat

tradisional. Obat tradisional adalah

2009).

bahan atau ramuan bahan yang

senyawa

berasal

reduktan.

dari

tumbuh-tumbuhan,

Antioksidan pemberi

merupakan

elektron

Antioksidan

merupakan

(galenik) atau campuran dari bahan

menghambat reaksi oksidasi dengan

tersebut yang secara turun temurun

mengikat radikal bebas dan molekul

telah digunakan untuk mengobati.

yang sangat reaktif, akibat kerusakan

penemuan

yang

yang

juga

hewan, dan mineral, sedia sarian

Banyak

senyawa

atau

dapat

sel akan dihambat (Winarsi 2007).

menunjukkan bahwa perkembangan

Antioksidan

penyakit disebabkan oleh radikal

perolehannya

bebas. Radikal bebas ini berbahaya

macam yaitu antioksidan alami dan

karena

antioksidan

sangat

reaktif

mencari

pasangan elektronnya. Terbentuknya

reaksi

berantai

dan

dibagi

sumber

menjadi

buatan

2

(sintetik)

(Dalimartha dan Soedibyo 1999).

radikal bebas dalam tubuh akan terjadi

berdasarkan

Salah satu tumbuhan obat yang

ada

di

Indonesia

adalah

menghasilkan reaksi radikal bebas

tumbuhan mojo (Aegle marmelos L.).

baru

bertambah

Tumbuhan mojo juga merupakan

banyak, selanjutnya akan menyerang

tumbuhan yang digunakan sebagai

yang

akhirnya

28



obat tradisional. Buah mojo dapat

Antioksidan

dimakan langsung atau dibuat serbat,

perolehannya

sirup dan nektar buah. Buah yang

macam yaitu antioksidan alami dan

matang dapat di iris-iris, dikeringkan,

antioksidan

dan digunakan sebagai obat disentri

(Dalimartha dan Soedibyo 1999).

kronis, diare, dan sembelit. Kulit buah

mentah

dapat

digunakan

berdasarkan dibagi

menjadi

buatan

Antioksidan oksidasi

sumber 2

(sintetik)

menghambat

molekul

lain

dengan

sebagai cat kuning dan sebagai agen

mekanisme

tanin. Daun ini digunakan untuk

berantai dari radikal bebas yang

meracuni ikan. Akar mojo digunakan

terdapat

sebagai obat penenang debar jantung,

kerusakan

sel-sel

gangguan pencernaan dan maag.

dihindari.

Antioksidan

Daun, akar, dan daun kulit mojo

golongan

polifenol,

(Aegle marmelos L.) mengandung

vitamin C, vitamin E dan karotenoid

saponin, disamping itu akar dan

(beta karoten, likopen, dan lutein)

Daunnya mengandung flavanoid dan

mempunyai peran penting dalam

polifenol

membantu

dan

daunnya

juga

mengandung tanin.

memutuskan

dalam

tubuh

reaksi

sehingga

tubuh

bisa seperti

flavonoid,

pencegahan

kerusakan

sel-sel akibat adanya radikal bebas

Senyawa antioksidan dalam

(Hermani

dan

Rahardjo

2005).

makanan mempunyai fungsi penting

Tubuh manusia tidak mempunyai

untuk

kesehatan.

cadangan antioksidan dalam jumlah

Antioksidan adalah susbstansi yang

berlebih, jika terjadi paparan radikal

menetralkan radikal bebas (Yuliarti

berlebih,

2009).

antioksidan eksogen (Sunarni 2005).

melindungi

Antioksidan

senyawa reduktan. merupakan

pemberi

merupakan

elektron

Antioksidan senyawa

yang

atau

Berbagai

juga

sekitar

tubuh

tanaman kita

membutuhkan

tradisional

dapat

di

dimanfaatkan

dapat

sebagai sumber antioksidan untuk

menghambat reaksi oksidasi dengan

meredam radikal bebas (Hermani dan

mengikat radikal bebas dan molekul

Rahardjo 2005).

yang sangat reaktif, akibat kerusakan sel akan dihambat (Winarsi 2007).

Salah menentukan

satu aktivitas

uji

untuk

antioksidan

29



penangkapan radikal adalah metode

tumbuhan ini

DPPH

lainnya,

(1,1-difenil-2-pikrilhidrazil)

dan

memiliki

aktivitas

pada

penelitian

sebagai radikal bebas stabil yang

Meirinda Tika tahun 2013 dilakukan

ditetapkan secara spektrofotometri.

pengujian dasar untuk menentukan

Metode

memberikan

bioaktivitas dari tumbuhan ini. Salah

informasi reaktivitas senyawa yang

satu cara untuk menguji bioaktivitas

diuji dengan suatu radikal stabil.

ekstrak tumbuhan sebagai antikanker

Difenil

yaitu dengan metode BSLT (Brine

DPPH

pikrilhidrazil

memberikan

serapan

(DPPH) kuat

pada

Shrimp Lethality Test). Bioaktivitas

panjang gelombang 517 nm yang

adalah

diikuti reaksi reduksi oleh senyawa

senyawa

antioksidan (Pokorny et al. 2001).

dalam

Penangkapan

radikal

bebas

memberikan

menyebabkan

elektron

menjadi

berpasangan

yang

menyebabkan

suatu

kemampuan

aktif

yang

tumbuhan

terkandung yang

ini

diketahui

bahwa

dengan jumlah elektron yang diambil

bioaktivitas

(Sunarni 2005). Difenil pikrilhidrazil

dalam hal ini larva udang.

(DPPH) merupakan senyawa radikal stabil

terhadap

organisme tertentu. Dari penelitian

tumbuhan

yang

dapat

pengaruh

penghilangan warna yang sebanding

bebas

suatu

ekstrak

mojo

memiliki

terhadap

organisme

Dari hasil ini maka dapat

dalam

dikembangkan ke penelitian lebih

penyimpanannya apabila disimpan

lanjut untuk mengisolasi senyawa

dalam bentuk kering dan dalam

aktivitas tumbuhan sebagai usaha

kondisi penyimpanan yang baik.

pengembangan obat alternatif dan

Metode ini cukup sederhana dan

dapat

mudah dikerjakan (Windono et al

penelitian lebih lanjut untuk meneliti

2001).

khasiat-khasiat Berdasarkan penelitian Sri

dikembangkan

lain

juga

dari

ke

ekstrak

tersebut (Hendrawati, 2009).

Nur Cahyati tahun 2008 diketahui bahwa ekstrak daun mojo memiliki aktivitas sebagai larvasida, tetapi belum

dapat

diketahui

apakah

METODE PENELITIAN Tahapan penelitian ini adalah menetapkan

kebenaran

sampel

30



tumbuhan mojo berkaitan dengan

konsentrasi

yang

pembacaan

ciri-ciri tumbuhan mojo, Identifikasi

absorbansi adalah 0,2-0,8.

Setiap

tumbuhan dilakukan di Fakultas

konsentrasi

dipipet

Kehutanan Universitas Mulawarman.

sebanyak

larutan 4,0

uji

ml,

kemudian

Daun mojo yang digunakan

ditambahkan dengan 1 ml larutan

adalah daun yang telah kering dari

pereaksi DPPH 0,45 mM dalam vial,

daerah Sebulu, Kutai Kartanegara.

dan didiamkan selama 30 menit

Simplisia disimpan dalah wadah

kemudian

kering

yang

pada panjang gelombang maksimum

selanjutnya siap digunakan untuk

yang telah ditentukan (517 nm).

penelitian.

Percobaan

tertutup

rapat

Ekstrak etanol Daun mojo masing-masing

absorbansinya

dilakukan

pengulangan

juga

3

kali

pengamatan

0,0250

terhadap larutan kontrol dari 4 ml

gram, kemudian dilarutkan dengan

metanol ditambah 1 ml DPPH 0,45

metanol

mM.

p.a

dihitung

diamati

sampai

larut

dan

dimasukkan ke dalam labu ukur 50

Analisis

data

hasil

ml, selanjutnya ditambahkan metanol

pengukuran

p.a sampai tanda batas sehingga

diperoleh

didapat konsentrasi 500 ppm, maka

untuk

larutan ini yang disebut dengan

aktivitas penangkap radikal bebas

larutan stok. Konsentrasi larutan uji

dari berbagai konsentrasi uji. Harga

dibuat dengan memipet larutan stok

IC50 dihitung dari persamaan regresi

untuk mendapat 5 seri konsentrasi.

linear antara probit dari persen (%)

Pembuatan

peredaman radikal (% radikal) versus

larutan

stok

rutin

dilakukan dengan cara menimbang 0,0125 dilarutkan

gram

rutin

dengan

absorbansi selanjutnya

menghitung

yang

digunakan prosentase

logaritma berbagai konsentrasi uji.

kemudian

metanol

p.a

HASIL DAN PEMBAHASAN

sampai larut dan dimasukkan ke

Daun mojo sebanyak 4500

dalam labu ukur 25 ml, selanjutnya

gram dikeringkan pada suhu 40°C

ditambah metanol p.a sampai tanda

dan diperoleh 640 gramdaun kering

batas dan selanjutnya dibuat 5 seri

dengan

rendemen

14,22

31


%b/b.Pengeringan

daun

mojo


%

b

/bdari 400 gram serbuk daun

dilakukan pada suhu 40°C dalam

mojo. Ekstrak etanol daun mojo yang

oven, apabila pengeringan suhu lebih

diperoleh

dari

50°C

dikhawatirkan

terjadi

kerusakan pada kandungan senyawasenyawa

aktif

pada

kemudian

dilakukan

fraksinasi dengan n-heksana, etil asetat, dan air.

simplisia.

Hasil rendemen dari fraksi n-

pengeringan

heksana, fraksi etil asetat, fraksi air,

menggunakan oven adalah suhu bisa

dan ekstrak etanol daun mojo dapat

diatur sesuai keinginan.

dilihat pada tabel berikut

Kelebihan

Didapatkan

15,10

gram

ekstrak etanol dengan rendemen 9,05 Tabel 1 Hasil rendemen dari masing-masing fraksi Berat ekstrak (gram)

Fraksi

nheksana 15,1075 etil asetat air Sumber: Data Primer Berdasarkan tabel,

Berat cawan

Cawan + zat

Zat

Rendemen (%b/b)

23,0505 23,0506 32,1261

24,4143 23,7879 47,1328

1,3638 0,7370 13,0067

9,03 4,88 86,09

terdapat

senyawa

kimia

pada

fraksi

n-

hasil rendemen dari masing-masing

heksana, fraksi etil asetat, fraksi air

fraksi adalah rendemen fraksi n-

dan

heksana 9,03 % b/b, fraksi etil asetat

Senyawa yang diidentifikasi antara

4,88 % b/b, fraksi air 86,09 % b/b.

lain flavonoid, saponin, tanin dan

Rendemen terlihat bahwa ekstrak

alkaloid. Hasil kromatografi lapis

etanol daun mojo paling banyak

tipis (KLT) pada fraksi n-heksana,

mengandung senyawa polar dan

fraksi etil asetat, fraksi air dan

paling sedikit mengandung senyawa

ekstrak etanol daun mojo dapat

semipolar.

dilihat pada tabel.

Identifikasi lapis

tipis

mengetahui

ekstrak

etanol

daun

mojo.

kromatografi

bertujuan kandungan

untuk senyawa-

Tabel 2 Hasil identifikasi kromatografi lapis tipis

32


Fase diam

No

Senyawa

Larutan uji

A.

Flavonoi d

1. Ekstrak 2. F. nheksana 3. F. etil asetat 4. F. Air 1. Ekstrak 2. F. nheksana 3. F. etil asetat 4. F. air

B.

Saponin

C.

Tanin

D.

1. Ekstrak 2. F. nheksana 3. F. etil asetat 4. F. air

Selulos a

Silika GelGF25 4

Silika GelGF25 4

Alkaloid

1. Ekstrak 2. F. nheksana 3. F. etil asetat 4. F. air Sumber: Data Primer

Hasil kromatografi

Silika GelGF25 4


Fase gerak

Rf

Pereaksi

Warna

0,80 Butnol : 0,76 a. asetat 0,73 :air 0,83

Sitroborat

Kuning

Klrofrm: 0,80 metanol: 0,75 air 0,70 0,76

Anisaldehid

Kuning lemah

0,78 Butnol : 0,71 a. asetat 0,35 :air 0,76 Metanol: etil 0,91 asetat -

identifikasi lapis

tipis

FeCl3 1%

Dragendrof

Pengukuran

Hijau lembayun g

Kuning jingga

panjang

(KLT)

gelombang maksimum DPPH yang

masing-masing kandungan senyawa

didapatkan pada penelitian ini adalah

dapat

bahwa

517nm dengan absorbansi sebesar

tumbuhanmojo (Aegle marmelos L.)

0,834. Grafik panjang gelombang

mengandung

maksimum DPPH 0,45 mM dapat

disimpulkan

senyawa

flavonoid,

saponin, tanin pada ekstrak maupun

dilihat pada gambar 1

fraksi-fraksi

Hasil

sedangkan

alkaloid

pengujian

konsentrasi

terdapat pada fraksi etil asetat.

peredaman DPPH

dan aktivitas

Bercak yang timbul pada lempeng

antioksidan

KLT kemudian dihitung nilai Rf dan hRfnya

untuk

mengetahui

keberadaan kandungan senyawa pada

Hubungan konsetrasi larutan uji terhadap peredaman DPPH dapat dilihat pada tabel 3.

ekstrak dan masing-masing fraksi. Tabel 3. Hubungan konsentrasi larutan uji terhadap peredaman DPPH NO 1

Larutan uji Ekstrak

Konsentrasi (ppm) 100 80 60 40

Rata-rata peredaman (%) 63,15 52,92 46,64 38,49

33


2

Fraksi heksana

3

Fraksi etil asetat

4

Fraksi air

5

Rutin

n-


20 120 100 80 60 40 80 60 40 20 10 100 80 60 40 20 10 8 6 4 2

20,62 72,46 63,67 47,88 38,61 22,58 64,86 55,09 41,22 30,13 16,43 70,95 62,90 43,91 34,41 16,75 66,11 63,71 49,58 38,21 19,16

Berdasarkan tabel 3, terlihat

Berdasarkan data konsentrasi

bahwa aktivitas peredaman radikal

uji dan persen peredaman dapat

yang paling kuat adalah fraksi etil

disimpulkan

asetat

meredam

hubungan yang berbanding lurus

radikal bebas dengan konsentrasi

antara konsentrasi dengan persen

terkecil yaitu 10 ppm dilanjutkan

peredaman, yaitu semakin tinggi

dengan fraksi air dan ekstrak etanol

konsentrasi larutan uji maka semakin

dengan konsentrasi 20 ppm dan yang

tinggi juga persen peredamannya.

memiliki aktivitas peredaman paling

Pengujian

kecil dibandingkan fraksi etil asetat,

larutan uji pada fraksi n-heksana,

fraksi air dan ekstrak etanol dengan

fraksi etil asetat, fraksi air dan

konsentrasi 40 ppm yaitu fraksi n-

ekstrak etanol dilakukan 3 replikasi

heksana.

keseluruhan

tiap konsentrasi. Rutin digunakan

aktivitas peredaman radikal yang

sebagai pembanding dalam metode

kuat adalah rutin hal ini disebabkan

DPPH ini disebabkan karena rutin

karena rutin merupakan senyawa

telah diketahui sebagai glikosida

murni sedangkan ekstrak etanol dan

flavonoid

masing-masing

aktivitas antioksidannya.

karena

mampu

Secara

fraksi

merupakan senyawa murni.

bukan

bahwa

prosentase

yang

sudah

adanya

peredaman

terbukti

Metode DPPH memberikan

34



informasi reaktivitas senyawa yang

antioksidan tumbuhan mojo dapat

diuji dengan suatu radikal stabil.

diambil kesimpulan: (1) rendemen

Proses peredaman radikal bebas oleh

fraksi n-heksana 9,03 % b/b, fraksi

senyawa antioksidan dapat dilihat

etil asetat 4,88 % b/b, fraksi air 86,09

dari perubahan warna violet larutan

% b/b.

DPPH menjadi warna kuning diikuti

ekstrak etanol daun mojo paling

penurunan serapan pada panjang

banyak mengandung senyawa polar

gelombang

517

dan

pengukuran

panjang

maksimum

dapat

nm.

Hasil

gelombang dilihat

lampiran

7.

Perubahan

tersebut

menunjukkan

Rendemen terlihat bahwa

paling

sedikit

mengandung

senyawa semipolar. (2) Fraksi n-

pada

heksana, fraksi etil asetat, fraksi air

warna

dan ekstrak etanol daun mojo secara

adanya

berturut-turut

memiliki

aktivitas antioksidan yang dapat

antioksidan

dilihat

persentase

76,14 ppm, 48,13 ppm, 59,71 ppm,

peredamannya. Radikal bebas DPPH

65,67 ppm. (3) Fraksi etil asetat

akan mengambil atom hidrogen yang

adalah

terdapat pada suatu senyawa.

aktivitas antioksidan paling tinggi.

dari

Proses

perubahan

dengan

aktivitas

fraksi

yang

IC50 sebesar

mempunyai

warna

yang terjadi karena berkurangnya

UCAPAN TERIMA KASIH

ikatan rangkap terkonjugasi pada

Terima kasih saya ucapkan

DPPH. Hal ini terjadi apabila adanya

untuk semua anggota yang telah

penangkapan satu elektron oleh zat

membantu keterlaksanaan penelitian

antioksidan,

ini.

menyebabkan

tidak

adanya kesempatan elektron untuk beresonansi. Reaksi DPPH dapat

DAFTAR PUSTAKA

dilihat pada gambar 3.

SIMPULAN Berdasarkan hasil penelitian tentang sekunder

identifikasi dan

uji

Abbas AK and Lichtman AH. 2002., Cellular and molecular immunology, 6th edition. Philadelphia: Elsevier Science.

metabolit aktivitas

Ahmad

N. 2006. Fakultas

Fitokimia II. Farmasi. 35


Universitas Indonesia

Muslim

Ansel HC. 1989. Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi. Ibrahim F, penerjamah; Jakarta: UI Press. Terjemahan dari: Pharmaceutical Dosage Forms, and Drug Delivery System.


Ethnbot. Med. Plants India and Nepal, Scientific Publishiers, Jodhpur, 2935. Wijayakusuma H. 1994. Tanaman Berkhasiat Obat Indonesia. Jilid 3. Jakarta: Pustaka Kartini

Backer. C. A. & R. C. Bakhuizen van den Brink, Jr. 1968. Flora of Java. Dahlan, S.M. 2008, Statistik untuk Kedokteran dan Kesehatan, Edisi V, 1-112, Salemba Medika, Jakarta.

Dhankhar. S. 2011. Aegle marmelos (Linn.) Correa: A Potential Source of Phytomedicine, Journal of Medicinal Plants Research, Vol 5(9) Flora

E. 2011. Tanaman Obat Indonesia untuk pengobatan Herbs Medicine Herba Tanaman Obat,Indonesia

Gandjar I.G. dan Rohman A. 2007. Kimia Farmasi Analisis. Cetakan III. Pustaka Pelajar; Yogyakarta Ganong

W.F. 1979. Fisiologi Kedokteran. Penerbit BUku Kedokteran EGC., Jakarta.

George KV. Mohanan N. 2003. Ethnobotanical investigations of Aegle marmelos (Linn.) Corr. in:

36

Mahakam Medical Laboratory Technology Journal Volume II No.1, Mei 2017, Hal 27-36

Recommend Documents