HORMONÁLIS SZABÁLYOZÁS ÉLETTANA A
neuro-endokrin
rendszer
mediátor
anyagokkal
és
hormonokkal
szabályozza a szervezet mőködését. Az un. klasszikus hormonok endokrin mirigyekben termelıdnek és a vérárammal jutnak el a szabályozott sejtekig, szövetekig. Ma már a hormon fogalom kibıvült: a külön mirigyet nem alkotó sejtek, sejtcsoportok véráramba bocsátott szabályozó anyagait, vagy hormon elıanyagaiból más szövetekben képzıdött vegyületeit is hormonnak nevezzük (pl.: angiotenzin
II,
enterális
peptidek,
1,25
dihidroxi-kolekalciferol,
vagy a
neurohormonok és a szöveti, helyi, illetve lokális hormonok). A hormonok kis koncentrációban is erıs hatást kiváltó aminosav-származékok, peptidek, összetett fehérjék (glikoproteidek), vagy szteránvázas vegyületek. A hormonkoncentráció meghatározható biológiai módszerrel (bioassay). Nemzetközi megállapodás (Egészségügyi Világszervezet-WHO) alapján egy adott biológiai
hatás
eléréséhez
szükséges
standard
preparátum
mennyiségét
1 nemzetközi egységnek (NE, illetve International Unit -IU) nevezzük. A szintetikusan elıállítható hormonoknál a nemzetközi egység az adott hormon meghatározott tömegét jelenti. A ng és pg nagyságrendő hormonmennyiségek meghatározására a kompetitív fehérjekötéses analízist (protein binding assay), illetve a radioimmunoassayt (RIA) használják. (A RIA a hormont kötı fehérje és az ellene termelt antitest immunreakcióján alapul, az antitest kötıdési helyeiért az ismeretlen mennyiségő, nem jelzett és az ismert mennyiségő, rádióaktív hormon versenyez.)
Terhesség kimutatása a hCG (humán koriongonadotrop hormon) hatásai és immunológiai tulajdonságai alapján A szinciotrofoblasztban, valamint a korionbolyhokban termelıdı hCG-nek (galaktózt és hexózamint tartalmazó glikoproteid) luteinizáló és luteotrop (corpus luteum képzıdést és fenntartást kiváltó) hatása van. Szekréciója még a pete beágyazódása elıtt megindul, az adott napra várt, de elmaradt menstruációt követı hatodik-tizedik napon, azaz a terhesség 20-24. napján már kimutatható a vizeletbıl (a hCG-nek viszonylag kicsi a móltömege, ezért átjut a glomerulus-membránon,
86
így bejut a vizeletbe). Az ürítés a terhesség 40-60. napján éri el a maximumát (50 000-300 000 NE hCG/24 óra). A terhesség 70-80. napja körül a hCG ürítés gyorsan csökken és a terhesség végéig kb. 10-20 NE ürül naponta. Szülés vagy vetélés után 5-6 nappal a hCG ürítés már a kimutatható szint alá csökken. 1. A terhes vizelet hCG tartalmának hatása kísérleti állatok gonádjairaBiológiai próbák Anyagok és eszközök: hím kecskebéka, terhes vizelet, szemcseppentı A biológiai próbák közül − bonyolultságuk és áruk miatt−az AscheimZondek és a Friedmann reakciót ma már a gyakorlatban nem használják, de a GalliMainini reakciót még alkalmazzák. Az Ascheim-Zondek és a Friedmann reakció lényege az, hogy infantilis nıstény egereken, illetve nyulakon a terhes vizelet hCG tartalmának hatására az ováriumokban érett tüszık, bevérzett és luteinizált follikuluszok alakulnak ki. Galli-Mainini-reakció elvégzéséhez hővös helyen tartott, kifejlett, hím kecskebékákat (Rana esculenta) használunk. A hCG nem nemi specifikus hatású hormon, hím békák bıre alá juttatva a terhes vizeletet, heréikben spermiumképzést és ürítést vált ki. 3-4 ml szőrt, (0,1 M HCl oldattal gyengén savanyított) terhes vizeletet fecskendezünk két béka hátoldali limfazsákjába. Két óra múlva a kloakájukból vékony szemcseppentıvel vizeletet veszünk és 1-1 cseppet tárgylemezre cseppentve, mikroszkóppal megvizsgáljuk. A vizelet ürítését stimulálhatjuk, ha a béka hátsó lábait a hasához nyomjuk és a kloákát ingereljük. Kontrollként férfi vizelettel beinjektált állatot használhatunk. Tavasszal az állatokat a kísérlet elıtt meg kell vizsgálni, mert vizeletük tartalmazhat spermiumokat. Megfigyelés: Pozitív az eredmény akkor, ha számos mozgó hímivarsejtet találunk. A hímivarsejtek hosszúkás feje jól látható, a farokrész kevésbé. A beadott vizeletnek minimum 5-15 NE hCG-t kell tartalmaznia, hogy spermium ürüljön. Ez a koncentrációs érték a terhes nı vizeletében a menstruáció kimaradása után kb. nyolc nappal alakul ki. A próba kb. 90 %-os megbízhatóságot ad. A kísérleti állatok egy hét elteltével ismét használhatók.
87
2. Immunológiai tesztek Az immunológiai tesztekben in vitro vizsgáljuk a vizelet hCG tartalmát specifikus ellenanyagok segítségével. Korábban a hemagglutináció-gátlási teszteket (fiolás Menotest, vagy lemezes Pregnostic, Organon-teszt) részesítették elınyben, ma inkább a hCG latex-tesztet alkalmazzák. A hemagglutináció-gátlási tesztek mőködési elve a következı: hCG-vel jelzett vörösvértestek hCG ellenes antitestek hatására agglutinálnak, ez a reakció hCG jelenlétében (terhes vizelet) elmarad.
Nőstény patkány ösztruszciklusának vizsgálata Anyagok és eszközök: fecskendı, tárgylemez, Pasteur pipetta, szemcseppentı, mikroszkóp, etil-alkohol, éter, Giemsa-oldat A subprimates fajoknál - bár nincs menstruáció - az ivari ciklus alatt, melyet ösztruszciklusnak nevezünk, jellegzetes változások mennek végbe az ováriumban, az uterusban és a vaginában. A hormonális szabályozás hatására az ivari ciklus négy, egymástól jól elkülöníthetı szakaszra osztható. A ciklus legfeltőnıbb szakasza az ösztrusz (tüzelés), amikor az ivarérett nıstény állatok közösülésre hajlamosak és megtermékenyülhetnek. Az ösztrusz a Graaf-tüszı megérésével és legtöbb fajnál a spontán ovuláció bekövetkezésével kapcsolatos. A nıstény patkány poliösztruszos faj, ösztrusza 5-8 naponként jelentkezik és 4-5 napig tart. A ciklus egyes stádiumait a hüvelybıl vett kenet mikroszkópos vizsgálata alapján azonosíthatjuk, mert a hüvely osztódó sejtjeinek proliferációja a hormonális szabályozásnak megfelelıen változik. A hüvelyben leváló hámsejtek mennyisége és típusa tehát a hormonszekréció változásaitól függ. Ivarérett, nıstény patkány hüvelyébe kb. 2-3 mm mélyen 2-3 csepp fiziológiás sóoldattal töltött Pasteur pipettát vezetünk be. A NaCl oldatot becseppentve, hüvelyváladékot szívunk ki. A mintát tárgylemezre cseppentjük, levegın vagy gáz felett megszárítjuk. A beszáradt cseppet 96 %-os alkohol és éter 1:1 arányú keverékével vagy láng felett fixáljuk, majd Giemsa oldattal (metilénazúr-eozin) festjük 3-5 percig. Forró vízzel lemossuk és desztillált vízzel
88
átöblítjük, majd leitatjuk. Vizsgáljuk meg mikroszkóp alatt a keneteket és állapítsuk meg az állat ciklusának stádiumát! Megfigyelés: A metilénazúr a fehérvérsejtek és hámsejtek magvait kékre, az eozin a hámsejteket rózsaszínőre festi. A ciklus elsı felénél az ösztrogénszint emelkedésének hatására sok új sejt képzıdik és érik (proliferáció), ezért a proösztruszban (1/A ábra) a vaginából vett kenetben sok, szabályos alakú, magvas hámsejt (valamint néhány leukocyta), ösztruszban (1/B ábra) pedig sok, nagy, szabálytalan alakú, elszarusodott, magvatlan hámsejt található. A ciklus második felében (metösztrusz, leépítési szakasz, 1/C ábra) a progeszteron gátolja az ösztrogén proliferatív hatását, ezért a kenetben az érett, magvatlan sejtek száma csökken, így kevés elszarusodott hámsejt és sok fehérvérsejt látható. A metösztrusz és a következı proösztrusz közötti nyugalmi periódus a diösztrusz (1/D ábra), vagy másnéven anösztrusz, amikor a kenet sejtszegény, kevés fehérvérsejttel. Meg kell említeni, hogy az egyes fázisok között az átmenet folyamatos, a fent említett állapotok akkor érvényesek, ha a kísérleti állat az adott fázis idıtartamának közepén van. Gyakran csak a legnagyobb számban elıforduló sejtek (domináns sejtek) alapján következtethetünk a fázis aktuális állapotára.
89
1 ábra. Patkány hüvelykenetében látható sejtek az ösztruszciklus egyes fázisai alatt
Vizsgálatainkhoz a fent említett eljárástól eltérı festési metodikát is alkalmazhatunk. A kísérleti állatokból – a fent említettekkel megegyezıen hüvelykeneteket
veszünk,
majd
speciális
festékkel
(hematoxilin,
orange,
Papanikolau) megfestjük. Kenet készítése és festése: 1. kenet levétele oltókacs segítségével 2. kenet készítése 3. a kenet szárítása szobahımérsékleten 4. fixálás éter - alkoholban (1 : 1 arányú keverék) 10 perc 5. szárítás szobahımérsékleten 10 perc 6. hematoxilin festés 5 perc 7. Li2CO3 -os csapvizes kékítés 5 perc 8. differenciálás 96 %-os alkoholban 9. orange festés 7 perc 10. differenciálás 96 %-os alkoholban 11. Papanikolau oldattal festés 10 perc 12. víztelenítés felszálló alkoholsorozatban (3 – 3 perc) 13. világítás kétszer váltott xilolban (3 – 3 perc) 14. fedés DPX –el A megszáradt kenetet mikroszkóppal (kis nagyítás) vizsgáljuk Rajzoljuk le a megfigyelhetı sejttípusokat és állapítsuk meg, hogy az egyes állatok az ösztrusz ciklus mely fázisában vannak.
A petefészek műtéti eltávolítása (ovariektomia) patkányon Anyagok és eszközök: bonckészlet, papírvatta, fecskendık (2ml), fecskendı tők, sebvarró cérna (3-0), sebvarró tő, tőfogó, tárgylemezek, érszorító csipesz A gonádok kétoldali (bilateralis) eltávolítása a gametogenezis teljes megszőnéséhez vezet. A tünetek másik része a nemi hormonok termelésének kiesése miatt jön létre. Ezek a tünetek nagyrészt hormonadagolással rendezhetık,
90
így a nemi hormonok hatásainak in vivo vizsgálatára leggyakrabban gonádírtott (kasztrált) állatokat használnak. A kísérleti állat petefészkét célszerő a hát felıl megközelíteni. Az állatot elaltatjuk, majd az oldalára fektetjük. A lumbális régió magasságában a szırt lenyírjuk, majd az állaton 1 cm-el a bordaív alatt kb 2-3 cm-es vágást ejtünk. Az izmot szétválasztjuk, majd óvatosan megnyitjuk a peritoneumot. A sebet feltárva, a beleket óvatosan félretéve megkeressük a sárgáspiros színő petefészket (ovarium). Amennyiben a felkeresés nehézkes, az uterusszarvak mentén, azok végén könnyedén megtalálhatjuk. Közvetlenül a petefészek alatt levı ereket vékony cérnával lekötjük, majd a petefészket határozott mozdulattal eltávolítjuk. Megfelelı vérzéscsillapítás
után
réteges
hasfalzárást
alkalmazunk.
Ovariektomizálást
követıen, néhány hét múlva, a nemi ciklus teljesen megszőnik, a vizsgálandó hüvelykenet leginkább a normál ivari ciklusú állat diösztrusz állapotához hasonló festıdést mutat (2. ábra)
.
2 ábra. Ovariektomizált patkány hüvelykenetében látható sejtek
Vércukor meghatározás módszerei Az emberi vérplazma glukóz koncentrációja 4-5,5 mmol/l0 (70-100 mg %). Éhezés alatt sem csökken a glukóz koncentráció 3,6 mmol/l (65 mg %) alá és táplálkozás utáni fázisban sem haladja meg a 9-10 mmol/l (160 mg %) értéket. A
91
vér glukóz koncentrációját a neuroendokrin rendszer szabályozó hatása tartja viszonylag állandó szinten. A vér glukóz koncentrációját növeli a bélbıl felszívódó, a glikogén lebontásával (glikogenolízis) keletkezı valamint a fehérjékbıl
és
a
zsírokból
képzıdı
(glukoneogenezis)
glukóz.
A
glukózkoncentrációt csökkenti ezen biokémiai folyamatok gátlása és a sejtek glukózfelvételének serkentése. A szabályozás biztosítja a glukóztartalék nélküli idegsejtek és vörösvérsejtek glukóz ellátását. A vércukor meghatározása fontos a cukorbetegség, az ún. diabetes mellitus diagnózisánál és kezelésénél. A vércukor szint meghatározására számos módszert kidolgoztak. A redukciós módszerek (ld. a Fehling- reakciónál leírtakat) nem elég specifikusak, mert a glükózon kívül más redukáló cukrok is reagálnak. Az enzimatikus módszerek
közül
nagy specifitású
a
hexokináz-glukóz
6-P-dehidrogenáz
segítségével végzett, a felszabaduló NADPH koncentrációját meghatározó optikai teszt. A Glukostyx tesztcsíkkal történı vércukorszint mérés a glukóz oxidázperoxidáz módszer használatán alapul. Orto-toluidin módszernél a hexózok, elsısorban a glukóz mennyiségét a fehérjementesített vérplazmából, színreakció és fotometriás meghatározás segítségével mérhetjük. A glukóz aldehid-csoportja aromás aminokkal (pl. az orto-toluidin aminocsoportjával), savanyú közegben színes azometint (Schiff bázis) képez, amelynek elnyelési maximuma 630 nm-nél van. 1. Vércukorszint meghatározása Glukostyx tesztcsíkkal vizuálisan Anyagok és eszközök: injekciós tő, tesztcsík, glukométer A tesztcsíkkal történı vércukor koncentráció mérés a glukózoxidázperoxidáz módszeren alapul. A hordozó mőanyaglap szőrıpapírcsíkon keresztül kapcsolódik az enzimekkel, indikátorokkal és pufferrel átitatott papírcsíkkal, melyet egy mőanyagháló véd. A tesztcsík tartalmaz egy alacsonyabb és egy magasabb reagenspárnát. A tesztcsík reagenseinek színváltozásai a glukózra specifikus glukózoxidáz enzim mőködésén alapulnak. A glukózoxidáz katalizálja a vérben
lévı
glukóz
oxidációját
a
levegı
oxigénjével
glukonsavvá
és
hidrogénperoxiddá. A hidrogénperoxid peroxidáz jelenlétében az orto-toluidint (redukált forma) oxidálja. Az oxidált termék az alacsonyabb tesztpárnán zöld színő
92
árnyalatokat ad, melynek színintenzitása arányos a vér glukóz tartalmával. A magasabb tesztpárnán az amino-antipyrin és a dichlor-hidroxybenzolszulfonát redukált formáját a hidrogénperoxid, peroxidáz jelenlétében oxidálva narancs színő árnyalatokat ad, melyek intenzitása a glukóz koncentrációjával arányos. Vizuális értékeléshez a vércseppet cseppentsük úgy a tesztcsík párnáira, hogy mindkettıt teljesen befedje. A vércseppet a vételtıl számított 30 mp-en belül leitatjuk egy darab papírvattával. A vér felcseppentésétıl számítva 120 sec, illetve a leitatástól számítva 90 sec múlva hasonlítsuk össze a kapott színintenzitásokat a doboz oldalán lévı színskálákkal! Megfigyelés: A nagyobb, alacsonyabb, zöldre színezıdı tesztpárna 16 mmol/l (20-120 mg/dl) között, a kisebb és magasabb, narancssárga párna 844 mmol/l (140-800 mg/dl) között mér. Ha a zöld színárnyalat világosabb, vagy megegyezik a 110 mg/dl (6 mmol/l) glukóz koncentrációnak megfelelı színnel, a zöld skálán olvassuk le az eredményt. Ha a zöld szín sötétebb a 110 mg/dl glukóz koncentrációnak
megfelelı
színnél,
akkor
a
narancsszínő
színskálával
összehasonlítva keressük meg a színnek megfelelı glukózkoncentrációt. 2. Vércukorszint meghatározása Glukostyx tesztcsíkkal glukométer segítségével, gükóztolerancia vizsgálat (cukorterhelés) Anyagok és eszközök: injekciós tő, tesztcsík, glukométer, glükóz Glukométer GX készülék egy digitális kijelzéső vércukor-mérı berendezés, mely gyorsan, pontosan mér. Memóriája tíz adatot tárolására és átlag számításra is alkalmas. A készülék kezelése: Nyomjuk meg az ON gombot! A kijelzın a következı jelek jelennek meg: 888, M/R, PROGR., és mmol/l. Az M/R megjelenése a kijelzı bal sarkában a memóriában való tárolás és visszahívás lehetıségét jelzi. Ebben az üzemmódban az A üzenet azt jelzi, hogy készülékünk a kapott adatokból átlagot képez és azt tárolja. Tovább nyomva az ON gombot az egyes teszt eredmények is lehívhatók a memóriából. A progr. jel megjelenésével választhatjuk ki a tesztcsík dobozán feltüntetett programot (az ON gombot annyiszor kell megnyomni, amennyi a program száma (1-9)). Amikor elkezdjük a vizsgálatot, balra nyomva nyissuk ki a tesztcsík behelyezésére szolgáló tolókát! A kijelzın három vonal
93
jelenik meg, egyet villan és a készülék ekkor rövid hangjeleket ad. A vonalak a tesztidı letelte után ismét megjelennek, amíg a teszt eredmény értékelése be nem fejezıdik. A mmol/l jel alatt megjelenı érték a vér mért glukóz koncentrációja. Az eredmény megjelenése után, amikor balra tolva kinyitjuk a tolókát, az ON gombbal kitörölhetjük az eredményt a memóriából, ezt d bető jelzi. Az LO betők azt jelzik, hogy a mért érték 1,4 mmol/l alatt van, vagy a tesztcsík fordítva van behelyezve. Ilyenkor a memória 1,3 mmol/l értéket számol az átlag eredményhez. A HI betők jelzik, hogy a kapott érték 22,1 mmol/l felett van, az átlagszámításhoz a készülék a 22,1 mmol/l koncentrációs értéket használja fel. Az ERR. kiírás valamilyen hibát jelez: a tolóka nyitva van, a tesztcsík nincs betéve, az ellenırzı teszt fordítva van behelyezve, a készülék hibás. Készítsünk elı tiszta többrétegő papírvatta csíkot, egyszer használatos injekcióstőt, valamint egy tesztcsíkot. Mossuk meg szappannal, melegvízzel a kezünket, öblítsük le és töröljük szárazra. Nyomjuk meg az ON gombot! A kijelzın három 8-as jelenik meg, 1-3 másodperc múlva megjelenik a program száma. Válasszuk ki a tesztcsík dobozán lévı programot az ON gomb többszöri megnyomásával! Húzzuk ki a tesztcsík-tartó tolókát balra. Ekkor a kijelzın három vonal jelenik meg! Éhgyomri állapotban, a letisztított ujjat steril tővel szúrjuk meg. Nyomjuk le az ON gombot! Ekkor rövid hangjelzéseket hallunk. Most van 4-5 másodpercünk addig, amíg a készülék elkezd 50 másodperctıl kezdve visszafelé számolni. Ezt egy hosszú hang megjelenése is jelzi. Ekkor azonnal helyezzük a vércseppet a tesztcsíkra úgy, hogy az mind a két párnát teljesen befedje és legyünk készen a vér leitatására. Két, rövid figyelmeztetı hang jelzi, hogy a visszaszámlálás a 22. és 21. másodpercnél tart. 20. másodpercnél egy hosszabb hang jelzi, hogy ekkor kell a tesztcsíkot leitatni. Leitatás után azonnal helyezzük a tesztcsíkot a készülék tesztnyílásába úgy, hogy a reagenseket tartalmazó rész felül legyen! Toljuk vissza a tesztfiókot a helyére! A teszt behelyezésének és a tolóka (tesztfiók) becsukásának elıbb be kell fejezıdnie, mielıtt a készülék visszaszámlálása elérné az 1 másodpercet! Amikor a visszaszámlálás eléri az 1 másodpercet, a kijelzın ismét
94
megjelenik a három vonal, majd röviddel ezután a teszt eredménye. Ha tárolni akarjuk a teszt eredményét, nyomjuk le az ON gombot. Ezzel tároljuk az eredményt és egyben kikapcsoljuk a készüléket is. A teszt eredményét töröljük, ha kitoljuk baloldalra a tesztcsíkot tartalmazó fiókot, "d" jelzés jelenik meg, most megnyomva az ON gombot a készülék kikapcsol és törli az eredményt a memóriából. Ha a "d" jel megjelent és nem akarjuk az adatot törölni, csak csukjuk be a tolókát, az eredmény ismét megjelenik, most megnyomva az ON gombot a készülék az adatot tárolja és kikapcsol. Az éhgyomri vércukorszint (normál: 3,6-6,2 mmol/l) megmérése után, standard körülmények között a kísérleti személlyel 1g glükóz/kg testtömeg glükózt itatunk (cukorterhelés). A glükóz elfogyasztása után ½ óránként a fent említett módon vérglükóz-koncentrációt mérünk. A kísérleti személy glükózszintje, a cukorterhelés után 1 órával éri el a maximumot (9-10 mmol/l). Az utolsó mérés (a cukor elfogyasztása után 2 órával) eredménye a kiindulási vércukorszint állapotának megfelelı értéket (±10%) kell mutasson.
éhgyomri
½óra
1óra múlva
1,5óra
2óra múlva
múlva
múlva Vércukorszint mmol/l
1. táblázat: Vércukorszint meghatározása, cukorterheléses vizsgálattal
Amennyiben az érték magasabb tartomány felé tolódik, cukorbetegségrıl (diabetes mellitus) beszélhetünk (3. ábra).
95
3. ábra: A vérplazma glükószintjének változása 1 g/kg glükóz orális adását követıen
3. Inzulin és adrenalin hatása a vércukorszint változásra patkányban Anyagok és eszközök: SBH-ketamin, Seduxen injekció, injekciós tő, ragtapasz, NaCl, Tonogén (2,7 µM adrenalin), inzulin, ketamin, glukométer A vizsgálathoz három darab kb 400 g súlyú Wistar patkányt használunk. A kísérlet elıtt az állatokat 24 óráig éheztetjük. Az állatokat SBH-ketamin (Calypsol, Richter Gedeon Rt.) és benzodiazepam (Seduxen, Richter Gedeon Rt.) megfelelı arányú keverékével elaltatjuk (5 ml SBH-ketamin-5 ml desztillált víz- 2 ml Seduxen). Az altató keverékbıl 0,2 ml-t számolunk 100g testömegre. Az alvó állatok laterális farokvénájába injekciós tőt vezetünk. A kanülözéshez az állat farkát kézmeleg vízbe rakjuk, melynek hatására az erek kitágulnak A farokvénába beszúrjuk a tőt, majd ragtapasszal rögzítjük. (A tő akkor van a megfelelı helyen, ha a vér visszaszívható a fecskendıbe).
96
Mind ahárom állattól a kezelés megkezdése elıtt vért veszünk és megállapítjuk a vércukorszintet. Inzulin injekióból (200 NE/5ml) fiziológiás NaCl oldattal 0,4 NE/ml-es oldatot készítünk. A kész oldatból 0,25 ml-t (0,1NE) izomba (i.m.) vagy intraperitonealisan (i.p.) az elsı kísérleti állatba injektálunk. A második patkányon az adrenalin hatását vizsgáljuk. Tonogén oldatból (2,7 µM adrenalin) 0,5 ml-t adunk be i.m. vagy i.p. A harmadik állatnak mind inzulin, mind adrenalin oldatot egyaránt injektálunk. A kezelések után a kísérleti állatoktól 30 perc elteltével 50µl vért veszünk és ismételten megmérjük a vércukorszintjüket. A mért adatokat rögzítsük az alábbi táblázat alapján (2. táblázat).
Vércukorszint (mmol/l)
Kezelés elıtt
Kezelés után 30 perccel
Adrenalin kezelt állat Inzulinnal kezelt állat Adrenalinnal és inzulinnal kezelt állat
2. táblázat. Inzulin és adrenalin hatása a vércukorszintre
Megfigyelés: Inzulin hatására a sejtek membránjának glukóz permeabilitása megnı, fokozódik a cukor felhasználás, a glukoneogenezis és glükogenolízis gátlódik, így a vércukorszint csökken. Az adrenalin hatásait tekintve az inzulin antagonistája. Többek közzött csökkenti a sejtek glukózfelhasználását és a májban fokozza a glikogenolízist, ezért adrenalin beadás után a vércukorszint emelkedését tapasztaljuk.
Antidiuretikus hormon (ADH , vazopresszin) hatása kecskebéka vízháztartására Anyagok és eszközök: béka Ringer-oldat, ADH (1000 µg/ml), mérleg A kísérlet során két állatot használunk. Mindkét állatot alaposan szárazra töröljük, majd 0,01mg pontosságú mérlegen lemérjük. Az egyik békának
97
intraperitoneálisan (i.p.) 0,3 ml ADH-t, a másiknak 0,3 ml. Ringer oldatot adunk i.p. Az injekció után az állatokat vízzel teli kádba helyezzük. Egy és két óra múlva a békákat szárazra töröljük és ismételten lemérjük súlyúkat. A mért adatokat a 3. táblázatban látható módon rögzítsük! KEZELÉS ELİTTI SÚLY (g)
KEZELÉS
1
ADH
2
Ringer
KEZELÉS UTÁNI SÚLY (g) 1 óra 2 óra
3. táblázat: ADH hatás béka vízháztartására Megfigyelés: ADH hatására a béka testtömege nıni fog, mert az ADH növeli a vesetubulusokban víz reabszorpciót és ezáltal csökkenti a szervezet vízveszteségét.
98
