ANATOMIA, KENETVÉTEL, FESTÉS

ANATOMIA, KENETVÉTEL, FESTÉS

Jacques Jenny

Jacques Jenny

Jacques Jenny

Jacques Jenny

Mag………………………….

hematoxylin

Citoplazma “kontraszt” festése: Orange G,/ EA.

EA:

Orange G Savanyu protein festék, mely egyéb festékekkel competitiv reakciót ad a cytoplazmában Kis méretű, könnyen festi a vvt-ket, vastag kenetrészeket Savanyításra került a festősorba, eosinnal van csak versenyben, de csupán pH 6,5 – 3,0 körül. ( Optimálisan pH1-nél fest, pH 3 körül már csak fele intenzitással. )

Eosin, Fényzöld, ( PTA )

Eosin: Nagyobb mint az Orange G, kisebb mint a fényzöld (Light Green) .... mindkettővel „vetélkedik” Magvacska vörös színe, amit a Hematoxylin fém komponense erősít!

Light Green ( Fényzöld ) : amphoterikus festék, festési csúcsa pH 2 körül van. intermedier, metaplastikus ill. endocervikális sejteket festi

PTA

A kompetitiv festés eredménye: Orange G és Eosin: • elszarusodó sejtek színe: narancs – sárga

Fényzöld és Eosin: • ” ál - „ versenyben a monomer forma: keveredés nincsen, a szín vagy vörös, vagy zöld ( sakktábla minta egy sejten belül szabálytalan elszarusodás mellett, pl. HPV infekcióban ) • Valós kompetició az intermedier sejtekben van • Szélek zölden festődnek ha vastag a kenet ( nagy molekula ), fixálatlan sejtek Eosin festődése kifejezett ( fényzöld helyett ).

PTA szerepe: • nem láthatóan kötődik az eosinnal versenyezve a cytoplazma fehérjékhez. Ha ez a hatás erős, a cytoplazma kék lesz ( nem látható PTA + hematoxylin ! ).

Intermedier sejtek zöld színe

Vastag centrum: vörös

A citoplazma kék színe

Vvt.-k vörös színe

A CITOPLAZMA KÉK SZÍNE

INTERMEDIER SEJTEK ZÖLD SZÍNE

TRANSPARENCIA (Orange-G nélkül)

NARANCS SZÍN: PARAKERATOZIS

NARANCS SZÍN: LAPHÁMCC. NYAKI ÁTTÉTE

MIKROSZKÓP

Mechanikai alkotók l. állvány 2. tárgyasztal 3. tubus (cső) Az állítószerkezet részei 4. makrométer csavar 5. mikrométer csavar Az optikai rész alkotói A megvilágító rendszer részei 6. fényforrás 7. diafragma (fényrekesz) 8. kondenzor 9. színszűrő Az optikai nagyító rendszer részei A. okulár (B. objektívrevolver) C. objektív (tárgylencse)

STATISZTIKAI ÉRTÉKELÉS ALAPELEMEI

TESZT

VÉGEREDMÉNY +

-

+

a b

-

c d

A = VALÓDI POZITIV

( VP )

B=

( áP )

ál -

POZITIV

C = ál - Negativ ( áN ) D = VALÓDI

Negativ

( VN )

Szenzitivitás:

Mennyit ismerek fel betegségnek azok közül, akik valóban betegek

VP VP+aN (összes pozitív)

X 100 Specificitás: VN VN+aP

(összes negatív)

Mennyit ismerek fel egészségesnek azok közül, akik valóban egészségesek

Pozitiv prediktiv érték:

Mennyire helyesen itéltem meg előre betegségnek azt, ami valóban betegség

VP VP+aP

X 100 Negatív prediktiv érték : VN VN+aN

Mennyire helyesen itéltem meg előre betegség hiányának azt, ami valóban nem betegség

SEJT TIPUSOK

Érett felszines laphámsejt

Parabazális sejt

Vvt Leukocita

lymphocita

plazmasejt

histiocita

SEJT TIPUSOK

SEJT TIPUSOK

SEJT TIPUSOK

SEJT TIPUSOK

SEJT TIPUSOK

SEJT TIPUSOK

POST PARTUM KENET

BAKTÉRIUMOK • egysejtűek • karyoplazma (membrán nélkül) és citoplazma (membránnal); tokjuk is lehet • táplálékuk és túlélésük környezetük függvénye

PATOGÉN

FAKULTATIV PATOGÉN

mindig betegséget okoz

meghatározott körülmények

között okoz betegséget

mennyisége sok; gazdaszervezet gyenge; környezet kedvezővé válik; védelmet nyújtó hámréteg sérül; stb…..

DÖDERLEIN FLÓRA

1.

intermedier sejtek membránját feloldják - citolizis

2.

a citoplazmában található glykogénből tejsavat produkálnak ( hüvely pH 3,5-)

3.

ugyanezen glikogén a fő táplálékuk

4.

fenti folyamat biztosítja az optimális savi környezetet

endocervix

ectocervix

GYAKORI: • ciklus

második fele

• terhesség alatt • cukorbetegségben • progeszteron dominanciájú fogamzásgátlás esetén • menopauzában Döderlein flóra jelenlétében egyéb kórokozók nem viselkednek patogén módon; Döderlein hiányában fakultatív kórokozók patogen módon viselkedhetnek ( egyéb kórokozók által okozott fertőzésben Döderlein flóra nincsen jelen )

LEPTOTHRYX ( nem patogén ) Feltüntetése a leleten nem kötelező, de…. JÓ, HA ÉSZREVESSZÜK, MIVEL Trichomonas gyakori Leptotrix mellett!

KÓROS BAKTÉRIUM FLÓRA

nem Döderlein • coccusok és pálcák • Gardnerella ( hemophylus ) vaginalis

• „vörös” sejtek a háttérben • „irritált” sejtkép • külső fertőzés következménye

Clue ( kulcs) sejt

ACTINOMYCES ÉS IUD

ACTINOMYCES: • baktérium, fonalszerű csoportokat alkot • gyakori IUD mellett • Gram pozitiv • kismedencei szövődménye lehet

Ágyu-golyó

TRICHOMONAS VAGINALIS OSTOROS PARAZITA

(FLAGELLATA )

Jellemzői:

Indirekt jelek a kenetben:

• mérete ??

• „ cannonballs”

• formája !!

• orangofilia

• festődése??

• autolizis a citoplazmában

• elhelyezkedése ??

• mag nélküli laphámsejtek

• magja !!!!!

• kettős magvú alakok

• indirekt jelek a kenetben

• mag enyhén nagyobb • hyperkromatikus mag

Differeciál diagnosztika:

• mag körül udvar

• enyhe dysplázia

• Gardnerella vagy/és Leptorix kisérője

• HPV

• csupasz magvak

CANDIDA GOMBA Megjelenése a hüvelyflóra változásához kötött

Ha csak fonalak: Geotrichum Ha csak ( és nagy ) spórák: Torulopsis

Indirekt jelek a kenetben: • mag nagyobb, de nem hyperkrom, kromatin szabályos • hyperkeratosis, enyhe • neutrophil leukocyták „lysise” ( elkülönitendő Trichomonastól! )

FÉREGPETE

• Gyermek vagy idős korban • leggyakrabban Enterobius vermiculáris

EGYÉB

• bőrgomba

• szennyezés, ami kórokozót utánoz

MŰTERMÉKEK, TECHNIKAI HIBÁK, „IDEGEN” ANYAGOK

• alternária • talkum • fixálási műtermék • ondó / spermium ( post coitális kenet ) • haematoidin (?) radiális kristály (?) • „ corn flakes „

LSIL és HSIL

Regressziv retroplázia

Normál euplázia

Progressziv proplázia

Daganatos neoplázia

J.K. FROST/JENNY

nagy sejtes, laphámcc Kis sejtes, CIS

A HPV fertőzés „klasszikus” citológiai jelei

•Koilocyta •Dyskaryosis

A HPV fertőzés „nem klasszikus” citológiai jelei • • • • •

két- vagy többmagvúság orsó alakú sejtek és magok sejtmag - degenerációk többmagvú óriássejtek a citoszkeletális filamentumok kondenzációja • keratohialin- és keratohialin - szerű granulumok megjelenése

HPV “cytomorphological markers” Bi or multinucleation Karyorrhexis Cleared cytoplasm Multinucleated giant cells Condylomatous parabasal cells

Koilocytosis * Mild koilocytosis Condensation of filaments

Dyskeratocytes*

Naib & Masukawa, 1961; Meisels & Fortin, 1976; Schneider et al., 1987 Naib & Masukawa, 1961; Takahashi, 1982 Schneider et al., 1987 Spindle cells Schneider et al., 1987 De Borges et al., 1989; Luzzatto et al.,1990 Meisels et al., 1988

Koss & Durfee, 1956; Meisels & Fortin, 1976 Schneider et al., 1987 Schneider et al., 1987

Meisels & Fortin, 1976; Purola & Savia, 1977

Mild dyskeratosis Schneider et al., 1987 Perinuclear halos Naib & Masukawa, 1961; Meisels & Fortin, 1976; Schneider et al.,1987 Nuclear hyperchromatism Meisels & Fortin, 1976; Schneider et al., 1987 Keratohyalin and keratohyalin- like granules Schneider et al., 1987 Smudge chromatin Meisels et al., 1988 Spindle nuclei Shroyer et al., 1990

CIN. I. ( hpv ) DIAGNOSZTIKUS KÖVETELMÉNY SEJTMAG ELTÉRÉS és CITOPLAZMA ELTÉRÉS ( pl.perifériás megvastagodás, elszarusodás zavarai, stb.)

CIN 1. és HPV jelek nem mindig megkülönböztethetőek

CIN. I.

HSIL/CIN2 • sejt mérete kisebb mint a CIN1, nagyobb mint CIN3 ( kb. parabasalis, esetleg kisebb intermedier sejt-méret) • mag méret nagyobb, minimálisan különböző • kromatin: rögös, „aktív” sejtekéhez hasonló • citoplazma mutathat érési jeleket, ez nem felel meg a mag méretének és érettségének • sejtek egyesével vagy csoportokban, háttér tiszta vagy csupán lobos • magvacska nincsen vagy nem jellemző • a jellegzetes HPV ( koilocitotikus ) atypia már ritkább mint CIN1 esetén

HSIL/CIN2

HSIL/CIN3-CIS

Tipusai: • elszarusodó – van citoplazma differenciáció, fiber/ebihal sejtek ( Papanicolaou inv. rákban írta le!) • kp. differenciált nagysejtes • kis sejtes anaplasticus ( „harmadik sejt” tipus, GRAHAM )

HSIL/CIN3

HSIL/CIN3-CIS

W. Schauenstein, 1908, GN Papanicolaou, 1942

R,M, Richart, 1967

TBS, 1988, 1991, 2001

HPV + CIN I. DYSPLASIA I.

CIN. I. LOW GRADE SIL

DYSPLASIA II.

CIN. II.

HIGH GRADE SIL

DYSPLASIA III. CIN III. CC. IN SITU

CIN II. + CIN III. + CC. IN SITU

CIN léziók természetes viselkedése ( K. Syrjänen et al. EUROGYN-WHO 1997.)

Regrediál Perzisztál CIN II.-III. Invaziv cc.

CIN I.

CIN II.

57 % 32 % 11 % 1 %

43 % 35 % 22 % 5 %

Rate

HPV fertőzés és rák kialakulásának időbeli lefolyása

HPV Precancer

15 év

Cancer

30 év

45 év életkor

Lifetime incidence of genital HPV infection >80% in U.S.

HPV FERTŐZÉSI CIKLUSA HPV (LEEGYSZERÜSÍTVE)

SZŰRÉS

LAPPANGÓ FERTŐZÉS Nem okoz betegséget!

HPV FERTŐZÉS Sejtmagban zajlik

AKTIV FERTŐZÉS Betegséget okoz virus exit

Sejt elpusztul virus

capsid protein

Virus DNS replikációja

+

Capsid protein képzése

Sejt érés viral DNA

Virus termelés kezdődik

Sejtmag: chromosomalis DNS

Sejtmag: chromosomalis és viralis DNS, nincs capsid protein

INTEGRÁCIÓ Virus DNS gazdasejt genetikai állományának részévé válik malignus sejtek

Humán Papillomavirus Testing for Triage of Women With Cytologic Evidence of Low-Grade Squamous Intraepithelial Lesions: Baseline Data From a Randomized Trial. The ASCUS/LSIL Study (ALTS) Group, Journal of the National Cancer Institute, Mar 1, 2000: 92 (5):.397-402.

642 LSIL diagnozis nyomán az esetek 82,8%ban HG HPV jelen van.( 30 éves kor felett ez csökken) LSIL esetében a HPV meghatározás a követés módjának megválasztásában nem informatív

HPV FERTŐZÉSI CIKLUSA (LEEGYSZERÜSÍTVE)

HPV SZŰRÉS



CITOLOGIA AKTIV FERTŐZÉS Betegséget okoz virus exit


capsid protein


+







HPV FERTŐZÉSI CIKLUSA (LEEGYSZERÜSÍTVE)

HPV SZŰRÉS



CITOLOGIA AKTIV FERTŐZÉS Betegséget okoz virus exit


capsid protein


+







L 3 antitest

70 60 50 40 30

H. Griesser, H. Sander, R. Hilfrich

20 10 0

LSIL L1+

HSIL L1+

LSIL L1-

HSIL L1-

perzisztál

10

15

5

9

remissióba kerül

22

23

1

2

CIN1

1

0

6

4

CIN2

2

3

4

7

rosszabb mint CIN2

7

9

20

61

Schmidt, D., Bergeron, C., Denton, KJ., Ridder, R., European CINtec Cytology Study Group p16/ki-67 dual-stain cytology in the triage of ASCUS and LSIL papanicolaou cytology: results from the European equivocal or mildly abnormal Papanicolaou cytology study. Cancer Cytopathol.2011 Jun 25;119(3):158-66

A p16/Ki-67 dual-stain cytologia senzitivitása CIN2-nél súlyosabb léziók felismerésére 92.2% (ASCUS) and 94.2% (LSIL), specificitása 80.6% (ASCUS) and 68.0% (LSIL) esetén. Az eredmények nem különböznek 30 éves kor alatt vagy felett.

HPV FERTŐZÉSI CIKLUSA (LEEGYSZERÜSÍTVE) LEEGYSZERÜSÍTVE)

HPV SZŰRÉS



CITOLOGIA AKTIV FERTŐZÉS Betegséget okoz


virus exit Sejt elpusztul virus

capsid protein


+



HPV-E7....Rb:


E2F aktiválja mind osztódást (Ki 67) mind p16ink (cyclin dependens kináz, Chr9p21) aktivitását p16ink/Ki 67 dual festés!



Immunomarkers in Gynecologic Cytology: The Search for the Ideal ‘Biomolecular Papanicolaou Test’ Álvaro P. Pinto a Martin Degen b Luisa Lina Villa c Edmund S. Cibas

Acta Cytologica 2012;56:109–121

( BETHESDA 2001 )

„A cervico/vaginális cytologia a laphám rák és megelőző állapotainak szűrését szolgáló módszer. Nem eléggé pontos az endometriális elváltozások felismerésében, ezért endometrialis elváltozások és azok okainak felderítésére a használata nem javasolt ”

Mdkft/FFK 2003

( BETHESDA 2001 ) III. ÖSSZEFOGLALÓ VÉLEMÉNY (nem kötelező)

V. KIEGÉSZÍTŐ TESZT módszer rövid leírása és az eredmény közlése olyan módon, hogy az a klinikus számára könnyen érthető legyen

?

III. ÖSSZEFOGLALÓ VÉLEMÉNY (nem kötelező) • Negative for Intraepithelial Lesion or Malignancy • Epithelial Cell Abnormality: See Interpretation/Result (specify ‘squamous’ or ‘glandular’ as appropriate) • Other: See Interpretation/Result (e.g. endometrial cells in a woman > 40 years of age)



Mdkft/FFK 2003

FEJLÉC,LABOR ADATAI

Mdkft/FFK 2003

Terminologia és minőségbiztosítás (Bethesda……)

TERMINOLOGIA ( Hawaii, 1997 )

( BETHESDA 2001 )

U. Schenk, A. Herbert, D. Solomon, NS., A,,a. RJ Collins, SK Gupta, M. Jimenez-Ayala, J. Kobilkova, M. Nielsen, HZ. Suprun

ÉRTÉKELHETŐSÉG

Conventional Paps have less random sampling than liquidPaps, so a slightly higher estimate (8,000-12,000) is suggested

Set a minimum limit of 5,000 wellvisualized/preserved squamous cells for LBP

CONTROL:

Legalább 10 jól megítélhető strukturájú endocervikális vagy laphám metaplaziát mutató sejt kell ahhoz, hogy a transformációs zona jelenléte bizonyított legyen. Degenerált sejtek nyákban nem értékelendők.

REFERENCE IMAGES

SBLB: megfelelő, de értékelhetősége korlátozott azáltal, hogy: …….. DE: dysplaticus sejt vagy daganatsejt jelenlétében a kenet nem lehet ÉRTÉKELHETETLEN ( BETHESDA 2001 )

Preliminary studies show that reference images methods are quickly learned and have better interobserver reproducibility than the 10% cellularity criterion.

( BETHESDA 2001 )

FFK/MD-2001

Mdkft/FFK 2003

SQUAMOUS CELL

( BETHESDA 2001 )

1.Atypical squamous cells - of undetermined significance (ASC(ASC-US) - cannot exclude HSIL (ASC(ASC-H) 2. Low grade squamous intraepithelial lesion (LSIL) - HPV/mild dysplasia/CIN 1 3. High grade squamous intraepithelial lesion (HSIL) - moderate and severe dysplasia, CIN 2 and CIN 3/ CIS - with features suspicious for invasion (if invasion is suspected) suspected) 4. Squamous cell carcinoma It is anticipated that ASC-H will comprise 5%-10% or less of total ASC. Mdkft/FFK 2003

ASCUS/AGUS nem lehet több mint: 3 -5 %

ASCUS/AGUS : LSIL/HSIL/CC = 3 - 4 : 1

„Atypusos mirigyhámsejtek” megjelölés aránya egy szokványos cytologiai laboratoriumban 1 % alatt kell, hogy legyen” ( előfordulása az irodalomban 0,3 - 0,5 % )

? ?

?

?

?

ANATOMIA, KENETVÉTEL, FESTÉS

Recommend Documents