Tudományos Diákköri Dolgozat
GALÁT MÁRK
POLI(VINIL-KLORID) LÁNCMENTI MÓDOSÍTÁSI REAKCIÓI
TÉMAVEZETŐ: DR. IVÁN BÉLA EGYETEMI MAGÁNTANÁR MTA, KÉMIAI KUTATÓINTÉZET POLIMER KÉMIAI ÉS ANYAGTUDOMÁNYI OSZTÁLY
Eötvös Loránd Tudományegyetem Természettudományi Kar Budapest, 2010
-1-
Tartalomjegyzék Köszönetnyilvánítás ....................................................................................................... 3. 1. Bevezető .................................................................................................................... 4. 2. Irodalmi háttér ........................................................................................................... 5. 2.1 Poli(vinil-klorid) /PVC/ .................................................................................. 5. 2.2. Poli(etilén-glikol) /PEG/ ................................................................................ 5. 2.3. Click kémia ................................................................................................... 6. 2.3.1. A click kémia definíciója és fő jellemzői............................................... 6. 2.3.2. Diploáris cikloaddíciós click reakciók ................................................. 8. 2.3.3. A click kémia és a polimerkémia kapcsolata ...................................... 10. 2.3.4. Click reakciók PVC-vel ..................................................................... 11. 2.4. Felületmódosítások PEG-gel ....................................................................... 12. 3. Célkitűzések ............................................................................................................ 14. 4. Kísérleti rész ............................................................................................................ 15. 4.1 Felhasznált vegyszerek ................................................................................. 15. 4.1.1. Vegyszerek eredete ............................................................................ 15. 4.1.2. Vegyszerek tisztítása.......................................................................... 15. 4.2. Receptek ...................................................................................................... 16. 4.2.1. PVC azidálása .................................................................................. 16. 4.2.2. PVC azidálása Yagci szerint.............................................................. 16. 4.2.3.PVC azidáltsági fokának vizsgálata .................................................... 17. 4.2.4. PVC azidálási reakció időfüggésének vizsgálata................................ 18. 4.2.5. Monofunkciós PEG (metoxi-PEG, mPEG) propargilálása ................. 18. 4.2.6. PVC ojtása PEG-gel ......................................................................... 19. 4.2.7. PVC ojtása PEG-gel II. ..................................................................... 20. 4.3. Vizsgálati módszerek ................................................................................... 20. 4.3.1. NMR ................................................................................................. 20. 4.3.2. Gélpermeációs kromatográfia (GPC) ................................................ 21. 5. Eredmények és értékelésük ...................................................................................... 23. 5.1. PVC azidálási kísérletek .............................................................................. 23. 5.2. PEG propargilálások................................................................................... 28. 5.3. PVC-PEG kapcsolás.................................................................................... 29. 6. Összefoglalás ........................................................................................................... 30. 6.1 Összefoglalás ............................................................................................... 30. 6.2. Summary ..................................................................................................... 30. 7. Irodalomjegyzék ....................................................................................................... 32.
-2-
Köszönetnyilvánítás
Köszönetemet
fejezem
ki
Dr.
Iván
Béla
egyetemi
magántanárnak,
tudományos
osztályvezetőnek, hogy lehetővé tette és útmutatásával segítette munkámat. Hálás vagyok továbbá Szarka Györgyinek, amiért folyamatosan figyelemmel kísérte és előremozdította a kutatást, továbbá Illés Gergelynek, Kasza Györgynek, Soltész Amáliának, Szabó Ákosnak, Szanka Istvánnak és Verebélyi Klárának hasznos elméleti és gyakorlati tanácsaikért.
-3-
1. Bevezetés
A makromolekuláris kémia napjainkban rendkívül gyorsan fejlődő ága a kémiai tudományoknak. Bár maguk a makromolekulák ősidőktől fogva léteznek a természetben és igen fontos alkotói (polipeptidek és nukleinsavak nélkül maga az élet sem létezne), ráadásul az ember is régóta használja őket (pl. gyanták, kaucsuk), a velük foglalkozó tudományág nagyon fiatal. Noha már a XIX. század közepe óta ismeretesek nem csupán természetes, de mesterséges polimerek is (nitrocellulóz, poliészter stb.), ezek makromolekula jellegét egészen a múlt század első feléig nem ismerték fel. Elsőként Hermann Staudinger vetette fel az 1920-as évek végén, hogy makromolekulák és polimerek létezhetnek, de elméletét még évekig vitatták [1]. Az ipar ezzel szemben - bár nem voltak tisztában ezek polimer mivoltával - már évtizedekkel Staudinger előtt elkezdett műanyagokkal foglalkozni, elég a celluloidra vagy a műgumira gondolni. 1950-re szinte minden, ma hétköznapinak számító műanyag gyártástechnológiája ismert volt. Manapság már úgyszólván végtelen változatosságot tapasztalhatunk a műanyagok terén, a legkülönfélébb termékeket állítják elő mesterséges makromolekulákból élelmiszeradalékoktól kezdve ruhákon és használati tárgyakon keresztül egészen repülőgép- és űrhajó-alkatrészekig. Érdemes kitérni röviden arra, hogy mi a különbség a makromolekula, polimer és a műanyag között. Staudinger nyomán makromolekulának nevezünk minden olyan molekulát, amely legalább 1000 atomból áll [2]. Ezek egyik fajtája az ismétlődő egységekből álló ún. polimerek, melyek a modern – és Staudingerétől valamelyest eltérő – definíció szerint legalább 10 monomeregységet tartalmaznak. A műanyagok szintetikus polimer alapú készítmények, ám nem egyenlők azokkal. Ezek ugyanis egy sor adalékanyagot, pl. térfogatnövelőt, stabilizátorokat, színezékeket és egyéb összetevőt is tartalmaznak az alap polimer(ek)en kívül, hogy céljuknak a lehető legjobban megfeleljenek. Manapság a makromolekuláris kémia és általában a kémia legfontosabb feladatai közé tartozik új, biokompatibilis sajátosságokkal bíró anyagok kifejlesztése. A fejlődő orvostudomány, genetika és biotechnológia egyre jobb és jobb testbarát anyagokat igényel, a kémikusok pedig készek megfelelni ennek az elvárásnak. A dolgozatban egy testbarát műanyag kifejlesztését célzó kutatás első lépéseit foglalom össze, röviden áttekintve annak irodalmi előzményeit és az elvégzett kísérleteit, azok eredményeit, illetve a levont következtetéseket.
-4-
2. Irodalmi háttér
2.1. Poli(vinil-klorid) (PVC) A PVC egyike a legismertebb és legnagyobb mennyiségben gyártott műanyagoknak. Vinil-klorid gyökös polimerizációjával állítják elő, az eljárás jellege lehet szuszpenziós vagy emulziós, de tömbpolimerizáció is. Termomechanikai jellegét tekintve amorf, termoplasztikus (hőre lágyuló) polimer. Bár a tiszta anyag üvegesedési hőmérséklete 80 oC, különféle adalékanyagokkal ezt rendszerint szobahőmérséklet alá viszik, hogy nagyrugalmas állapotú műanyagot kapjanak [1]. Oldható tetrahidrofuránban és dimetil-formamidban, vízben, metanolban és hexánban oldhatatlan. A PVC kémiai módosítására számos lehetőség kínálkozik, ezek jobbára az oldalláncot (jelen esetben a klóratomokat) érintik, ritkábban a láncban előforduló hibákat (pl. kettős kötések). Jellemző a könnyen továbbalakítható csoportok, pl. azid, propargil és hasonlók felvitele [4]. A kemény PVC legjellemzőbb felhasználási területe az építőipar: padlóburkolatokat, csöveket és profilokat készítenek belőle. A módosítatlan polimert (uPVC, vagy rigid PVC) Nyugaton szerkezeti anyagként is használja az építőipar, főképp festett fafelületek imitálására, továbbá ajtó- és ablakkeretek készítésére. Az emulziós módszerrel előállított PVC-t ezzel szemben lágyítják, majd műbőröket állítanak elő belőle kenési technikával (talp, táska, stb.) [3]. Jelentősek a PVC gyógyászati alkalmazásai is, mivel a vértranszfúziós tasakok és az infúziós csövek ebből készülnek. Sajnos a fenti gyógyászati eszközök komoly problémája, hogy nem testbarátak, lévén felületük hidrofób - a vérsejtek és vérlemezkék pedig rátapadnak a tasakok és csövek falára, így a vérkészítmény idővel tönkremegy [1].
2.2. Poli(etilén-glikol) (PEG) Ismert még poli(etilén-oxid) /PEO/, poli(oxi-etilén) /POE/ és a kereskedelmi forgalomban Carbowax néven is. Jellemzően PEG-nek nevezik a 20 000 Da-nál kisebb molekulatömegű polimert, az efölöttit PEO-nak. A POE bármilyen moláris tömegre alkalmazható. A legnagyobb
tömegben
előállított
poliéter,
melyet
etilén-oxid
gyűrűfelnyílásos
polimerizációjával állítanak elő. A PEG-ek folyadékok (kb. 6-800 Da Mn-ig), vagy alacsony
-5-
olvadáspontú szilárd anyagok. Oldhatóak vízben, metanolban, benzolban, diklórmetánban, tetrahidrofuránban, dimetil-formamidban. Dietil-éter és hexán nem oldja őket [5]. A PEG-ek és PEO-k kémiai módosítása elsősorban a láncvégeken történik, így bármely PEG talán legfontosabb tulajdonsága a funkcionalitása. Egy bifunkciós, telekelikus PEG elsősorban (ko)térhálók kialakítására alkalmas, míg egy monofunkciós polimer ojtásos reakciókra. A legtöbb hasonló módosítás alkin-, azid- és allilcsoport, esetleg valamilyen halogén felvitelét tűzi ki célul – ezeket lehet ugyanis a legkönnyebben tovább alakítani igényeink szerint. Jó példa erre a propargilálás [6], mely mono- és bifunkciós PEG-gel is elvégezhető, s amely reakció jelen munkában igen fontos szerephez jut. Számos klinikai, élelmiszeripari és kozmetikai alkalmazással bír a PEG. Ennek oka alacsony toxicitása és testbarát tulajdonságai. Sok kézkrém, fogkrém, szemcsepp tartalmazza és néhány élelmiszer. A gyógyászatban olyan felületek burkolására használják, melyek közvetlenül érintkeznek a test belsejével (protézisek, stb.). Melatoninnal együtt alkalmas balesetben megsérült idegek jó hatásfokkal történő regenerálására is [5]. 2.3. Click kémia 2.3.1. A click kémia definíciója és fő jellemzői Mi is a click kémia? Egy olyan, a kombinatorikus- és zöldkémián alapuló kémiai filozófia [7], melynek alapgondolata az anyagok moduláris felépítését vizsgálja. K. Barry Sharpless professzort a természetben végbemenő bioszintézisek ihlették meg, melyek során egyszerűbb részegységekből (modulokból) enyhe körülmények között állnak elő bonyolultabb molekulák. 2001-ben publikált elmélete [8] ezen természetes folyamatok által ihletett szintézisek kifejlesztését tűzte ki célul, melyek legfontosabb előnyei a hagyományos szintetikus módszerekhez képest: - széleskörű alkalmazhatóság - magas kitermelés - veszélytelen köztitermékek - sztereospecifitás - enyhe reakciókörülmények - kész állapotban elérhető alapanyagok és reagensek - oldószermentes közeg, vagy nem ártalmas oldószer (pl. víz)
-6-
- egyszerű tisztítás átkristályosítással vagy desztillációval, preparatív kromatográfia nem szükséges [9]. - stabil termékek - nagy termodinamikai hajtóerő - magas atomhatékonyság - vízre és oxigénre nem érzékeny. A click reakciók szabadentalpia-változása definíció szerint legalább -84 kJ/mol. Manapság már jóval megengedőbb a tudományos élet és azokat a reakciókat is clicknek nevezik, amelyek ezen feltételek közül csupán néhányat teljesítenek. Szinte bármilyen funkciós csoporttal működik, kivéve azokkal, amik önmagukkal reagálnak, vagy stabil komplexet képeznek réz(I)-gyel. A fő reagáló csoportok terminális azidok és alkinek, aktivált cianidok, de reakcióba vihetőek szabad tiolok (Staudinger reakció) és csavart, vagy elektronosan aktivált alkének. A réz(I) katalizátor mellett kísérleteztek Ru(II) katalizátorokkal, rézklaszterekkel és szubsztituált
ciklooktinekkel is,
melyeknek a
gyűrűfeszültsége biztosítja a katalitikus hatást. Ez utóbbi, fémmentes katalizátor lehetővé teszi a reakció véghezvitelét fiziológiás körülmények között is. Folytak kísérletek Pd(II), Pt(II), Ni(II), Au(I) katalizátorokkal is, ám ezek katalitikus hatása elmaradt a fentiek mögött. A legtöbb ismert oldószerrel és kétfázisú rendszerrel jó eredményeket kaptak, akárcsak kokatalitikus rendszerekkel, pl. aminokkal (trietilamin /TEA/, 2,2 bipiridilek /bpy/), ammóniumsókkal, mono- és multivalens triazolokkal, illetve foszfinszármazékokkal. Részletesebb vizsgálat megállapította, hogy a ligandumoktól függő kinetikus hatás mutatkozik a katalizátoroknál, mégpedig a több ligandum gyorsítja a reakciót. Ezt egyfelől a réz(I)-acetilid képződésével magyarázták, másrészt azzal, hogy a ligandumok koordinációja visszaszorítja a réz oxidációját, jelenlétük egyúttal visszaszorítja a nem kívánt mellékreakciókat, pl. az alkinek összekapcsolódását, vagy a triazolok 5,5' dimerizációját. Ez utóbbi akkor jelentős, ha aminok helyett valamilyen karbonátot alkalmazunk bázisként [8]. Mikrohullámú besugárzás elősegíti a reakciók végbemenetelét, ám egyúttal az 1,4addíciót és a mellékreakciókat is gyorsítja. A legismertebb click átalakulás, a Huisgencikloaddíció feltételezett mechanizmusát az 1. ábrán láthatjuk.
-7-
1. ábra: egy click reakció feltételezett mechanizmusa (az ábrán szereplő példa: Huisgen-cikloaddíció)
2.3.2. Dipoláris cikloaddíciós click reakciók A click reakciók egyik fő típusa a tiszta fúziós folyamat[8], melynek során a keletkező molekula összegképlete megegyezik a modulok összegével, azaz az atomhatékonyság 100%. Két fő típusuk van: az egyikben protonátmenet megy végbe (pl. epoxid gyűrű felnyitása) és ennek megfelelően kifejezetten kedvező számára a vizes közeg, míg a másik fajta fúziós folyamat során egyetlen σ-kötés sem szakad fel és hatásfoka az oldószer anyagi minőségétől is kevéssé függ. Az utóbbbi reakciótípusra a legfontosabb példa a Huisgen-féle 1,3 dipoláris cikloaddíció (más néven [2+3]-cikloaddíció, lásd 2. ábra) terminális alkinek és azidok között [10]. Ezt az átalakulást méltán nevezhetjük iskolapéldának, amennyiben a click reakciók fent felsorolt sajátosságait tekintjük. Egyedül a többnyire robbanékony azidokkal kapcsolatos félelmek tehetnek arról, hogy ez a reakciótípus nem kapta meg az őt megillető figyelmet a gyógyszerkémikusok részéről [9]. Az átalakulás során 1,4-diszubsztituált 1,2,3-triazol képződik.
-8-
2. ábra: Huisgen-féle 1,3 dipoláris cikloaddíció
A reakciót réz(I) katalizálja, enyhe körülmények között is megbízhatóan működik, és sok esetben tisztítást sem igényel a termék [11]. Az azid és alkin végcsoportok biológiailag meglehetősen inertek, ezért jól használhatóak meghatározott célhelyen történő szintézishez [12], illetve fehérjék szerkezetének aktivitás alapú feltérképezésében [13]. A triazol szerkezete hasonlít a természetben is előforduló ubikvitinhez, ám az amidoktól eltérően nem érzékeny a hasításra és szinte lehetetlen oxidálni vagy redukálni. A rézkatalizátor nanorészecskék formájában is beadagolható, mely esetben szintén egyszerűbben és hatékonyabban tisztítható terméket kapunk, ráadásul a katalizátort is újra fel lehet használni [14]. Sharpless és munkatársai nemrég felfedeztek egy ruténium(II)-katalizált cikloaddíciós reakciót is, melyek 1,5-diszubsztituált triazolokhoz vezetnek [15]. A számos kipróbált katalizátor közül leginkább a ruténium alapúak váltak be. A módszer előnye, hogy míg rézkatalizátorral csupán terminális alkinek vihetők reakcióba, ruténiummal láncköziek is. A 3. ábrán egy ilyen Ru-katalizált reakciót láthatunk.
3. ábra: ruténiumkatalizált cikloaddíció
Az azid-alkin click reakció legfontosabb termékei 1,2,3-triazolok, tetrazolok és 1,2oxazolok. Sharpless és munkatársai a tetrazolok szintézisét vizsgálták Na-aziddal és Znkatalizátorral (4. ábra).
4. ábra: tetrazol szintézise nitrilekből
A Zn katalitikus szerepe bizonyosan nem csupán Lewis-savi sajátosságaiban rejlik, mivel más Lewis-savakat kevésbé találtak hatékony katalizátornak, a cink pontos szerepe azonban nem tisztázott. A reakciók esetében a kinetikai vizsgálatok kétféle mechanizmusra (kétlépcsős
-9-
és egylépcsős, lásd a 5. ábrán) engednek következtetni, melyek sok esetben szimultán mennek végbe.
5. ábra: a tetrazolképződés két lehetséges mechanizmusa (A: kétlépcsős, B: egylépcsős)
2.3.3. A click kémia és a polimer kémia kapcsolata Felmerülhet a kérdés, hogy miképp kapcsolódik össze a click kémia és a polimer kémia? A válasz meglehetősen kézenfekvő, ha vetünk egy pillantást a click reakciók tulajdonságaira: nagy atomhatékonyság, oldószerekre kevéssé érzékenyek, magas funckiós csoport-tolerancia, ráadásul homogén és heterogén rendszerekben is jól működnek. Mindezen tulajdonságok megoldást kínált számos helyzetre, a click reakciók ugyanis egy sor gyakori problémát megoldanak, mint pl.: - a gyenge funkcionalizációt blokk kopolimerek illetve dendrimerek esetében - a fent említett, részben funkcionalizált keverékek elválasztásának nehézségei - nem teljes reakció a határfelületeken - erélyes reakciókörülmények, melyek roncsolóan hatnak a termékekre (különösen a modern biokompatibilis polimerek egy részére). A click kémia remekül kiegészít számos, az elmúlt évtizedekben felfedezett irányított polimerizációs reakciót [15], így ezek a kombinált technológiák felhasználhatósága már majdnem olyan széles körű, mint a klasszikus szerves szintéziseké. A dipoláris cikloaddíciós reakciók mellett felhasználtak Diels-Adler típusú click-reakciókat is polimerek, illetve felületek módosítására. A lineáris polimerek click reakcióinak elsősorban azon vonatkozásai érdekesek, mikor a click reakciót valamilyen irányított polimerizációs technikával ötvözzük, pl. szabadgyökös polimerizációval. Az atomátadásos gyökös polimerizáció (ATRP) és a click kémia kapcsolatát vizsgálták pl. PS, PEO, poliakrilátok, vagy PAN előállítása [16] és módosítása során. Az eljárás bármilyen láncvégi vagy láncközi módosításra alkalmas.
- 10 -
Fontos eredmény a makrociklusos polimerek előállítása click reakciókkal, mely először polisztirol-származékokkal sikerült. Hasonló eljárással ciklikus poli(N-izopropil-akrilamid) /pNIPAAM/ előállítását is jelentették. A nitroxid-közvetítette polimerizáció (NMP) egyik legfontosabb eredménye a polisztirol terminális alkinjére illesztett (PEG)-N3 és a metil-metakrilát (MMA) ATRP reakciója, melynek során egy háromágú csillag alakú molekula keletkezett, minden ágában más polimerrel. Ilyen csillagpolimereket állítottak elő pl. Chan és munkatársai, tiol-én click reakció segítségével 2008-ban [17]. MALDI-TOF MS és szűk molekulatömeg-eloszlású standard segítségével kimutatták, hogy a keletkezett molekulák tömegeloszlása meglehetősen szűk. Reverzibilis addíciós hasításos transzfer (RAFT) telekelikus polimerekhez vezet, pl. vinilacetát esetében. RAFT eljárással blokk kopolimereket is állítottak elő, melyek szerkezetük folytán rendkívül fontos alkotóelemei az ún. intelligens anyagoknak [18]. A RAFT előnyei, hogy gyors és megfordítható, így vinil alapú monomerek ellenőrzött/élő körülmények között polimerizálhatók. A gyűrűfelnyílásos polimerizáció és metatézis polimerizáció (ROP, ROMP) remekül használható blokk-kopolimerek előállítására. Élő anionos és kationos polimerizációval is sikerült kapcsolni a click reakciókat, akárcsak poliaddícióval és polikondenzációval [9]. 2.3.4. Click reakciók PVC-vel Poli(vinil-klorid)on eleddig csupán néhány alkalommal végeztek click reakciót, elsőként egy török kutatócsoport: Yagci és munkatársai. Bár a PVC az egyik legszélesebb körben használt műanyag, számos probléma merül fel vele kapcsolatban, ezek közül az egyik legfontosabb termikus instabilitása. Ez a szabadgyökös polimerizáció során kialakuló szerkezeti hibákra vezethető vissza, pl. labilis tercier allil csoportokra és izotaktikus szakaszok klór ligandumaira. Korábban két kémiai módszert dolgoztak ki a hőstabilitás növelésére: az egyik a klórok helyettesítése erős nukleofil reagensek (pl. tiolok vagy tiolátok) segítségével, a másik módszer pedig az alacsony hőmérsékletű, élő gyökös polimerizációval történő előállítás. Az első metódus növeli a hőstabilitást, a második pedig szinte teljesen kiküszöböli a lágyuláspontot csökkentő szerkezeti hibák kialakulását. Egyéb lehetőségként felmerült a kopolimerizáció imidekkel, illetve a PVC utólagos klórozása. Természetesen a legelterjedtebb megoldás mindmáig különféle adalékanyagok, hőstabilizátorok hozzáadása a műanyaghoz. - 11 -
A benzoxazin mindenféle katalizátor nélkül, tisztán termikus úton polimerizálódik, az említett kutatócsoport pedig ezen polibenzoxazin oldalláncokat vitte fel 1,3-dipoláris cikloaddícióval PVC-molekulákra. A reakció első lépésében az ábrán látható úton előállították a propargil-benzoxazin monomert, az egész reakciósorra nézve 34%-os kitermeléssel (6. ábra).
6. ábra: propargil-benzoxazin monomer előállítása
Ezzel párhuzamosan Na-azid segítségével módosították a PVC oldal"láncait" (lásd 7. ábra), így azid funkciós csoporttal látták el a polimert. N3 * *
NaN3, DMF *
rt, overnight
n
n-m
*
m
Cl
Cl
7. ábra: a PVC kloridjainak szubsztitúciója aziddal
A propargil-benzoxazin propargilcsoportja és az azid oldalláncok 1,3-Huisgen-cikloaddíciós reakciójában kapcsolódik a polimerlánchoz, így hozva létre új polimert, illetve hő hatására a benzoxazin
oldallánc
a
már
említett
gyűrűfelnyitási
átalakuláson
keresztülmenve
polimerizálódik, így keresztkötéseklet hozhat létre és térhálós kopolimert alakít ki. A kész kopolimert NMR, FTIR, TGA, DSC módszerekkel vizsgálták [19]. 2.4. Felületmódosítások PEG-gel A PEG-et régóta használják kozmetikumok, festékek, gyógyszerek és élelmiszerek stabilizáló adalékanyagaként. Ennek oka kedvező sajátságaiban keresendő: víz és számos szerves oldószer is oldja, nem mérgező és széles molekulatömeg-tartományban elérhető. Sok szilárd anyag, pl. a PEG is fehérjét köt meg a felületén, mikor vérrel vagy testfolyadékkal kerül érintkezésbe [20]. A vér saját folyási és alvadási mechanizmusa, a hemosztázis igen
- 12 -
érzékenyen reagál ezekre a szilárd anyagokra [21]. Szinte azonnal fehérjék és vérlemezkék tapadnak fel a szilárd anyag felületére és hamarosan a vörösvértestek is követik. Ez mind a szilárd anyagot, mind a vérkészítményt tönkreteheti. Néhány szilárd anyagnak megvan az a különlegessége, hogy a vér és más testfolyadékok inertek rájuk nézve, azaz vérbe kerülésük nem jár a fenti fiziológiás válasszal [22]. Bár hosszabb távon itt is léphetnek fel komplikációk, ez jóval lassabb folyamat, mint nem testbarát anyagok esetén. Hogy egy adott vegyület testbarát lesz-e, azt jó pontossággal meg lehet tervezni, viszont a végső eredményt úgyis kizárólag a "trial and error" módszer, azaz az egyes anyagok kipróbálása során kapjuk meg. Az egyik ilyen, kísérletezéssel kapott anyag a polietilén-glikol, mely az egyik legkiválóbb ismert testbarát vegyület. A PEG-gel való felületmódosításhoz rendszerint monometoxi-PEG-et használnak, préseléses technológiával [21]. A kész polimeren, illetve a módosítatlan anyagokon gyakran végeznek kísérleteket, mint pl. nedvesedésmérés, biokompatibilitási vizsgálatok (in vitro és in vivo vérkészítmény, vérplazma, véralvadási tesztek, stb.).
- 13 -
3. Célkitűzések Mint a fentiekből is látható, a PEG egyike a legjobb ismert testbarát anyagoknak, s ilyen minőségében széles körű felhasználással rendelkezik. Számos előnyös tulajdonsága miatt került a látókörömbe ez az anyag. Korántsem mondható el ugyanez a PVC-ről, mely - apoláris lévén - nem kompatibilis az élő szövetekkel. Mivel az infúziós csövek és vértranszfúziós tasakok túlnyomó része polivinil-klorid alapú, ezért ezekre a műanyagokra kicsapódnak egyes fehérjék, vérsejtek és a vérplazma, a vérkészítmény minősége és felhasználhatósága pedig gyorsan és jelentősen csökken [5]. Jelen munka alapját azon ötlet szolgáltatja, hogy ha a PVC-re valamiképp sikerülne PEGoldalláncokat felvinni, ez növelné a lánc hidrofilitását, így testbarátabbá tenné. Az oldallánc módosítására szolgáló módszerül egy ún. "click" kapcsolást választottunk, mely egy 1,3dipoláris cikloaddíció. A munka közben merült fel célként egy olyan módszer kidolgozása is, mely lehetővé teszi a PVC azidálási reakciójának, azidáltsági fokának kvantitatív meghatározását. Mivel a klorid és azidcsoport csúcsa gyakorlatilag azonos kémiai eltolódással bír az 1H-NMR spektrumban, ez a probléma is megoldásra vár. Az így meghatározott azidáltsági foknak megfelelően elkészített PEG-gel ojtott blokk kopolimer biokompatibilitása feltehetően jobb a közönséges PVC-énél, ami javítaná az említett tasakok minőségét. A dolgozat ezen munka eddigi eredményeit hivatott összefoglalni. Célom ugyanakkor kettős: egyrészt a már említett PVC-PEG ojtott blokk kopolimert elkészíteni, hogy azt később biokompatibilitási vizsgálatoknak vethessük alá, ezt a kapcsolást Sharpless-cikloaddícióval terveztem elvégezni.
- 14 -
4. Kísérleti rész
4.1. Alkalmazott vegyszerek 4.1.1. Vegyszerek eredete Az NMR-spektroszkópiához használt deuterált THF (tetrahidrofurán) és kloroform Euriso-top márkájú. A felhasznált metanol, hexán, toluol, dietil-éter és THF a Molar Chemicals gyártmánya. A PVC-minta ipari eredetű S5070, a BorsodChem NyRt. Gyártmánya. Az összes többi felhasznált vegyszer az Aldrichtól származik. A tárolásra nem érzékeny vegyszereket az átvett állapotukban használtam fel, az érzékenyeket (oldószerek, CuBr) az alább ismertetett módon tisztítottam, a tényleges reakció indítása előtt legfeljebb néhány nappal. Az érzékeny anyagok tárolása hűtőben, nitrogén alatt történt.
4.1.2. Vegyszerek tisztítása
CuBr: A tisztítani kívánt réz(I)-bromidot egy éjszakán át jégecetben kevertetjük, majd nitrogén átfúvatásával, túlnyomás alatt, üvegszűrőn leszűrjük. A szűrőn etanollal és dietil-éterrel kétszer-kétszer mossuk. Dimetil-formamid: Az oldószerhez kevés (500 ml-hez 3-4 spatulányi elegendő) CaH2-et adunk és nitrogén atmoszféra alatt egy órán át kevertetjük. Ezután az oldószert redős szűrőn az adólombikba szűrjük és nitrogén alatt, vákuumban ledesztilláljuk. Fp: nyomásfüggő Tetrahidrofurán: Az oldószer kevés mintájához vanádium-pentoxid kénsavas oldatát adjuk 1:1 arányban egy kémcsőben. Amennyiben az oldószer peroxidos, a próba megbarnul: ekkor egy éjszakán át CuCl-on állni hagyjuk a THF-et, majd a próbát megismételjük. Negatív teszt esetén a tisztítandó oldószerhez kevés (500 ml-hez 3-4 kanálnyi elegendő) KOH-ot adunk és nitrogén atmoszféra alatt fél órán át refluxoltatjuk. Fp: 60-65 °C Toluol: A toluolhoz literenként 1-2 g fémnátriumot és ezzel ekvivalens benzofenont adunk. Ezt addig refluxoltatjuk, míg halvány kék színű nem lesz, ezután légköri nyomáson átdesztilláljuk. Fp: 105-110 °C
- 15 -
4.2. Receptek 4.2.1. PVC azidálása [23]
Bemérések: Anyag PVC Me3SiN3 TBAF THF
M 62,5 g/mol 115 g/mol 261 g/mol
n/mmol 160 160 160
m 10 g 18,4 g 41,76 g
ρ
V
0,832 g/ml
22,1 ml 500 ml
Eljárás: 10 g (0,16 mol) PVC-port egy 1 l-es gömblombikban 500 ml frissen desztillált THF-ben kitartó kevertetés vagy rázogatás mellett feloldunk. Az oldathoz fecskendővel 22,1 ml azidotrimetilszilánt mérünk és a lombikba 41,76 g tetrabutil-ammónium-fluoridot szórunk. A reakcióelegyet 36 órán át 50 oC-on kevertetjük, majd hideg (0 oC-os) metanolban kicsapjuk. A kész polimert leszűrjük, szárítjuk, fénytől és hőtől védett helyen tároljuk.
4.2.2. PVC azidálásaYagci szerint [19]
Bemérések: Anyag PVC NaN3 DMF
M 62,5 g/mol 65 g/mol
n/mmol 32 32
m 2g 2,08 g
ρ
V
100 ml
Eljárás: A PVC-t bemérjük egy 250 ml-es gömblombikba és feloldjuk 100 ml száraz DMF-ben nitrogén alatt. Tölcséren keresztül az oldathoz adjuk a 2,08 g Na-azidot. Az elegyet nitrogén
- 16 -
alatt, szobahőfokon egy éjszakán át kevertetjük, majd a polimert főzőpohárba bemért, 200 ml 1:1 arányú vizes metanolba kicsapjuk, leszűrjük és vákuumban kiszárítjuk. 4.2.3. PVC azidáltsági fokának vizsgálata[19]
Bemérés: Anyag PVC-azid Fenilacetilén HMTETA CuBr DMF
M 69 g/mol 102,13 g/mol 238 g/mol 143,5 g /mol
n/mmol 5 5 3 3
m 345 mg 510 mg 715 mg 430 mg
ρ
V
0,93 g/ml 0,847 g/ml
0,55 ml 0,85 ml 10 ml
Eljárás: 50 ml-es lombikba bemérünk 15 ml száraz (desztillált) DMF-et, majd nitrogénáramot biztosítva, keverés közben (mágneses keverő) ebbe adagolunk 0,345 g
részlegesen azidált PVC-t
0,255 g
fenilacetilént
0,215 g
réz-bromidot
szobahőfokon. Ezután a lombikra szeptumot helyezünk, végül 0,360 g HMTETA-t adagolunk a lombikba. A reakcióelegyet egy napig kevertetjük szobahőfokon nitrogén atmoszféra alatt. A rézsókat leszűrjük, a polimert pedig 200 ml metanolban kétszer kicsapjuk (két kicsapás között kevés kb. 10-15 ml deszt. THF-ben oldjuk), leszűrjük, majd vákuum alatt szárítjuk szobahőfokon súlyállandóságig. A kicsapás után oszlopkromatográfiát is végezhetünk neutrális alumínium-oxid + ujjnyi szilikagél oszlopon (nem feltétlenül szükséges, lásd az Eredmények részt).
- 17 -
4.2.4. PVC azidálási reakció időfüggésének vizsgálata[19] (folyamatban)
Bemérések: Anyag PVC NaN3 DMF
M 62,5 g/mol 65 g/mol
n/mmol 320 320
m 20 g 20,8 g
ρ
V
1000 ml
Eljárás: Egy 2 l-es gömblombikban a PVC-t feloldjuk 700 ml, az azidot pedig 300 ml száraz DMFben (ez utóbbit frissen oldjuk, ha a PVC feloldódott!), nitrogén alatt. Tölcséren keresztül lassan a PVC-hez öntjük az azidoldatot. Az elegyet szobahőfokon, nitrogén atmoszféra alatt mechanikus keverővel elkezdjük kevertetni, majd 200-200 ml mintát veszünk 4, 26, 44, 52, 72 óra után. Minden mintát úgy dolgozunk fel, hogy 2000 ml 1:1 arányú vizes metanolba kicsapjuk, leszűrjük és vákuumban kiszárítjuk. Az egyes minták azidáltsági fokát a 4.2.3 kísérlet szerint határozzuk meg. 4.2.5. Monofunkciós PEG (metoxi-PEG, mPEG) propargilálása [6, 24]
Bemérések: Anyag
mPEG-1100 NaOH Propargil-Br Toluol Anyag
mPEG-5000 NaOH Propargil-Br Toluol
M/gmol-1 n/mmol
1100 40 119
5 75 75
M/gmol-1 n/mmol
5000 40 119
1 20 75
m v. V
5,5 g 3g 8,4 ml 100 ml m v. V
5g 0,8 g 8,4 ml 100 ml
Eljárás:
- 18 -
A mPEG-et egy 250 ml-es, száraz gömblombikban feloldjuk 100 ml, Na+benzofenonról desztillált toluolban és hozzáadjuk az NaOH-t. Nyomáskiegyenlítős csepegtetőtölcsérbe beletöltjük a propargil-bromidot (vagy annak max. 10-15 ml toluollal készült oldatát, ez főleg a nagyobb mPEG-eknél hasznos), majd a rá szerelt gázbevezető rendszer segítségével nitrogén alá helyezzük a rendszert. Ezután lassú becsepegtetés mellett a rendszert 50 °C-ra melegítjük és 15-24 órán át kevertetjük. Az elegy lehűlése után a toluolos oldatot dekantáljuk (a maradék sót kevés toluollal átmoshatjuk), majd a dekantált oldatot bepároljuk. A maradékot feloldjuk 50 ml desztillált vízben, NaCl-dal kisózzuk és 4x25 ml diklórmetánnal extraháljuk egy 250 ml-es rázótölcsérben. Az egyesített szerves fázist 3x10 ml vízzel mossuk, Mg-szulfáton egy éjszakán át szárítjuk, majd leszűrjük, bepároljuk 25 ml-re és 250-300 ml hideg dietil-éterbe kicsapjuk. Az étert dekantáljuk, a terméket vákuumban szárítjuk. 4.2.6. PVC ojtása PEG-gel [19]
Bemérések (20% azidáltsági fokra számolva): Anyag M PVC-azid 66 g/mol PEG-CCH 400 400 g/mol 2,2’-bipiridil 156,2 g/mol CuBr 143,5 g /mol DMF THF
n m ρ 7,73 mmol 500 mg 2,58 mmol 1240 mg 5,15 mmol 800 mg 2,58 mmol 460 mg
V
13 ml 13 ml
Eljárás
Nitrogén atmoszféra alatt, egy 100 ml-es gömblombikban feloldunk 0,5 g PVC-azidot és monofunkciós propargilált PEG-et, valamint 800 mg 2,2-bipiridilt feloldunk 20 ml absz. dimetil-formamidban, 460 mg réz(I)-bromidot pedig másik 20-25 ml-ben, szintén nitrogén
- 19 -
atmoszféra
alatt.
A CuBr-oldatot
fecskendővel
hozzáadjuk
a
szeptummal
lezárt
reakcióelegyhez és olajfürdőben, 50 oC-on 3 napon át kevertetjük. A rézsókat leszűrjük, majd a kész polimert 4-500 ml absz. metanolban kicsapjuk, vákuum alatt szárítjuk. 4.2.7. PVC ojtása PEG-gel II.
50 ml-es lombikba bemérünk 10 ml száraz (desztillált) THF-et, majd nitrogénáramot biztosítva, keverés közben (mágneses keverő) ebbe adagolunk 0,530 g
részlegesen azidált PVC-t
0,230 g
réz-bromidot
szobahőfokon. Ezután 10 ml abszolút DMF-et adunk hozzá és a lombikra szeptumot helyezünk. Végül 1,760 g propargilált PEG és 0,380 g HMTETA 6 ml 1:1 THF-DMF elegyével készült oldatát adagoljuk a lombikba. A reakcióelegyet 24 órán át kevertetjük szobahőfokon nitrogén atmoszféra alatt. A rézsókat leszűrjük, a polimert pedig 200 ml hideg hexánban, majd 200 ml 1:1 vizes metanolban kétszer kicsapjuk (két kicsapás között kevés kb. 10-15 ml deszt. THF-ben oldjuk), leszűrjük, majd vákuum alatt szárítjuk szobahőfokon súlyállandóságig. 4.3. Vizsgálati módszerek
4.3.1. NMR A mágneses magrezonancia spektroszkópia
immár évtizedek óta a legfontosabb
szerkezetkutató és szerkezetigazoló módszer a szerves és biokémia területén. Működése során olyan atommagok rezonanciajelenségét használja fel, melyek megfelelő frekvenciájú rádióhullámok hatására mágneses rezonanciajelet adnak. Mivel az atommagok árnyékoltak
- 20 -
(van körülöttük elektronfelhő), ezért a rezonanciajelek el fognak tolódni az árnyékolatlan atommaghoz képest, mégpedig az elektronszerkezet milyenségére jellemző mértékben. Kismértékben más lesz tehát pl. egy metilcsoport és egy karboxil protonjának a rezonanciafrekvenciája. Ezt a változást nevezzük kémiai eltolódásnak. Nilla értéknek egy olyan, megállapodás szerinti standardot tekintünk, amelynél kisebb δ igen ritkán fordulnak elő és amelyet megfelelően gazdaságos gyártani. Ez a standard a tetrametil-szilán (TMS). Az NMR nem igényel kalibrációt, viszont a spektrumok olykor meglehetősen bonyolult szerkezete miatt gyakorlatot és értelmező készséget igen. Bármilyen nem egész spinű magot lehetséges mérni oldat és/vagy szilárd fázisban, ám jelen kutatás céljainak az egydimenziós, oldatfázisú proton-NMR (mely mind közül messze a legelterjedtebb méréstípus) tökéletesen megfelel. A spektrumokat úgy vettük fel, hogy 20-25 mg mintát feloldottunk 800 ml deuterált oldószerben (PVC-tartalmú anyagoknál ez d8-THF volt, PEG-eknél CDCl3. Ezután rutin spektrumokat vettünk fel (8 scan) 200 MHz-es Varian spektrométeren, mely minden esetben elegendőnek bizonyult és kiértékelhető spektrumokat kaptunk. Ezeket az ACDLabs NMR Viewer és NMR Processor programjai segítségével értékeltem ki. 4.3.2. Gélpermeációs kromatográfia (GPC) A gélpermeációs, más néven méretkizárásos kromatográfia a folyadékkromatográfiák egy speciális, makromolekulák vizsgálatára kifejlesztett típusa. Az ismert módszerek (pl. ultracentrifuga, SANS, stb.) közül ez a leggyorsabb és a legkényelmesebb, ha egy makromolekuláris anyag molekulatömeg-eloszlására vagyunk kíváncsiak. A többi módszertől eltérően a GPC kalibrációt igényel, ezért a kvantitatív meghatározáshoz szükséges valamilyen abszolút mérési módszer, pl. fényszórás vagy ozmometria. A detektor a többi kromatográfiás módszerhez hasonlóan itt is koncentráció-arányos jelet ad, a legjellemzőbb detektortípusok a differenciál refraktométer, differenciál viszkoziméter, illetve az UV-abszorpciós detektor. A GPC nem abszolút mérési módszer, a molekulatömeg többé-kevésbé pontos meghatározásához (a hiba nagyjából 10% az általunk használt készülék esetében, újabb eszközöké valamivel kisebb) kalibrációra van szükség. Ez lehet specifikus, ún. konvencionális kalibráció egy adott polimerre, ha rendelkezünk a szóban forgó anyag ismert moláris tömegű, szűk eloszlású mintájával. Amennyiben ez nem áll fenn, vagy többcélú felhasználást szeretnénk, úgy folyamodhatunk az ún. univerzális kalibrációhoz, mely min. 18 standard, szűk molekulatömeg-eloszlású polisztirol-mintára nézve kalibrálja a mérést, és az eluens
- 21 -
térfogata, illetve az átfolyó minta hidrodinamikai térfogata alapján állítja fel a kalibrációs görbét. Az általunk használt berendezés három darab egymás után sorba kötött PLgel Mixed-C típusú oszlopból állt. Detektorként Viscotek Dual differenciál refraktométer, differenciál viszkoziméter kettős detektorrendszert használtunk. A minták kiértékelése univerzális kalibrációval történt TriSec szoftver alkalmazásával.
- 22 -
5. Eredmények és értékelésük 5.1. PVC azidálási kísérletek Összesen három PVC-azidálási és két vizsgálati kísérletet végeztem. Az első azidálás trimetilszilil-aziddal, TBAF jelenlétében történt. A PVC több óra alatt oldódott fel a desztillált THF-ben, a reakcióidő lejárta után pedig a kicsapáskor fehér, nagy pelyhes csapadék vált ki, mely szárazon kreppapír-állagú volt. Amellett, hogy gazdaságtalanul sok vegyszert igényel a módszer, az sem bizonyított, hogy a későbbiekben használt Na-azidnál gyengébb trimetilszilil-azid egyáltalán megazidálta a PVC-t. Az NMR-spektrum nem bizonyult perdöntőnek. Ennek oka, hogy a klorid és az azid protonjele ugyanott, a 4,50 ppm körüli széles sávban jelentkezik. Így tehát nem lehet őket egymástól megkülönböztetni. A kísérlet során kapott termékkel további vizsgálatokat nem végeztünk.
8. ábra: a kiindulási PVC 1H-NMR spektruma
- 23 -
9. ábra: az első módszerrel azidált PVC 1H-NMR spektruma
A bemutatott NMR-spektrumokon nem látszott különbség a kiindulási (8. ábra) és a kapott (9. ábra) anyag között, eltekintve minimális mennyiségű szennyezéstől. Tehát az azidálás valósznűleg nem járt sikerrel, más eljárással próbálkoztunk. A második kísérlet már Yagci és munkatársai módszerével (DMF-ben, Na-aziddal, szobahőfokon) zajlott. A PVC szintén igen lassan oldódotfel, s itt is fehér, nagy pelyhes, szárazon kreppapírhoz hasonló polimert kaptunk. Mivel ez az NMR-spektrum (10. ábra) sem mutatott releváns eltérést a kiindulási PVC-től, mert sajnálatos módon a klórral és az aziddal szomszédos szénen található protonok csúcsa (széles sáv 4,5 ppm-nél) fedi egymást, más módszert kellett találnunk az azidáltsági fok megállapítására.
- 24 -
10. ábra: a Yagci-módszerrel [19] azidált PVC 1H-NMR spektruma
Olyan ligandumot kellett találnunk, amely az azid csoportokra biztosan kvantitatívan rákapcsolódik, és olyan tartományban ad NMR-jelet, amit az alap PVC spektrum nem fed le. Előbbi célnak megfelel bármilyen alkin funkciós csoporttal rendelkező vegyület (Huisgencikloaddíció), utóbbinak pedig egyebek mellett valamilyen aromás gyűrűvel rendelkező molekula.
11. ábra: a fenilacetilénnal kapcsolt, részben azidált PVC 1H-NMR spektruma
- 25 -
A két szempont ötvözésével esett a választás a fenilacetilénre, mivel aromás gyűrűt clickreakcióval kapcsol a PVC azidált oldalláncaira. Ezáltal lehetővé vált az azidáltsági fok kvantitatív vizsgálata, ráadásul némi gyakorlati tapasztalatszerzésre is mód nyílt a PVC click reakcióinak területén. További előnyös tulajdonság, hogy nem ad nagyszámú jelet, így a fölös, zavaró jelek nem jelennek, A kapcsolást DMF-ben végeztem, rézzel és ékszerrel megy, kapcsolt terméket először vizes metanolba próbáltam meg kicsapni, ám oldatban maradt. Ezért rotációs vákuumbepárló segítségével szárazra pároltam az anyagot, kevés THF-ben feloldottam és hideg hexánba csaptam ki. Ezt oszlopkromatográfia és még egy hexános kicsapás követte. A korábban élénk zöld színű anyag az oszlopozás után fehér, kreppapír-állagú lett. A termék NMR-spektruma a 11. ábrán látható. A korábbi spektrumhoz képest három új csúcs jelenik meg itt, 7 és 9 ppm között. Ezek közül a 7,37 és 7,89 ppm-nél található csúcsokat mint aromás protonokat sikerült azonosítani (szakirdolaom, míg a 8,35 ppm-es csúcs (továbbiakban: T) triazol jelenlétére utal [26]. Ennek alapján számoltuk ki az azidáltsági fokot is. Mivel a triazolon egyetlen proton található, ez a csúcs megadja az átalakult oldalláncok mennyiségét. Feltételezve, hogy a reakcióidő alatt minden azidcsoport továbbalakult, a 4,5 ppm körüli sávhoz (továbbiakban: C) immár kizárólag a klór melletti protonok járulnak hozzá. Tehát a két csúcs integráljából a Pazid
T ,%
T
100 C
összefüggés alapján kiszámítható az azidáltsági fok, mely a 4.2.2. kísérletben kapott PVCazid esetén ~3,7%-nak adódott.
- 26 -
12. ábra: a fenilacetilénnal kapcsolt, 72 óráig azidált PVC 1H-NMR spektruma
A nagyobb méretű azidálási kísérlet során az öt vett minta mindegyikét feldolgoztam, az ötödiken pedig a fenti azidáltsági vizsgálatot is sikerült elvégezni. A vizsgálat eredménye a 12. ábrán látható. A releváns integrálok értékéből következik, hogy az azidáltsági fok ~11,2 % körüli. Ez számottevően nagyobb, mint a másik, egy éjszakás reakcióidejű kísérlet értéke. Bár Yagciék a rövidebb időt ajánlották cikkükben, ez a jelek szerint inkább szól az időmegtakarításról, mint a reakció maximális hatékonyságáról. További vizsgálatok szükségesek a témában. Ennél a reakciónál nem került sor a kapcsolt termékek oszlopkromatográfiás tisztítására, mivel a minta kizárólag analitikai célú. A kis mennyiségű maradék réz így nem jelent akkora zavaró hatást, hogy racionális legyen megszabadulni tőle. A minta így zöld lett, de az állaga kreppapír-szerű maradt. Egy fontos adatról nem esett még szó, ez pedig a reakciók kitermelése. Maga a PVC azidálási reakció majdnem kvantitatív, a fenilacetilénes kapcsolás pedig közepesnek mondható kitermeléssel megy végbe. Analitikai célra (azidáltsági fok vizsgálata) véleményem szerint megfelel így is, de nagyobb mennyiségű előállításhoz még optimalizálásra lesz szükség. A kitermeléseket az alábbi táblázat tartalmazza. Az időfüggés vizsgálatánál a mintavétel pontatlansága (mérőhenger) miatt előfordulnak kisebb-nagyobb eltérések, de az átlagos kitermelés ott is 90% körüli az elméleti, 4 g-os partíciókra nézve.
- 27 -
Reakció
Bemérés (g) Várt tömeg (g)
Kapott
Kitermelés
minta (g) Azidálás (NaN3)
1,0006
1,1047
0,9941
89,0 %
Azidálás (4 h)
~4,0000
4,4160
3,9774
90,1 %
Azidálás (26 h)
~4,0000
4,4160
3,4636
78,4 %
Azidálás (44 h)
~4,0000
4,4160
4,6380
100,0 %
Azidálás (52 h)
~4,0000
4,4160
3,8404
87,0 %
Azidálás (72 h)
~4,0000
4,4160
3,9026
88,4 %
Fenilacetilén (NaN3)
0,3450
0,3450
0,1953
57,1 %
Fenilacetilén (72 h)
0,3450
0,3450
0,1010
29,3 %
5.2. PEG propargilálások A laboratóriumban rendelkezésre álló 1100 és 5000 átlagos molekulatömegű metoxi-PEG minták propargilálására került sor. Mindkét anyag fehér, apró szemcsés polimer.
13. ábra: az 1100-as móltömegű PEG-CCH 1H-NMR spektruma
- 28 -
14. ábra: az 5000-es móltömegű PEG-CCH 1H-NMR spektruma
Mindkét spektrumon látható a propargilcsoport kapcsolódását jelző karakterisztikus csúcs 3,3 ppm-nél. Megfigyelhető az is, hogy a 3,58 ppm-nél található csúcs a vártnak megfelelően jóval nagyobb az 5000-es, mint az 1100-as PEG-nél. A kísérletek tehát sikeresnek mondhatóak, a kitermeléseket a lenti táblázatban láthatjuk. Reakció
Bemérés (g) Várt tömeg (g) Kapott (g) Kitermelés
mPEG-1100
5,5006
5,6006
2,9775
53,16 %
mPEG-5000
10,0058
10,0458
5,6023
55,77 %
5.3. PVC-PEG kapcsolás A kezdetben sárgás színű reakcióelegy a reakció során megzöldült, a hexános kicsapás során olajos, sötétzöld anyag keletkezett, melynek térfogata jelentősen nagyobb a termék várt térfogatánál. Ez arra uta, hogy az így kapott anyag oldószer zárványokat tartalmaz. Vizes metanolba átcsapva az anyag feloldódik, ami hidrofil sajátságokra utal. A reakció tehát feltehetően sikeres, de a termék bepárlása, újbóli kicsapása és további vizsgálata még folyamatban van. A molekula tervezett szerkezetének egy részlete a 15. ábrán látható.
15. ábra: a PVC-g-PEG szerkezete (részlet)
- 29 -
6. Összefoglalás 6.1. Összefoglalás A dolgozatban bemutatott kutatás egy olyan új polimer előállítását célozza meg, mely egyesíti magában a PVC előnyös mechanikai és a PEG hidrofil, testbarát tulajdonságait. A megcélzott polimer előállításához egyfajta „click” reakciót, Huisgen-féle dipoláris cikloaddíciót kívánunk használni. Ehhez szükség van egy azid és egy alkin végcsoportos „alkotóelemre”. A szintézissor első lépésében a PVC láncmenti klóratomjait cseréltük le részlegesen azidcsoportokra segítségével, majd ennek azidáltsági fokát egy új, korábban nem alkalmazott módszerrel kvantítatíve meghatároztuk. Elkezdtük továbbá az azidálás konverziójának időfüggés-vizsgálatát. Második lépésben kétféle monofunkciós PEG-et készítettünk elő a kapcsolásra egy propargilálási reakcióval. A harmadik lépés, mely jelenleg is folyamatban van, az azidáltsági vizsgálati reakció tapasztalatait felhasználva a PVC-PEG ojtott kopolimer előállítását célozza meg. Amennyiben a reakció sikeres, szerkezeti, termoanalitikai és mechanikai vizsgálatok következnek annak eldöntésére, hogy a kapott termék milyen tulajdonságokkal rendelkezik és későbbi gyógyászati, vagy másféle felhasználásra alkalmas-e.
6.2. Summary
Our research summarized in this study aims at the preparation of a new polymer, which unites PVC’s beneficial mechanical and PEG’s hydrophilic, biocompatible properties. For the preparation of the desired polymer, we used one of the „click” reactions, called Huisgen dipolar cycloaddition. For this, we need two „building blocks” containing an azide and an alkyne moiety. In the first step of the synthetic route, we have substituted PVC’s side chain chlorines with azide moieties, then measured its azidation degree with a novel method. Furthermore, we began the examination of the time-dependence of this reaction’s conversion rate. In the second step, we prepared two kinds of monofunctional PEGs for clicking by a propargylation reaction. The third step, work still in progress, is the click grafting of modified PVC and PEG, using the experience gained from azidation degree measurement reaction. If the method is - 30 -
succesful, structural, thermoanalytical and mechanical examinations will be scheduled to decide what properties the product has and whether it is suitable for later medical or other uses.
- 31 -
7. Irodalomjegyzék [1] Pukánszky Béla: Műanyagok 66. o. Műegyetemi Kiadó, Bp. 1991. [2] en.wikipedia.org/wiki/Macromolecule [3] en.wikipedia.org/wiki/PVC [4] Moulay, S. Prog. Polym. Sci., 2010 (35), 303-331. [5] en.wikipedia.org/wiki/ Polyethylene_glycol [6] Binder, Sachsenhofer Macromol. Rapid Commun., 2008 (29), 1097-1103. [7] http://en.wikipedia.org/wiki/Click_chemistry [8] Sharpless, Finn, Kolb Angew. Chem. Int. Ed. 2001, 40 (11), 2004-2021 [9] Kolb et al. Angew. Chem. Int. Ed. 2001, 40, 2004. [10] Click chemistry: a "click" away from drug discovery, Aldrich review [11] (a) Rostovtsev, V. V. et al. Angew. Chem. Int. Ed. 2002, 41, 2596. (b) Tornøe, C. W. et al. J. Org. Chem. 2002, 67, 3057. [12] (a) Manetsch, R. et al. J. Am. Chem. Soc. 2004, 126, 12809. (b) Lewis, W. G. et al. Angew. Chem. Int. Ed. 2002, 41, 1053. [13] Speers, A. E. J. Am. Chem. Soc. 2003, 125, 4686. [14] Alonso, F. et al. Tetrahedron Lett. 2009, (50), 2358-2362. [15] Zhang, L. et al. J. Am. Chem. Soc. 2005, 127, 15998. [16] N. V. Tsarevsky, K. V. Bernaerts, B. Dufour, F. E. DuPrez, K. Matyjaszewski, Macromolecules 2004, 37, 9308. [17] Chan, Yu, Hoyle, Chem. Commun. 2008, 4959–4961. [18] Quémener, Davis, Stenzel Chem. Commun., 2006, 5051–5053. [19] Kiskan, Demiray, Yagci, J. Polym. Sci.: Part A: Polym. Chem. 2008, (46), 3512–3518. [20] É. Kiss, J. Samu, Langmuir 1996, 12, 1651–1657. [21] É. Kiss et al., Magyar kémiai folyóirat 2001, (107), 337-344. [22] É. Kiss, MTA doktori értekezés tézisei. 2007, Budapest [23] (a) Matyjaszewski, Nakagawa, Gaynor Macromol. Rapid. Commun. 1997 (18), 10571066. (b) Vin van Camp szakdolgozata nyomán [24] Dimonie, Teodorescu, Macromol. Rapid Commun., 1993 (14), 303-307. [25] Golas, Tsarevsky Sumerlin, Matyjaszewski, Macromolecules. 6451–6457 (39) 2006. [26] http://riodb01.ibase.aist.go.jp/sdbs/cgi-bin/cre_index.cgi?lang=eng
- 32 -