GasPak EZ Systémy kontejnerù
vytváøejících plyn
8010412/04 2007/09 Èesky
ÚÈEL POUŽITÍ Systémy kontejnerù vytváøejících plyn GasPak EZ jsou víceúèelové systémy, které vytváøejí atmosféry vhodné k podpoøe primární izolace a kultivace anaerobních, mikroaerofilních nebo kapnofilních bakterií za použití sáèkù vytváøejících plyn uvnitø víceúèelových inkubaèních kontejnerù. SHRNUTÍ A VYSVÌTLENÍ V‑roce 1965 pøedstavili Brewer a Allgeier jednorázovou obálku vytváøející vodík, která byla pozdìji zmìnìna tak, aby souèasnì zahrnovla tvorbu oxidu uhlièitého a obsahovala vnitøní katalyzátor.1,2 Systémy kontejnerù vytváøejících plyn GasPak EZ poskytují biologickou výkonnost a spolehlivost bez nutnosti použít katalyzátor nebo aktivaení postup. Sáèek vytváøející plyn GasPak EZ obsahuje všechny složky, které jsou potøebné k vytvoøení specifické atmosféry pro inkubaci vzorkù. Sáèek a vzorky jsou umístìny v èistém plastovém inkubaèním kontejneru GasPak EZ; tyto kontejnery lze vzájemnì naskládat na sebe. Kontejner je neprodyšnì uzavøen a nechá se inkubovat. Do standardního inkubaèního kontejneru GasPak EZ Incubating Container, Kat. è. 260671, lze vložit 15–18 Petriho misek BBL Stacker. Do velkého inkubaèního kontejneru GasPak EZ Large Incubating Container, Kat. è. 260672, lze vložit 30–33 Petriho misek BBL Stacker nebo kombinaci Petriho misek a médií ve zkumavce. Do systému BBL GasPak 100 System, Kat. è. 260626, lze vložit 12 Petriho misek BBL Stacker nebo kombinaci Petriho misek a médií ve zkumavce. Do velkého anaerobního systému BBL GasPak 150 Large Anaerobic System, Kat. è. 260628, lze vložit 36 Petriho misek BBL Stacker nebo kombinaci Petriho misek a médií ve zkumavce. PRINCIPY METODY Reagenèní sáèek vytváøející plyn GasPak EZ je tvoøen reagenèním sáèkem, který obsahuje anorganický uhlièitan, aktivní uhlí, askorbovou kyselinu a vodu. Po vyjmutí sáèku ze zevního obalu je tento aktivován expozicí vzduchu. Aktivovaný reagenèní sáèek a vzorky jsou umístìny do inkubaèního kontejneru GasPak EZ Incubation Container a kontejner je neprodyšnì uzavøen. Sáèek rychle snižuje koncentraci kyslíku v kontejneru. Anorganický uhlièitan zároveò vytváøí oxid uhlièitý. Pro kultivaci anaerobních bakterií vytvoøí sáèky systému pro kultivaci anaerobù GasPak EZ Anaerobe Container System Sachets anaerobní atmosféru bìhem 2,5 h; atmosféru s obsahem oxidu uhlièitého vìtším nebo rovným 15 % bìhem 24 h. Pro kultivaci mikroaerofilních bakterií vytvoøí sáèky systému pro kultivaci Campylobakterií GasPak EZ Campy Container Systém Sachets mikroaerofilní atmosféru s obsahem kyslíku 6–16 % bìhem 2 h; atmosféru s 2–10 % oxidu uhlièitého bìhem 24 h. Pro kultivaci organismù, které vyžadují oxid uhlièitý, vytvoøí sáèky systému s CO2 GasPak EZ CO2 bìhem 24 h atmosféru s obsahem oxidu uhlièitého vìtším nebo rovným 2,5 %. ÈINIDLA
Varování a bezpeènostní opatøení: Urèeno pro in vitro diagnostiku. Bìhem celého postupu dodržujte uvedená bezpeènostní opatøení eliminující mikrobiologická rizika. Pøed likvidací vysterilizujte kontejnery na vzorky a další kontaminovaný materiál v autoklávu. Po použití by sáèek mìl zùstat teplý. Sáèek po ukonèení reakce (po zchladnutí) zlikvidujte. Pokud je zevní fólie jakkoli poškozena nebo otevøená, reagenèní sáèek NEPOUŽÍVEJTE. Chraòte pøed pøímým svìtlem a vysokými teplotami. Používáte-li více než jeden sáèek, NEVRSTVÌTE je. NEOTVÍREJTE kontejner pøed ukonèením inkubace. Sáèky systémù s kontejnerem GasPak EZ jsou urèeny k použití v inkubaèních kontejnerech GasPak EZ a v systému BBL GasPak 100 System nebo ve velkém anaerobním systému BBL GasPak 150 Large Anaerobic System. Jejich použití v jiných systémech by mohlo vést k nesprávným výsledkùm. Inkubaèní kontejnery GasPak EZ jsou urèeny pro sáèky systémù s kontejnerem GasPak EZ. Nepoužívejte je spolu s jiným sáèky nebo obálkami vytváøejícími plyn (napø. obálky BBL GasPak/GasPak Plus Envelopes). Pokyny ke skladování: Po obdržení skladujte reagenèní sáèky v suchém prostøedí pøi 2–25 °C. Sáèky systémù s kontejnerem GasPak EZ jsou pøipraveny k použití (ready to use). Datum použitelnosti je platné pro neotevøené, nepoškozené a správnì uskladnìné sáèky. Otevøete až pøed použitím. Zhoršování kvality výrobku: Pokud je vnìjší obal poškozen èi otevøen, reagenèní sáèky nepoužívejte. Nepoužívejte kontejnery, na kterých jsou patrné praskliny, naštípnutá místa, poškozené tìsnìní nebo jiné nepravidelnosti. Aktivní složky: Askorbová kyselina, aktivní uhlí a voda Varování: Aktivní uhlí dráždí oèi, dýchací systém a pokožku.
POSTUP Dodané materiály: Systém kontejneru GasPak EZ. Pro použití všech systémù je zapotøebí kontejner a sáèek (sáèky) (Viz “Produkty”). Kontejner GasPak EZ Standard Incubation Container (Cat. No. 260671) GasPak EZ Large Incubation Container (Cat. No. 260672) BBL GasPak 100 System (Cat. No. 260626) BBL GasPak 150 Large Anaerobic System (Cat. No. 260628)
Poèet sáèkù 2 3 1 3
Potøebný materiál, který není souèástí dodávky: Stojan pro inkubaèní kontejner GasPak EZ Incubation Container Rack (Viz „Produkty“), držák na zkumavky BBL GasPak tube holder, pomocná kultivaèní média, èinidla, indikátory anaerobní atmosféry, organismy pro kontrolu jakosti a laboratorní vybavení požadované pro tento postup. Provedení testu: 1. Umístìte požadované misky ve stojanu do inkubaèního kontejneru GasPak EZ. (Chcete-li v‑láhvi BBL GasPak použít zkumavky, použijte držák na zkumavky BBL GasPak tube holder, kat. è. 260630.) 2. K urèení poètu sáèkù potøebných na kontejner použijte výše uvedenou tabulku. Vyjmìte sáèek (sáèky) systému s kontejnerem GasPak EZ z krabice. Odstraòte zevní fólii. 3. Umístìte aktivované sáèky do inkubaèního kontejneru GasPak EZ nebo do láhve BBL GasPak s miskami. Sáèky by mìly být umístìny podél misek mezi stojanem a zevní èástí kontejneru. Používáte-li k‑inkubaci anaerobní sáèek GasPak EZ, vložte nyní do kontejneru nebo láhve anaerobní indikátor (Kat. číslo 260678). Používáte-li systém GasPak EZ w/Indicator, není potøeba pøidávat další indikátor O2. Indikátor O2 při odebrání sáčku z fóliového balíčku. Postupně začne při vystavení okysličené atmosféře modrat a poté při redukci prostředí opět zbělá. 4. Pøichyťte víko k spodní èásti kontejneru a uzavøete kontejner GasPak EZ. Zacvaknìte všechny ètyøi západky tak, aby byly úplnì uzavøené. Používáte-li láhev BBL GasPak, prostudujte si pøíbalový leták k této láhvi. 5. Systém s kontejnerem GasPak EZ inkubujte pøi teplotì odpovídající kultivovanému organismu; tato teplota však nesmí pøekroèit 45 °C. Inkubaèní kontejnery GasPak EZ lze skládat na sebe a ušetøit tak místo v inkubátoru. 6. Po ukonèení inkubace otevøete kontejner, vyjmìte z nìj misky a sáèky systému s kontejnerem GasPak EZ odpovídajícím zpùsobem zlikvidujte. Doporuèení pro údržbu: Správná péèe o inkubaèní kontejner GasPak EZ spoèívá v následujících krocích: 1. Vyhnìte se styku s abrazivními prostøedky. 2. Vyhnìte se styku s rozpouštìdly a detergenty. 3. Po umytí jemným detergentem dùkladnì opláchnìte a osušte. 4. Kontejner ani víko nikdy nesterilizujte v autoklávu. Kontrola jakosti uživatelem: Každý systém s kontejnerem vytváøejícím plyn GasPak EZ by mìl být pravidelnì testován, zda je schopen zajistit adekvátní podmínky pro rùst pøíslušné bakterie. Systém
Organizmy kontroly jakosti
GasPak EZ Anaerobe Container System GasPak EZ Campy Container System GasPak EZ CO2 Container System
Bacteroides fragilis ATCC 25285 Campylobacter jejuni ATCC 29428 Neisseria gonorrhoeae ATCC 19424
Požadavky kontroly jakosti musí být provedeny v souladu s platnými místními, státními a federálními zákony nebo požadavky pro akreditaci a se standardními postupy kontroly jakosti vaší laboratoøe. Doporuèujeme, aby si uživatel prostudoval informace o správném provádìní kontroly jakosti v pøíslušných smìrnicích CLSI (døíve NCCLS) a pøedpisech CLIA. VÝSLEDKY Pøi 35 °C je anaerobních podmínek dosaženo bìhem 2,5 h, resp. bìhem 24 h s obsahem oxidu uhlièitého vìtším nebo rovným 15 %. Po 30 min od aktivace by se mìl objevit viditelný kondenzát. Na miskách s agarem obsahujícím krev je redukce patrná bìhem 2–4 h pøi 35 °C. Redukce anaerobního indikátoru (bílé zbarvení) by měla být patrná během 9 hodin při 35 °C. Mikroaerofilních podmínek s koncentrací kyslíku pøibližnì 6–16 % je dosaženo bìhem 2 h a s koncentrací oxidu uhlièitého 2–10 % bìhem 24 h pøi teplotì 35 °C. Atmosféry obohacené oxidem uhlièitým lze dosáhnout bìhem 24 h (s koncentrací oxidu uhlièitého vìtší nebo rovnou 2,5 %) pøi 35 °C. ÚÈINNOST Systém s kontejnerem pro kultivaci anaerobù GasPak EZ Anaerobic Container System (260678). Pøed distribucí jsou vzorky každé šarže sáèkù systému s kontejnerem pro kultivaci anaerobních bakterií GasPak EZ testovány z hlediska úèinnosti. Každý testovací sáèek systému pro kultivaci anaerobù GasPak EZ Anaerobic Container System je aktivován a umístìn do inkubaèního kontejneru spolu s anaerobním indikátorem. Kontejner je neprodyšnì uzavøen podle pokynù uvedených na štítku a sledován po dobu nutnou k‑vytvoøení viditelné kondenzace. Kontejner se potom inkubuje pøi 35 ± 2 °C. Po pøibližnì 2,5 h se do inkubaèního kontejneru zavede jehla velikosti 22 gauge (1,5"), nasaje se vzorek plynu, který je podroben plynové chromatografii, a analyzuje se v nìm množství kyslíku pøítomné v inkubaèním kontejneru. Procento kyslíku pro všechny kontejnery je menší nebo rovno 1 % a støední procento pro všechny vzorky testované na pøítomnost kyslíku je menší než 0,7 %. Po pøibližnì 24 h inkubaci pøi 35 ± 2 °C se z kontejneru odebere další vzorek a analyzuje se
na pøítomnost oxidu uhlièitého. Procento oxidu uhlièitého pro všechny kontejnery je vìtší nebo rovno 15 %. Během 9 hodin by měly být anaerobní indikátory bílé (redukované). Viditelná kondenzace se uvnitø inkubaèního kontejneru objeví prùmìrnì do 20 min po aktivaci. Systém pro kultivaci anaerobù s‑indikátorem GasPak EZ Anaerobic System with Indicator (260001) Pøed distribucí jsou vzorky každé šarže sáèkù systému pro kultivaci anaerobních bakterií s indikátorem GasPak EZ testovány z‑hlediska úèinnosti. Každý testovací sáèek s indikátorem systému pro kultivaci anaerobù s indikátorem GasPak EZ Anaerobic System with Indicator je aktivován a umístìn do inkubaèního kontejneru. Kontejner je neprodyšnì uzavøen podle pokynù uvedených na štítku a sledován po dobu nutnou k vytvoøení viditelné kondenzace. Kontejner se potom inkubuje pøi 35 ± 2 °C. Po pøibližnì 2,5 h se do inkubaèního kontejneru zavede jehla velikosti 22 gauge (1,5") pøipojená k 3 mL støíkaèce, nasaje se vzorek plynu, který je podroben plynové chromatografii, a analyzuje se v‑nim množství kyslíku pøítomné v inkubaèním kontejneru. Procento kyslíku pro všechny kontejnery je menší nebo rovno 1 % a støední procento pro všechny vzorky testované na pøítomnost kyslíku je menší než 0,7 %. Po pøibližnì 24 h inkubaci pøi 35 ± 2 °C se z kontejneru odebere další vzorek a analyzuje se na pøítomnost oxidu uhlièitého. Procento oxidu uhlièitého pro všechny kontejnery je vìtší nebo rovno 15 %. K redukci tablety anaerobního indikátoru pøipojené k sáèku musí pøi teplotì 35 ± 2 °C dojít bìhem 24 hodin od inkubace. Viditelná kondenzace se v láhvi objeví prùmìrnì do 20 min po aktivaci. Systém s kontejnerem pro kultivaci Campylobakterií GasPak EZ Campy Container System (260680). Pøed distribucí jsou vzorky každé šarže sáèkù systému pro kultivaci Campylobakterií GasPak EZ Campy Container System testovány z hlediska úèinnosti. Každý testovací sáèek systému pro kultivaci Campylobaktérií GasPak EZ Campy Container System je aktivován a umístìn do inkubaèního kontejneru. Kontejner je neprodyšnì uzavøen podle pokynù uvedených na štítku a sledován po dobu nutnou k vytvoøení viditelné kondenzace. Kontejner se potom inkubuje pøi 35 ± 2 °C. Po pøibližnì 2 h se do inkubaèního kontejneru zavede jehla velikosti 22 gauge (1,5"), nasaje se vzorek plynu, který je podroben plynové chromatografii, a analyzuje se v nìm množství kyslíku pøítomné v inkubaèním kontejneru. Procento kyslíku pro všechny kontejnery je 6 až 16%. Po pøibližnì 24 h inkubaci pøi 35 ± 2 °C se z kontejneru odebere další vzorek a analyzuje se na pøítomnost oxidu uhlièitého. Procento oxidu uhlièitého pro všechny kontejnery je 2 až 10 %. Viditelná kondenzace se uvnitø inkubaèního kontejneru objeví prùmìrnì do 20 min po aktivaci. Systém s CO2 kontejnerem GasPak EZ CO2 Container System (260679). Pøed distribucí jsou vzorky každé šarže sáèkù systému s CO2 kontejnerem GasPak EZ CO2 Container System testovány z hlediska úèinnosti. Každý testovací sáeek systému s CO2 kontejnerem GasPak EZ CO2 Container System je aktivován a umístìn do inkubaèního kontejneru spolu s 2 naplnìnými Petriho miskami. Kontejner je neprodyšnì uzavøen podle pokynù uvedených na štítku a potom se inkubuje pøi 35 ± 2 °C. Po pøibližnì 24 h se do inkubaèního kontejneru zavede jehla velikosti 22 gauge (1,5"), nasaje se vzorek plynu, který je podroben plynové chromatografii, a analyzuje se v‑nìm množství oxidu uhlièitého pøítomné v inkubaèním kontejneru. Procento oxidu uhlièitého pro všechny kontejnery je vìtší nebo rovno 3 %. PRODUKTY Kat. è. Popis 260671 Standardní inkubacní kontejner GasPak EZ Standard Incubation Container (15–18 misek) 260672 Velký inkubacní kontejner GasPak EZ Large Incubation Container (30–33 misek) 260678 Sácky systému pro kultivaci anaerobu GasPak EZ Anaerobe Container System Sachets (20 sácku v krabicce) 260001 Sáèky systému pro kultivaci anaerobù s indikátorem GasPak EZ Anaerobe Container System Sachets with Indicator (20 sáèkù v krabièce) 260680 Sácky systému pro kultivaci Campylobakterií GasPak EZ Campy Container System Sachets (20 sácku v krabicce) 260679 Sácky systému s CO2 GasPak EZ CO2 Container System Sachets (20 sácku v krabicce) 260673 Stojan pro standardní inkubacní kontejner GasPak EZ Standard Incubation Container Rack (15–18 misek) 260674 Stojan pro velký inkubacní kontejner GasPak EZ Large Incubation Container Rack (30–33 misek) BBL GasPak Tube Holder 260630 271051 Suché anareboní indikátorové proužky BBL GasPak Dry Anaerobic Indicator Strips (balení po 100) BBL GasPak 100 System 260626 BBL GasPak 150 Large Anaerobic System 260628 ODKAZY 1. Brewer, J.H. and D.L. Allgeier. 1966. Disposable hydrogen generator. Science 147:1033-1034. 2. Brewer, J.H. and D.L. Allgeier. 1966. Safe self-contained carbon dioxide-hydrogen anaerobic system. Appl. Microbiol. 16:848-850.
Becton, Dickinson and Company 7 Loveton Circle Sparks, Maryland 21152 USA 800-638-8663
Benex Limited Bay K 1a/d, Shannon Industrial Estate Shannon County Clare, Ireland Tel: 353-61-47-29-20 Fax: 353-61-47-25-46
ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection. BBL, BD, BD Logo, GasPak and Stacker are trademarks of Becton, Dickinson and Company. ©2007 BD.
