Iridovírus izolálása törpeharcsából Magyarországon Juhász Tamás, Woynárovichné Láng Mária, Csaba György, Dán Ádám NÉBIH Állategészségügyi Diagnosztikai Igazgatóság 2013. január 29.
Iridovírus
• • • • • • • •
CSALÁD: IRIDOVIRIDAE Ikozahedrális szimmetria dsDNS Virion átmérője:125-300 nm A pelletizált vírus szivárványosan irizál A gerincesekben-burkos, ízeltlábúakban-burok nélküli Ellenálló Sejttenyészeten szaporítható, citopatogén hatású
IRIDOVÍRUSOK – Chloriridovirus Invertebrate iridescent v.: rovarok összesen 3 v. – Iridovirus Invertebrate összesen 36 v. Lymphocystivirus Bőrbetegség összesen 5 v. – Megalocytivirus Szisztémés megbetegedés Infectious spleen and kidney necrosis v. összesen 29 v. – Ranavirus: Epizootic haematopoietic necrosis v. European catfish v. összesen 49 v. – Unclassified Iridoviridae összesen 33 v.
A Szeged melletti Maty-éri 4 hektáros víztározó
A járvány kitörése • Előzmény: 1 héttel a járvány kitörés előtt nagyarányú vízfeltöltés történt a Tiszából. • Megfigyelés: 2008 májusában jelentek meg az első klinikai tünetek: gyertyázó testtartás, letargia, majd a gyors lefolyású megbetegedést a törpeharcsák tömeges elhullása követte. A tóban élő többi halfaj nem betegedett meg. Vérzések a kopoltyúlemezeken és - fedő belső oldalán, bőrön, végbél nyílás kitüremkedés.
Anyag és Módszer • Vizsgálati anyag 11 db 15 -20 cm-es törpeharcsa szervei • Kórbonctan – szövettan Haematoxilin – eosin festés • Vírusizolálás BF-2 (Bluegill fibroblast = Kék kopoltyús naphal) EPC (Epithelioma papulosum cyprini) PCR gél alapú, lép, máj, vese poolozva Hyatt et al., 2000 MCP (major capsid protein gén): 580 bp nagyságú amplikon Szekvenálás Sanger módszer Elkülönítő kórjelzés Virológiai vizsgálatok: SVCV ag. ELISA, CCV PCR Baktérium tenyésztés: Veséből felkenés véres agarra Parazitológiai vizsgálat: Testfelület és kopoltyú kaparékból
Kórbonctan • Lépduzzanat, pontszerű vérzések, elhalások a bőrön és a belső szervekben
Vérzések a hasfalon és a bélfalban
Vérzések a kopoltyú lemezeken
Kórszövettan • Májsejt elhalás
vese: bazofil citoplazma zárvány
Lép bővérűség
Kopoltyú bővérűség, hámsejt elhalás
Vírusizolálás •
Mindkét sejtvonalon volt vírus multiplikáció azonos mértékű sejt fogékonyság: Vírus titer: BF-2
10E5,8 TCID50/ml
EPC
10E5,5 TCID50/ml
Sejtkárosodás BF-2 sejttenyészeten
bazofil citoplazma zárványok
A vírus azonosítása • PCR Mind az eredeti szervek mind a sejttenyészet felülúszója tartalmazta a törpeharcsa ranavírus DNS-ét
580 bp • Szekvenálás gb AF157679 Sheetfish iridovirus capsid protein gene, partial cds Length=586 , Score = 660 bits (569), Expect = 0.0 Identities = 571/573 (99%), Gaps = 0/573 (0%) A génbankban 2012. 03. 30-án JF748832 számon lett regisztrálva
ELKÜLÖNÍTŐ KÓRJELZÉS • Virológiai vizsgálatok SVCV ag ELISA negatív és sejtlekerekedés nem volt jellemző CCV PCR negatív • Baktérium tenyésztés Aeromonas hydrophylia 4 esetben (fekélyek a bőrön, uszony és farok rothadás, szeptikémia) • Parazitológia negatív: Trichodina Chilodonella Kopoltyú és hámférgesség Darakór Bélférgesség
Megbeszélés
• Az ECV-t első alkalommal fekete törpeharcsából Ameiurus melas izolálták Franciaországban (Pozet at al. 1992.) • Az ECV az Iridoviridae családon belül a Ranavirus nemzetséghez tartozik. Szoros rokonságban van az EHN (Epizootic Haematopoietic Necrosis) vírussal, amely halakban bejelentési kötelezettség alá tartozó megbetegedést okoz. Az ECV és az EHNV vírusok MCP génjeinek nukleotid szekvencia analízisével különböztethetők csak meg egymástól! • Az előző évtizedben Magyarországon több esetben tapasztalták törpeharcsák hirtelen tömeges elhullását, melynek okát herpesz vírusnak tulajdonították. Az ECV kóroktani szerepét Magyarországon első alkalommal sikerült bizonyítanunk. Az ECV a természetben csak a törpeharcsát betegíti meg. A betegség nem bejelentendő.
Köszönöm figyelmüket!
