UJI EFEK EKSTRAK ETANOL HERBA TAPAK LIMAN (Elephantopus scaber L) TERHADAP PENURUNAN KADAR ASAM URAT DARAH PADA TIKUS PUTIH JANTAN YANG DIINDUKSI KAFEINA
Skripsi
Diajukan Sebagai Salah Satu Syarat Untuk Gelar Sarjana Farmasi (S.Far)
OLEH : ABDUL ARIEF AZTER NIM : 105102003313
PROGRAM STUDI FARMASI FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN UNIVERSITAS ISLAM NEGERI (UIN) SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA 1430 H/ 2009 M
LEMBAR PERSETUJUAN SKRIPSI
NAMA
: ABDUL ARIEF AZTER
NIM
: 105102003313
JUDUL
: UJI EFEK EKSTRAK ETANOL HERBA TAPAK LIMAN (Elephantopus scaber L) TERHADAP PENURUNAN KADAR ASAM URAT DARAH PADA TIKUS PUTIH JANTAN YANG DIINDUKSI KAFEINA
Disetujui oleh : Pembimbing I
Pembimbing II
Drs. M. Yanis Musdja, M.Sc, Apt. NIP : 1956010619851010001
Drs. Ahmad Musir, M.Sc, Apt. NIP : 130811664
Mengetahui, Ketua Program Studi Farmasi UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Drs. M. Yanis Musdja, M.Sc, Apt. NIP : 1956010619851010001
ii
Skripsi dengan judul UJI EFEK EKSTRAK ETANOL HERBA TAPAK LIMAN (Elephantopus scaber L) TERHADAP PENURUNAN KADAR ASAM URAT DARAH PADA TIKUS PUTIH JANTAN YANG DIINDUKSI KAFEINA Telah disusun dan dipertahankan dihadapan penguji oleh ABDUL ARIEF AZTER NIM : 105102003313 Pembimbing
Drs. M. Yanis Musdja, M.Sc, Apt. Pembimbing I
Drs. Ahmad Musir, M.Sc, Apt. Pembimbing II Penguji
Nurmeilis, M.Si, Apt. Penguji I
Farida Sulistiawati, M.Si, Apt. Penguji II
Yardi, M.Si, Apt. Penguji III
Mengetahui, Ketua Program Studi Farmasi UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Drs. M. Yanis Musdja, M.Sc, Apt.
Dekan Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Prof. DR. (hc). dr. M. K. Tadjudin, Sp.And. Tanggal lulus : 15 September 2009 iii
LEMBAR PERNYATAAN
DENGAN INI SAYA MENYATAKAN BAHWA SKRIPSI INI BENARBENAR HASIL KARYA SENDIRI YANG BELUM PERNAH DIAJUKAN SEBAGAI SKRIPSI ATAU KARYA ILMIAH PADA PERGURUAN TINGGI ATAU LEMBAGA LAIN.
JAKARTA, SEPTEMBER 2009
ABDUL ARIEF AZTER NIM : 105102003313
ABSTRAK
Judul : Uji Efek Ekstrak Etanol Herba Tapak Liman (Elephantopus scaber L) Terhadap Penurunan Kadar Asam Urat Darah Pada Tikus Putih Jantan Yang Diinduksi Kefeina
Herba tapak liman (Elephantopus scaber L) digunakan secara empiris untuk menurunkan kadar asam urat darah. Penelitian ini dilakukan untuk membuktikan bahwa ekstrak etanol herba tapak liman (Elephantopus scaber L) yang diberikan pada tikus putih jantan yang telah diinduksi kafeina dengan dosis 27 mg/200 g BB tikus dapat menurunkan asam urat darah pada tikus. Pemberian ekstrak etanol herba tapak liman (Elephantopus scaber L) diberikan dengan variasi dosis yaitu dosis rendah = 175 mg/200 g BB tikus, dosis sedang = 350 mg/200 g BB tikus dan dosis tinggi = 700 mg/200 g BB tikus serta alopurinol 36 mg/200 g BB tikus sebagai kontrol positif. Hasil kadar asam urat darah setelah hari ke-15 menunjukkan bahwa dosis 350 mg/200 g BB tikus yang memberikan presentase penurunan asam urat darah terbesar yaitu 43 %. Hasil analisa statistik hari ke-15 dengan uji ANOVA satu arah dan BNT menunjukkan semua kelompok ekstrak uji tidak ada perbedaan secara bermakna (p ≥ 0.05) dengan kelompok normal. Kata kunci : ekstrak etanol, tapak liman (Elephantopus scaber L), kafeina, asam urat.
i
ABSTRACT
Title : The Effect Ethanol Extract of Tapak Liman Herb (Elephantopus scaber L) Test to Decrease Levels of Uric Acid Blood in White Male Rat Induced by Caffeine
Tapak liman herb (Elephantopus scaber L) is used empirically to reduce the blood uric acid levels. This research was conducted to prove that the ethanol extract of tapak liman herb (Elephantopus scaber L) given to white male rat that had been induced by caffeine 27 mg/200 g dose of BB rats could lower blood uric acid in rats. Provision of ethanol extract of tapak liman herb (Elephantopus scaber L) were given with dose variations, they were low dose = 175 mg/200 g of BB rats, moderate dose = 350 mg/200 g of BB rats and high dose = 700 mg/200 g of BB rats and allopurinol 36 mg/200 g BB of rat as a positive control. The results of blood uric acid levels after the 15th day showed that the dose of 350 mg/200 g of BB rats that give a percentage decrease in blood uric acid which was the largest 43%. The results of statistical analysis of the 15th day with a one-way ANOVA test and the BNT showed all the extracts tested had no significant differences (p ≥ 0.05) with the normal group that.
Keywords : ethanol extract, tapak liman herb (Elephantopus scaber L), caffeine, uric acid.
ii
KATA PENGANTAR
Alhamdulillah, puji dan syukur kehadirat Allah SWT yang telah melimpahkan rahmat dan karunia-Nya serta shalawat dan salam selalu tercurah kepada junjungan kita Nabi Muhammad SAW karena dengan segala rahmat dan karunia-Nya penulis dapat menyelesaikan penelitian dan penulisan skripsi dengan judul “Uji Efek Ekstrak Etanol Herba Tapak Liman (Elephantopus scaber L) Terhadap Penurunan Kadar Asam Urat Darah Tikus Putih Jantan Yang Diinduksi Kefeina”. Penyusunan skripsi ini dapat selesai tidak terlepas dari bantuan berbagai pihak. Karena itu pada kesempatan kali ini kami dengan segala kerendahan hati mengucapkan terima kasih kepada yang terhormat: 1. Kedua orang tua saya yaitu Bapak Asterman dan Ibu Zulhasnatety serta adik-adik saya yaitu Nur’aini Suci Fauziah dan Ahmad Akbar Azter yang selalu memberikan dorongan moril, materil dan spiritual hingga selesainya skripsi ini. 2. Bapak Prof. Dr. Komarudin Hidayat, selaku Rektor Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta. 3. Bapak Prof. DR. (hc). dr. M. K. Tadjudin Sp.And. selaku Dekan Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan UIN Syarif Hidayatullah Jakarta. 4. Bapak Drs. M. Yanis Musdja M.Sc, Apt. dan Bapak Drs. Ahmad Musir M.Sc, Apt. yang memberikan mendampingi dan memberi dukungan hingga selesainya skripsi ini.
iii
5. Bapak dan Ibu dosen yang telah memberikan ilmu dan pengetahuan hingga penulis dapat menyelesaikan studi di jurusan Farmasi FKIK UIN Syarif Hidayatullah Jakarta. 6. Para staf akademika dan karyawan Program Studi Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan UIN Syarif Hidayatullah Jakarta. 7. Bapak Drs. Zamzami Kiram, M.M. yang telah membantu segala urusan penulis berkaitan dengan masalah administrasi baik dari tingkat program studi, fakultas maupun universitas. 8. Teman-teman program studi Farmasi UIN Syarif Hidayatullah Jakarta khususnya angkatan 2005 yang memberikan dukungan, sehingga saya bisa menyelesaikan skripsi saya ini. 9. Semua pihak yang telah membantu dari awal hingga akhir yang skripsi ini yang tidak dapat disebutkan satu persatu. Penulis menyadari bahwa dalam penulisan ini masih banyak terdapat kekurangan karena keterbatasan ilmu dan kemampuan penulis. Untuk itu saran dan kritik dari pembaca sangat penulis harapkan. Penulis berharap skripsi ini dapat berguna bagi semua pihak yang memerlukan. Akhir kata penulis mengucapkan semoga segala bantuan yang telah diberikan kepada penulis akan mendapat balasan, rahmat dan ridho dari Allah SWT, Amin.
Jakarta, September 2009
Penulis iv
DAFTAR ISI
Halaman ABSTRAK........................................................................................................... i ABSTRACT ....................................................................................................... ii KATA PENGANTAR ....................................................................................... iii DAFTAR ISI ...................................................................................................... v DAFTAR TABEL ............................................................................................ vii DAFTAR GAMBAR ....................................................................................... viii DAFTAR LAMPIRAN ..................................................................................... ix BAB I
PENDAHULUAN ............................................................................... 1 1.1 Latar Belakang ............................................................................ 1 1.2 Perumusan Masalah .................................................................... 3 1.3 Tujuan Penelitian ........................................................................ 3 1.4 Hipotesis ..................................................................................... 4 1.5 Manfaat Penelitian ...................................................................... 4 BAB II TINJAUAN PUSTAKA ...................................................................... 5 2.1 Tanaman Tapak Liman ............................................................... 5 2.1.1 Klasifikasi ...................................................................... 5 2.1.2 Sinonim ......................................................................... 5 2.1.3 Nama Daerah ................................................................. 5 2.1.4 Morfologi ....................................................................... 6 2.1.5 Budidaya ........................................................................ 6 2.1.6 Ekologi dan Penyebaran ................................................. 6 2.1.7 Bagian Tanaman Yang Digunakan ................................ 7 2.1.8 Kandungan Kimia .......................................................... 7 2.1.9 Penggunaan .................................................................... 7 2.1.10 Keanekaragaman ............................................................ 7 2.1.11 Simplisia ........................................................................ 7 2.2 Ekstrak, Simplisia dan Ekstraksi ................................................. 9 2.2.1 Pengertian ...................................................................... 9 2.2.2 Metode Ekstraksi ......................................................... 11 2.3 Asam Urat................................................................................. 13 2.3.1 Sifat Fisika dan Kimia Asam Urat ................................ 14 2.3.2 Metabolisme Asam Urat ............................................... 15 2.3.3 Patologis Asam Urat .................................................... 17 2.3.4 Obat Anti Hiperurisemia .............................................. 19 2.4 Kafeina ..................................................................................... 22 2.5 Na-CMC ................................................................................... 23 2.5.1 Sinonim ........................................................................ 24 2.5.2 Berat Molekul .............................................................. 24 2.5.3 Pemerian ...................................................................... 24 2.5.4 Kelarutan ..................................................................... 24 2.5.5 Stabilitas ...................................................................... 24 v
2.5.6 OTT ............................................................................. 24 2.5.7 Fungsi .......................................................................... 25 2.5.8 Aplikasi ....................................................................... 25 2.5.9 Konsentrasi .................................................................. 25 2.6 Metode Pemeriksaan Kadar Asam Urat Dalam Darah ............... 25 2.6.1 Metode Enzimatik Spektofotometer UV-Vis ................ 25 2.6.2 Tes Strip Asam Urat ..................................................... 26 2.7 Tinjauan Hewan Coba ............................................................... 26 BAB III KERANGKA KONSEP ................................................................... 28 BAB IV METODOLOGI PENELITIAN ...................................................... 29 4.1 Tempat dan Waktu Penelitian.................................................... 29 4.2 Hewan dan Bahan Uji ............................................................... 29 4.2.1 Hewan Uji .................................................................... 29 4.2.2 Bahan Uji ..................................................................... 29 4.2.3 Bahan Kimia ................................................................ 30 4.3 Alat-Alat ................................................................................... 30 4.4 Metode Penelitian ..................................................................... 30 4.4.1 Pembuatan Simplisia .................................................... 30 4.4.2 Ekstraksi ...................................................................... 30 4.4.3 Uji Penapisan Fitokimia ............................................... 31 4.4.4 Persiapan Hewan Uji .................................................... 33 4.4.5 Rancangan Percobaan .................................................. 33 4.4.6 Pembuatan Sediaan Uji dan Dosis ................................ 34 4.4.7 Penyiapan Larutan Uji .................................................. 35 4.4.7 Percobaan .................................................................... 35 4.4.8 Cara Pengambilan Darah .............................................. 36 4.4.9 Pengukuran Kadar Asam Urat Darah ............................ 36 4.4.10 Uji Statistik Terhadap Kadar Aasm Urat Darah ........... 36 BAB V HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN ................................ 37 5.1 Hasil Penelitian....................................................................... 37 5.1.1 Determinasi Tanaman .................................................. 37 5.1.2 Ekstraksi ...................................................................... 37 5.1.3 Penapisan Fitokimia ..................................................... 37 5.1.4 Hasil Pengukuran Kadar Asam Urat Darah................... 38 5.1.5 Uji Statistik Kadar Asam Urat Darah............................ 39 5.2 Pembahasan ............................................................................ 39 BAB VI KESIMPULAN DAN SARAN ......................................................... 44 6.1 Kesimpulan ............................................................................ 44 6.2 Saran ...................................................................................... 44 DAFTAR PUSTAKA ....................................................................................... 45 LAMPIRAN ..................................................................................................... 48
vi
DAFTAR TABEL
Halaman Tabel 1. Pembagian kelompok hewan uji ........................................................... 34 Tabel 2. Hasil pemeriksaan penapisan fitokimia serbuk herba tapak liman ......... 38 Tabel 3. Hasil pengukuran rata-rata kadar asam urat darah selama percobaan (mg/dl) ................................................................................................. 39 Tabel 4. Hasil persentase penurunan kadar asam urat darah rata-rata kelompok ekstrak uji dan kontrol pembanding ...................................... 42 Tabel 5. Hasil pengukuran kadar asam urat darah hewan uji selengkapnya selama percobaan (mg/dl) ..................................................................... 58
vii
DAFTAR GAMBAR
Halaman Gambar 1. Struktur asam urat ........................................................................... 13 Gambar 2. Metabolisme purin menjadi asam urat ............................................. 15 Gambar 3. Struktur alopurinol .......................................................................... 21 Gambar 4. Struktur kafeina .............................................................................. 22 Gambar 5. Struktur Na-CMC ........................................................................... 23 Gambar 6. Kurva kadar asam urat rata-rata hewan uji selama percobaan .......... 38 Gambar 7. Tanaman tapak liman (Elephantopus scaber L)............................... 51 Gambar 8. Tikus putih jantan galur Sprague-Dawley ....................................... 51 Gambar 9. Pemberian sediaan secara oral......................................................... 51 Gambar 10. Vacuum Rotary Evaporator ............................................................ 52 Gambar 11. Timbangan analitik ......................................................................... 52 Gambar 12. Timbangan tikus ............................................................................. 52 Gambar 13. Timbangan...................................................................................... 52 Gambar 14. Alat dan tes strip asam urat (Easytouch) .......................................... 52
viii
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman Lampiran 1. Hasil determinasi tanaman tapak liman (Elephantopus scaber L) ..................................................................................... 48 Lampiran 2. Surat keterangan galur hewan uji .................................................. 49 Lampiran 3. Bahan dan hewan uji .................................................................... 50 Lampiran 4. Alat- alat yang digunakan dalam penelitian .................................. 51 Lampiran 5. Skema proses ekstraksi ................................................................. 52 Lampiran 6. Skema uji efek penurunan kadar asam urat darah ......................... 53 Lampiran 7. Perhitungan rendemen dan dosis ekstrak kental herba tapak liman (Elephantopus scaber L) .......................................... 54 Lampiran 8. Pembuatan sediaan uji .................................................................. 55 Lampiran 9. Hasil pengukuran kadar asam urat darah hewan uji selama percobaan .................................................................................... 56 Lampiran 10. Uji normalitas (One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test) terhadap kadar asam urat darah kelompok hewan uji ................... 57 Lampiran 11. Uji homogenitas (Lavene) terhadap kadar asam urat darah kelompok hewan uji .................................................................... 58 Lampiran 12. Uji ANOVA satu arah dan Beda Nyata Terkecil (BNT) dengan LSD terhadap kadar asam urat darah kelompok hewan uji .................................................................................... 59
ix
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang Asam urat adalah produk akhir dari metabolisme perusakan senyawa purin, suatu nukleotida yang mempunyai banyak peran dalam berlangsungnya fungsi sel. Pada manusia, asam urat dieksresikan didalam urin, tetapi dalam mamalia lain, asam urat dioksidasi lebih lanjut menjadi alantoin dikatalisasi oleh enzim urikase (Murray et al, 2003). Kadar asam urat normal pada manusia sekitar 4 mg/dl. Kadar asam urat dalam darah dapat meningkat melebihi kadar normal (hiperurisemia), karena adanya peningkatan produksi asam urat atau penurunan eksresinya. Peningkatan kadar asam urat darah dapat menyebabkan penumpukan kristal asam urat yang terbentuk seperti jarum terutama di persendian. Akibatnya akan menimbulkan rasa sakit pada persendian tersebut. Keadaan ini dikenal sebagai penyakit gout atau artritis pirai (Kasper et al, 2004). Prevalensi penyakit gout di Indonesia sebesar 1,7 % untuk daerah pedesaan dan 4,8 % untuk daerah perkotaan. Pada tahun 1999, menurut penelitian, prevalensi gout dan hiperurisemia di USA adalah 41 per 1000, dan di UK prevalensi gout adalah 14 per 1000 (Bandolier team, 2005). Menurut data yang diperoleh dari Rumah Sakit Umum Nasional Cipto Mangun Kusumo Jakarta, penderita rematik gout dari tahun ke tahun semakin
1
2
meningkat dan ada kecenderungan diderita pada usia semakin muda, yaitu kelompok usia produktif (30 sampai 50 tahun). Oleh karena itu, jika penyakit ini tidak ditangani secara tidak tepat, maka gangguan yang ditimbulkan dapat menurunkan produktivitas kerja (Krisnatuti et al, 1997). Diperkirakan bahwa gangguan asam urat terjadi pada 840 dari setiap 100.000 orang, dan mewakili sekitar 5 % dari total penyakit radang sendi. Penyakit ini dapat dikelompokkan menjadi bentuk gout primer yang umum terjadi (90 % kasus). Penyebabnya tidak diketahui dengan jelas, tapi diperkirakan akibat kelainan proses metabolisme dalam tubuh. Umumnya dialami oleh laki-laki berusia lebih dari 30 tahun. Sedangkan gout sekunder (10 % kasus) dialami oleh umumnya wanita setelah menopause. Penyebabnya karena gangguan hormon (Redaksi VitaHealth, 2008). Oleh karena itu, dibutuhkan pengembangan dari bahan alam yang lebih murah dan memiliki potensi yang lebih baik yang berasal dari bahan alam yaitu obat tradisional mengingat sumber daya alam Indonesia yang beragam akan tanaman obat. Selain itu obat-obat yang berasal dari bahan alam terbukti secara empiris lebih akan digunakan dalam penggunaan jangka panjang dibanding dengan obatobat sintesis. Indonesia merupakan negara yang memiliki keanekaragaman hayati terbesar di dunia dengan lebih dari 30 ribu spesies tanaman berkhasiat mengobati melalui penelitian ilmiah. Hanya sekitar 180 spesies tersebut telah dimanfaatkan dalam tanaman obat tradisional oleh industri obat tradisional Indonesia (Herlina, 2005). Hal ini disebabkan pemanfaatan tumbuhan obat Indonesia untuk mengobati suatu penyakit biasanya hanya berdasarkan pengalaman empiris yang diwariskan secara
3
turun temurun tanpa disertai data penunjang yang memenuhi persyaratan. Salah satu tanaman obat yang secara tradisional digunakan untuk mengobati asam urat adalah tapak liman (Elephantopus scaber L) suku Asteraceae. Diduga tumbuhan ini berasal dari Amerika di daerah tropik. Tumbuhan ini telah lama dimasukkan ke pulau Jawa dan sekarang meluas di daerah rendah sampai ketinggian tempat kurang dari 1.200 m di atas permukaan laut. Tumbuhan merupakan gulma, pada tempat-tempat tertentu sering ditemukan dalam jumlah banyak terutama di lapangan rumput (Depkes RI, 1996; Depkes RI, 1989; Yuniarti, 2008). Secara umum menurut beberapa pustaka, dari hasil penelitian tapak liman mempunyai efek farnakologik untuk mengobati disentri, obat demam, malaria, kurang darah, batuk, sariawan, influenza, peradangan amandel, radang tenggorok, radang mata, diare, gigitan ular, Epidemic encephalitis B, sakit kuning, memperbaiki fungsi hati, busung air (ascites), radang ginjal yang akut dan kronik, bisul, eksema, radang rahim, keputihan, mempermudah kehamilan, pengobatan sesudah bersalin, pelembut kaki, peluruh dahak, peluruh haid, pembersih dahak, pengelat dan juga sebagai astringent, laktagoga. Serta memiliki kandungan kimia antara lain Flavonoid luteolin-7 glukosida, epipriedelinol, lupeol, stigmaserin, triacontan-1-ol,
dotria-contan-1-ol,
lupeol
acetat,
deoxyelephantopin,
isodeoxyelephantopin (Depkes RI, 1996; Depkes RI, 1989; Yuniarti, 2008). Penelitian
farmakologis
dengan
tahap
pengujian
secara
sistematik,
menggunakan metode uji asam urat yang tepat harus digunakan agar hasilnya dapat dipertanggungjawabkan secara ilmiah, bermanfaat bagi masyarakat dan dapat menjadi acuan untuk penelitian selanjutnya. Hal tersebut melatarbelakangi dilakukannya pengujian khasiat efek ekstrak etanol herba tapak liman
4
(Elephantopus scaber L) untuk menurunkan kadar asam urat darah hewan coba. Dalam hal ini hewan percobaan yang digunakan adalah tikus putih jantan galur Sprague-Dawley yang dibuat hiperurisemia yang diinduksi oleh kafeina sebagai metode uji asam urat praklinis yang mendekati keadaan penderita asam urat yang sebenarnya dan pemeriksaan kadar asam urat darahnya menggunakan metode tes strip asam urat. 1.2 Perumusan Masalah Apakah ekstrak etanol herba tapak liman (Elephantopus scaber L) memiliki kemampuan menurunkan kadar asam urat darah. 1.3 Tujuan Penelitian Untuk membuktikan khasiat ekstrak etanol herba tapak liman (Elephantopus scaber L) dalam menurunkan kadar asam urat darah tikus putih jantan galur Sprague-Dawley yang dibuat hiperurisemia dengan pemberian kafeina. 1.4 Hipotesis Ekstrak etanol herba tapak liman (Elephantopus scaber L) dapat menurunkan kadar asam urat darah tikus putih jantan galur Sprague-Dawley yang diinduksi dengan kafeina. 1.5 Manfaat Penelitian Hasil penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi dalam meningkatkan upaya kesehatan dengan mengembangkan obat tradisonal sehingga dapat dimanfaatkan dengan berdasarkan landasan ilmiah.
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Tanaman Tapak Liman (Elephantopus scaber L) 2.1.1 Klasifikasi Berdasarkan ilmu taksonomi, klasifikasi tanaman tapak liman adalah sebagai berikut (Depkes RI, 1989; Depkes RI, 1990; Yuniarti, 2008): Kingdom
: Plantae
Divisi
: Spermatophyta
Subdivisi
: Angiospermae
Kelas
: Dicotyledonale
Subkelas
: Asteridae
Bangsa
: Asterales
Familia
: Asteraceae
Genus
: Elephantopus
Jenis
: Elephantopus scaber L
2.1.2 Sinonim Asterocephalus chochinchinensis, Spreng. Scabiosa cochinchinensis, Lour (Depkes RI, 1989; Depkes RI, 1990; Yuniarti, 2008). 2.1.3 Nama Daerah Di Indonesia dikenal dengan berbagai nama lokal, Sumatera: Tutup bumi (Melayu), Jawa: Balagaduk, jukut, cangcang-cangcang, tapak liman (Sunda),
5
6
tapak liman, tapak tangan (Jawa), talpaktana (Madura). Indonesia: tapak liman (Depkes RI, 1989; Depkes RI, 1990; Yuniarti, 2008). 2.1.4 Morfologi Terna, tegak dengan rimpang yang menjalar, tinggi 10 cm sampai 80 cm, batang kaku, berbulu panjang dan rapat, bercabang. Daun berkumpul dibawah, membentuk roset, bentuk daun jorong, bundar telur sungsang, panjang 3 cm sampai 38 cm, lebar 1 cm sampai 6 cm, permukaan daun agak berbulu. Perbungaan berupa bonggol, banyak, bentuk bulat telur dan sangat tajam, daun pelindung kaku, daun pembalut dari tiap bunga kepala berbentuk jorong, lanset, sangat tajam dan berselaput, 4 daun pembalut dibagian luar panjang 5 mm, tidak berbulu, 4 daun pembalut dibagian dalam panjang 10 mm, berbulu rapat; panjang mahkota bunga 7 mm sampai 9 mm, berbentuk tabung, berwarna putih, ungu kemerahan, ungu pucat. Buah merupakan buah longkah, panjang 4 mm, berbulu; papus berbulu kasar 5, kadang-kadang melebar pada bagian pangkalnya, kaku berbulu, panjang 5 mm sampai 6 mm (Depkes RI, 1989; Depkes RI, 1990; Yuniarti, 2008). 2.1.5 Budidaya Di Indonesia tumbuhan ini belum dibudidayakan. Tumbuhan dapat diperbanyak dengan biji atau dari sobekan tanaman yang tumbuh dari akar (Depkes RI, 1989; Depkes RI, 1990; Yuniarti, 2008). 2.1.6 Ekologi dan Penyebaran Diduga tumbuhan ini berasal dari Amerika di daerah tropis. Tumbuhan ini telah lama dimasukkan ke pulau jawa dan sekarang meluas dari daerah rendah
7
sampai ketinggian tempat kurang dari 1.200 m di atas permukaan laut. Tumbuhan merupakan gulma, pada tempat-tempat tertentu sering ditemukan dalam jumlah banyak terutama di lapangan rumput (Depkes RI, 1989; Depkes RI, 1990; Yuniarti, 2008). 2.1.7 Bagian Tanaman Yang Digunakan Daun dan akar (Depkes RI, 1989; Depkes RI, 1990; Yuniarti, 2008). 2.1.8 Kandungan Kimia Flavonoid luteolin-7 glukosida, epipriedelinol, lupeol, stigmaserin, triacontan-1-ol,
dotria-contan-1-ol,
lupeol
acetat,
deoxyelephantopin,
isodeoxyelephantopin (Depkes RI, 1989; Depkes RI, 1990; Yuniarti, 2008). 2.1.9 Penggunaan Daun: Astringen, disentri, laktagoga, obat demam, malaria, batuk, sariawan mulut. Akar: Obat malaria, kurang darah, batuk, mencret, sariawan mulut (Depkes RI, 1989; Depkes RI, 1990; Yuniarti, 2008). 2.1.10 Keanekaragaman Keanekaragaman kecil (Depkes RI, 1989; Depkes RI, 1990; Yuniarti, 2008). 2.1.11 Simplisia A. Pemerian
: Tidak berbau; rasa, mula-mula tidak berasa, lama-lama
agak pahit (Depkes RI, 1989; Depkes RI, 1990; Yuniarti, 2008). B. Makroskopik : Daun tunggal, warna hijau tua sampai hijau kelabu, rapuh, bentuk jorong sampai bundar telur sungsang, ujung runcing, pangkal daun
8
mengecil, panjang daun 5 cm sampai 25 cm, umumnya 20 cm, lebar 2 cm sampai 7 cm, umumnya 5 cm. Tepi daun tidak berlekuk atau berlekuk tidak beraturan, bergerigi tidak rata, permukaan daun berambut. Pada permukaan bawah, tulang daun lebih menonjol dari pada permukaan atas. Tangkai daun, panjang kurang lebih 2 cm, berbentuk seperti pelepah, bagian pangkal membungkus batang (Depkes RI, 1989; Depkes RI, 1990; Yuniarti, 2008). C. Mikroskopik : Epidermis atas, jernih, pada penampang tangensial berbentuk persegi panjang sampai poligonal dengan dinding samping lurus atau tegak bergelombang. Sel epidermis bawah lebih kecil dari sel epidermis atas. Stomata tipe anomositik (Ranunculaceae) terdapat lebih banyak epidermis bawah dari pada di epidermis atas. Rambut penutup terdiri dari rambut penutup berdinding tebal dan rambut berdinding tipis; rambut penutup berdinding tebal mempunyai sel pangkal lebar dan 1 sel ujung yang panjang, bentuk kerucut ramping dengan ujung sel tebal, runcing, rongga sel kadang-kadang berwarna kuning kecoklatan; rambut penutup berdinding tipis terdiri dari 2 sel dengan pangkal lebih dari kecil dan lebih pendek dari sel ujung. Rambut penutup berdinding tebal pada epidermis atas umumnya lebih panjang dari pada yang terdapat pada epidermis bawah. Panjang rambut penutup 270 μm sampai 1.650 μm, umumnya 400 μm sampai 550 μm. Rambut kelenjar tipe Asteraceae (Compositae), terdapat pada epidermis atas dan bawah. Jaringan polisade terdiri dari 1 sampai 2 lapis sel silindrik. Jaringan bunga karang terdiri dari beberapa lapis sel bunga karang yang tersusun agak rapat. Di dalam
9
mesofil dan di dalam jaringan parenkim dari tulang daun terdapat hablur kalium oksalat berbentuk roset dan prisma. Berkas pembuluh tipe kolateral (Depkes RI, 1989; Depkes RI, 1990; Yuniarti, 2008). 2.2 Ekstrak, Simplisia dan Ekstraksi 2.2.1 Pengertian Ekstrak adalah sediaan kental yang diperoleh dengan mengekstraksi senyawa aktif dari simplisia nabati atau simplisia hewani menggunakan pelarut yang sesuai (Depkes RI, 2000). Simplisia adalah bahan yang digunakan untuk obat dan belum mengalami perubahan proses apapun, dan kecuali dinyatakan lain umumnya berupa bahan yang telah dikeringkan (Gunawan, 2004). Berdasarkan hal itu maka simplisia dibagi menjadi tiga golongan, yaitu simplisia nabati, hewani, dan pelikan / mineral (Gunawan, 2004). A. Simplisia nabati
: simplisia yang dapat berupa tanaman utuh
bagian tanaman, eksudat tanaman, atau gabungan antara ketiganya. B. Simplisia hewani
: simpisia berupa hewan utuh atau zat-zat
berguna yang dihasilkan oleh hewan dan belum berupa bahan kimia murni. C. Simplisia pelikan (mineral)
: simplisia berupa bahan pelikan atau
mineral yang belum diolah atau telah diolah dengan cara sederhana dan belum berupa bahan kimia murni Ekstrak dikelompokkan atas dasar sifatnya, yaitu (Voight, 2005) : A. Ekstrak encer : sediaan yang memiliki konsistensi semacam madu dan dapat dituang.
10
B. Ekstrak kental : sediaan yang liat dalam keadaan dingin dan tidak dapat dituang. Kandungan airnya berjumlah sampai 30 %. Tingginya kandungan air menyebabkan ketidakstabilan sediaan obat karena cemaran bakteri. C. Ekstrak kering : sediaan yang memiliki konsistensi kering dan mudah dituang, sebaiknya memiliki kandungan lembab tidak lebih dari 5%. D. Ekstrak cair
: ekstrak yang dibuat sedemikiannya sehingga 1 bagian
simplisia sesuai dengan 2 bagian ekstrak cair. Ragam ekstraksi yang tepat sudah tentu bergantung pada tekstur dan kandungan air bahan tumbuhan yang diekstraksi dan pada jenis senyawa yang diisolasi. Umumnya kita perlu membunuh jaringan tumbuhan untuk mencegah terjadinya oksidasi enzim atau hidrolisis (Harbone, 1996). Ekstraksi merupakan kegiatan penarikan kandungan kimia yang terdapat pada simplisia. Karena didalam simplisia mengandung senyawa aktif yang berbeda-beda dan mempunyai struktur kimia yang berbeda-beda, sehingga metode didalam penarikan senyawa aktif didalam simplisia harus memperhatikan faktor seperti : udara, suhu, cahaya, logam berat. Proses ekstraksi dapat melalui tahap menjadi : Pembuatan serbuk, pembasahan, penyarian, dan pemekatan (Depkes RI, 2000).
11
2.2.2 Metode Ekstraksi Macam-macam metode penyarian dalam ekstraksi yang dapat dilakukan diantaranya (Depkes RI, 2000) : A. Ekstraksi dengan menggunakan penyari 1. Cara dingin a. Maserasi Maserasi adalah proses pengekstrakkan simplisia dengan menggunakan pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur ruangan (kamar) secara teknologi termasuk ekstraksi dengan metode pencapaian konsentrasi pada keseimbangan. Maserasi kinetik berarti dilakukan pengadukan yang kontinu, sedangkan remaserasi berarti dilakukan pengulangan penambahan pelarut setelah dilakukan penyaringan maserat pertama dan seterusnya. b. Perkolasi Perkolasi adalah ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru sampai sempurna (exhaustive extraction) yang umumnya dilakukan pada temperatur ruangan. Prinsip perkolasi adalah dengan menempatkan serbuk simplisia pada suatu bejana silinder, yang bagian bawahnya diberi sekat berpori. Cairan penyari akan menarik zat aktif dalam sel-sel yang terdapat dalam simplisia. 2. Cara panas a. Refluks Refluks adalah ekstraksi dengan pelarut sampai pada temperatur titik didihnya selama waktu tertentu dan jumlah pelarut terbatas yang relatif
12
konstan
dengan
adanya
pendingin
balik.
Umumnya
dilakukan
pengulangan proses pada residu pertama sampai 3-5 kali sehingga dapat termasuk proses ekstraksi sempurna. b. Sokhletasi Sokhlet adalah ekstraksi menggunakan penyari yang berbeda. Umumnya dilakukan dengan alat khusus sehingga terjadi ekstraksi berlanjut sampai jumlah penyari relatif konstan dengan adanya pendingin balik. c. Digesti Digesti adalah maserasi kinetik (dengan pengadukan kontinyu) pada temperatur yang lebih tinggi dari temperature ruangan, secara umum dilakukan pada temperature 40o C-50o C. d. Infus Infus adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur penangas air mendidih, temperatur terukur 96oC - 98oC selama waktu tertentu (15-20 menit). Infus pada umumnya digunakan untuk menarik atau mengekstraksi zat aktif yang larut dalam air dari bahan-bahan nabati. Hasil dari ekstrak ini akan menghasilkan zat aktif yang tidak stabil dan mudah tercemar oleh kuman dan kapang, sehingga ekstrak yang diperoleh dengan infus tidak boleh disimpan lebih dari 24 jam. e. Dekok Dekok adalah infus yang waktunya lebih lama (lebih dari 30 menit) dan temperatur sampai titik didih air.
13
f. Destilasi uap Destilasi uap adalah ekstraksi kandungan senyawa mudah menguap (minyak atsiri) dari bahan (segar atau simplisisa) dengan uap air. Cara ini didasarkan peristiwa tekanan parsial senyawa kandungan menguap dengan fase uap air dari ketel secara berlanjut sampai sempurna dan diakhiri dengan kondensasi fase uap campuran menjadi destilat air bersama senyawa kandungan yang memisah sempurna sebagian. 3. Cara ekstraksi lainnya a. Ekstraksi ultrasonik Ekstraksi dengan menggunakan gelombang ultrasonik (lebih dari 20.000 Hz) memberikan efek pada proses ekstraksi dengan prinsip meningkatkan permeabilitas dinding sel, menimbulkan gelombang spontan serta menimbulkan fraksi interfase. b. Ekstraksi energi lisrik Energi listrik digunakan dalam bentuk medan listrik, medan magnet serta elektrik discharges yang dapat mempercepat proses ekstraksi dan meningkatkan hasil dengan prinsip menimbulkan gelombang spontan dan menyebarkan gelombang tekanan berkecepatan ultrasonik. 2.3 Asam Urat
Gambar 1. Struktur asam urat
14
2.3.1 Sifat Fisika dan Kimia Asam Urat Asam urat dikenal dengan nama kimia sebagai 2,6,8-trioksipurin merupakan asam lemah organik dengan berat molekul 169. Asam urat merupakan senyawa yang termasuk dalam golongan senyawa purin yang paling mudah dioksidasi. Oksidasi asam urat dalam bentuk larutan netral dan alkalis menghasilkan karbondioksida serta terbentuknya alantoin dan produksi degredasi lainnya pada suasana asam, asam urat teroksidasi menjadi aloksan (Kasper et al, 2004). Asam urat yang bersifat asam lemah disebabkan dari mudah terionisasinya atom hidrogen pada posisi 9 (pK1 = 5,71) dan posisi 3 (pK2 = 10) dari molekul tersebut. Hanya disosiasi proton pertama yang perlu dipertimbangkan, karena pK2 yang bernilai 10,3 berada diatas nilai pada cairan fisiologik yang memilki pH 14. Jadi hanya asam urat dan garam natrium urat yang terdapat dalam cairan tubuh. Garam natrium urat jauh lebih larut dalam air bila dibandingkan dengan asam urat. Namun kelarutan garam tersebut memiliki batas tertentu pada cairan plasma. Serum darah akan jenuh dengan garam natrium urat pada konsentrasi 6,4 mg/100 ml. Pada konsentrasi tersebut, larutan akan menjadi tidak stabil dan garam natrium urat akan mengendap dengan cepat membentuk kristal natrium urat yang tertimbun pada persendian (Kasper et al, 2004).
15
2.3.2 Metabolisme Asam Urat
Gambar 2. Metabolisme purin menjadi asam urat
16
Manusia mengubah nukleosida purin yang utama, adenosin dan guanosin menjadi asam urat yang dieksresikan keluar setelah mengalami beberapa kali reaksi. Adenosin pertama-tama mengalami deaminasi menjadi ionosin oleh enzim adenosin deaminase. Fosforisasi ikatan N-glikosidat, akan melepas senyawa ribosa-1-fosfat dan basa purin. Hipoxantin dan guanosin selanjutnya membentuk xantin dalam reaksi yang dikatalisasi masing-masing oleh enzim xantin oksidase dan guanase. Kemudian xantin teroksidasi menjadi asam urat dalam reaksi kedua yang dikatalisasi oleh enzim xantin oksidase. Dengan demikian, xantin oksidase merupakan lokasi yang esensial untuk intervensi farmakologis pada penderita hiperurisemia dan penyakit gout (Rodwell et al, 1998). Eksresi keseluruhan asam urat pada manusia yang normal berkisar ratarata 400-600 mg/24 jam. Duapertiga asam urat yang terbentuk dieliminasi melalui ginjal, sedangkan sepertiganya melalui saluran pencernaan. Banyak senyawa yang terdapat secara alami dan digunakan dalam farmakologi mempengaruhi absorpsi dan sekresi natrium urat pada ginjal. Sebagai contoh, pemberian aspirin dengan dosis tinggi secara kompetitif akan menghambat reabsorpsi asam urat sehingga berdampak pada peningkatan eksresi zat tersebut (Rodwell et al, 1998; Weatheral DJ et al, 1987). Pada mamalia yang tingkatannya lebih rendah, enzim urikase akan memecah asam urat dengan membentuk produk akhir alantoin yang bersifat sangat larut air. Namun demikan, karena manusia tidak mengandung enzim urikase, maka produk katabolisme senyawa purin pada manusia adalah asam urat. amfibi, burung, dan reptil juga tidak memiliki enzim urikase dan mengeksresikan asam urat serta guanin sebagai produk akhir katabolisme senyawa purin.
17
2.3.3 Patologis Asam Urat Pada manusia, asam urat merupakan produk buangan akhir dari degradasi senyawa purin. Zat tersebut tidak memiliki kegunaan fisiologis sehingga dapat dianggap bahan buangan. Karena ketidakberadaan enzim urikase pada manusia, maka terdapat kemungkinan adanya timbunan asam urat yang apabila melewati batas tertentu akan menimbulkan gangguan patologis. Pada kondisi normal kadar asam urat pada laki-laki 3,4-7,0 mg/dl sedangkan pada perempuan antara 2,4-5,7 mg/dl. Jika kelebihan produksi ataupun penurunan eksresi asam urat dalam tubuh akan meningkat yang disebut hiperurisemia. Keadaan hiperurisemia tersebut dapat menimbulkan penyakit gout sebagai akibat adanya penimbunan kristal natrium urat pada persendian yang disertai rasa nyeri (Howkin et al, 1997). A. Hiperurisemia Hiperurisemia adalah suatu keadaan dimana kadar asam urat dalam darah meningkat dan mengalami kejenuhan. Berdasarkan definisi tersebut konsentrasi asam urat yang melebihi dari 7,0 mg/dl sudah dianggap hiperurisemia dan beresiko terkena gout (Howkin et al, 1997). Hiperurisemia juga dapat dibedakan berdasarkan kenyataan apakah pasien mengeksresikan asam urat dengan jumlah total atau berlebihan (lebih dari 600 mg/24 jam). Hiperurisemia dapat disebabkan oleh adanya kelainan ginjal yang menyebabkan kenaikan asam urat serum. Selain itu peningkatan produksi asam urat akibat suatu penyakit seperti kanker dan adanya kelainan enzim yang berperan dalam metabolisme senyawa purin.
18
Beberapa sistem enzim berperan dalam pengaturan metabolisme senyawa purin. Ketidaknormalan pada sistem tersebut dapat meningkatkan kenaikan produksi asam urat. Terdapat dua enzim yang berperan dalam pengaturan
metabolisme
asam
urat
yang
berhubungan
dengan
hiperurisemia. Yang pertama yaitu peningkatan aktifitas enzim fosforibosil pirofosfat (PRPP). Fosforibosil pirofosfat (PRPP) adalah salah satu zat kunci dalam pembentukan nukleotida purin dan juga pembentukan asam urat. Semakin tingginya konsentrasi fosforibosil pirofosfat (PRPP) yang terbentuk maka asam urat yang diproduksi semakin meningkat. Yang kedua yaitu defisiensi dari hipoxantin guanin fosforibosi transferasi (HGRPT).
Hipoxantin
guanin
fosforibosi
transferasi
(HGRPT)
bertanggung jawab dalam pengubahan guanin menjadi guanosin monofosfat (GMP) dan hipoxantin menjadi inosin monofosfat (IMP). Pengubahan tersebut memerlukan PRPP sebagai kosubstrat. Defisiensi enzim HGRPT dapat meningkatkan metabolisme guanin dan hipoxantin menjadi asam urat dan juga lebih banyak PRPP yang berinteraksi dengan glutamin pada langkah pertama metabolisme senyawa purin (Howkin et al. 1997). B. Gout Kata gout berasal dari bahasa latin “Gutta” yang berarti “tetes”. Kata tersebut mulai digunakan sekitar tahun 1270 dan dipercaya bahwa gout disebabkan oleh tetesan cairan yang beracun “noxa” pada persendian (Weatheral DJ et al, 1987, Garreth et al, 1995). Penyakit gout merupakan suatu proses inflamasi yang terjadi karena penumpukan kristal asam urat
19
pada sekitar jaringan sendi akibat kadar asam urat serum yang melebihi kelarutannya. Kristalisasi natrium urat dalam jaringan lunak dan persendian akan membentuk endapan yang dinamakan tofus. Proses ini menyebabkan suatu reaksi inflamasi akut, yaitu artritis akut gout, yang dapat berlanjut menjadi artritis kronis gout. Pemeriksaan dengan mikroskop cahaya terpolarisasi memperlihatkan kristal natrium urat yang terbentuk jarum dan bersifat berefringen negatif (tampak berwarna kuning jika sumbu memanjangnya sejajar dengan bidang cahaya terpolarisasi) dalam cairan sendi merupakan tanda diagnostik penyakit gout. Keadaan klinis yang khas dengan artritis gout adalah serangan yang mendadak dari sendi, terutama pada sendi metatarsophalangeal jari pertama (ibu jari). Serangan pertama kali sangat sakit dan sering dimulai pada tengah malam. Sendi tersebut cepat membengkak, panas, pembesaran vena-vena
superfisial.
Meskipun
serangan
pertama
terjadi
pada
metatarsophalangeal ibu jari, tetapi sendi-sendi perifer yang besar seperti lutut, tumit, pergelangan kaki dan tangan, sering juga terkena. 2.3.4 Obat-Obat Anti Hiperurisemia (Ganiswarna, 1995; Tjay et al, 2002) A. Obat urikosurik Obat-obat urikosurik meningkatkan klirens ginjal dari asam urat dengan menghambat reabsorpsi tubular asam urat, memperbesar eksresi dan mengurangi konsentrasi asam urat di serum. Terapi dengan obat-obat urikosurik sebaiknya dimulai dengan dosis rendah untuk menghindari efek urikosuria dan terbentuknya endapan asam urat. Aliran urin yang teratur dan cukup serta pembasaan urin dengan natrium bikarbonat pada beberapa
20
hari pertama terapi dengan obat urikosurik dapat menghilangkan kemungkinan adanya kristalisasi asam urat. Efek samping yang sering terjadi pada pengobatan dengan terapi urikosurik adalah iritasi saluran pencernaan, ruam kulit, hipersensitivitas, dan kristalisasi asam urat di urin. Obat-obat urikosurik memiliki kontraindikasi terhadap pasien yang alergi pada masing-masing obat
dan pada penderita yang
mengalami
ketidaknormalan fungsi ginjal. Obat-obat urikosurik diantaranya adalah 1. Probenesid Obat ini biasanya diberikan pada dosis 250 mg dua kali sehari selama 1-2 minggu kemudian dilanjutkan 500 mg selama 2 minggu. Setelah itu dosis dilanjutkan 500 mg setiap 1-2 minggu hingga keadaan menjadi normal atau sampai dosis maksimum 3 g. 2. Sufinpirazon Suatu urikosurik yang poten yang memiliki efek paradoksal antara eksresi asam urat untuk menurunkan asam urat dalam plasma dengan hemodilusi. Diberikan dengan dosis mulai dari 50 mg dua kali sehari dan meningkat secara bertahap setiap 10 hari sekali hingga mencapai dosis pemeliharaan sebesar 100 mg 3-4 kali sehari. 3. Salisilat Obat ini memiliki efek paradoksikal dari dosis tinggi dan dosis rendah. Dosis kecil ( 1 g atau 2 g sehari) meghambat eksresi asam urat, sehingga kadar asam urat dalam darah meningkat. Dosis 2 atau 3 g sehari biasanya tidak mengubah eksresi asam urat. Tetapi pada dosis lebih dari 5 g perhari terjadi peningkatan eksresi asam urat melalui urin, sehingga kadar asam
21
urat dalam darah menurun. Hal ini terjadi karena pada dosis rendah salisilat menghambat sekresi tubuli sedangkan pada dosis tinggi salisilat juga menghambat reabsorpsinya dengan hasil akhir peningkatan eksresi asam urat. Efek urikosurik ini bertambah bila urin bersifat basa. Dengan alkalinasi urin, kelarutan asam urat dalam urin meningkat sehingga tidak terbentuk kristal asam urat dalam tubuli ginjal. B. Penghambatan sintesis asam urat (Alopurinol)
Gambar 3. Struktur alopurinol Alopurinol adalah obat yang diakui poten sebagai penghambat sintesis asam urat. Baik alopurinol maupun metabolit terbesarnya yaitu oksipurinol, keduanya bekerja sebagai penghambat enzim xantin oksidase. Xantin oksidase merupakan enzim yang berperan dalam pengubahan hipoxantin menjadi xantin dan xantin menjadi asam urat. Alopurinol juga menurunkan konsentrasi intraseluler dari PRPP. Alopurinol mengalami biotransformasi oleh enzim xantin oksidase menjadi aloxantin yang masa paruhnya lebih panjang daripada alopurinol. Karena itu alopurinol cukup diberikan satu kali sehari. Untuk mencegah timbulnya gout akut, alopurinol dianjurkan diberikan tiap hari sekali sebesar 100 mg peroral. Dosis untuk penyakit gout ringan 200-400 mg sehari, 400-600 mg sehari untuk penyakit yang lebih berat. Untuk penderita gangguan fungsi ginjal
22
dosis cukup 100-200 mg sehari. Dosis untuk hiperurisemia sekunder 100200 mg sehari. Efek samping yang sering terjadi adalah reaksi kulit. Bila timbul kemerahan kulit, obat harus dihentikan karena gangguan mungkin menjadi lebih berat. Reaksi alergi berupa demam, menggigil, dan pruritas juga pernah dilaporkan. Gangguan saluran cerna juga kadang-kadang terjadi. 2.4 Kafeina (Wade A, 1982; Ganiswarna, 1995)
Gambar 4. Struktur kafeina Kafeina adalah komponen alkaloid derivat xantin yang mengandung gugus metil yang akan di oksidasi oleh xantin oksidase membentuk asam urat sehingga dapat meningkatkan kadar asam urat dalam tubuh. Maka, dalam penelitian ini digunakan sebagai penginduksi asam urat yang poten yang dapat menyebabkan hewan coba menjadi hiperurisemia. (Azizahwati et al, 2005) Kafeina ialah alkaloid yang tergolong dalam keluarga methylxantine bersamasama senyawa teofilin dan teobromin. Pada keadaan asal, kafeina ialah serbuk putih yang pahit. Rumus kimianya ialah C6H10N4O2 dan nama sistematik kafeina ialah 1,3,7-trimetilxantine. Metilxantin cepat diabsorbsi setelah pemberian oral, parenteral, atau rektal. Sedian bentuk cair atau tablet tidak bersalut akan diabsorpsi secara cepat dan
23
lengkap. Kadar puncak plasma dapat dihasilkan dalam waktu 1 jam, sedangkan eleminasi metilxantin terutama melalui metabolisme hati sebagian besar dieksresikan bersama urin dalam bentuk asam urat. Kurang dari 15 % kafeinaa akan ditemukan di urin dalam bentuk utuh, waktu paruh plasma kafeina antara 3-7 jam.
Dosis letal pada orang dewasa 5-10 g. Terlalu banyak kafeina dapat menyebabkan intoksikasi kafeina (yaitu mabuk akibat kafeina). Antara gejala penyakit ini ialah keresahan, kerisauan, insomnia, keriangan, muka merah, kerap kencing (diuresis), dan masalah gastrointestinal. Gejala-gejala ini bisa terjadi walaupun hanya 250 mg kafeina yang diambil. Jika lebih 1 g (15 mg/kg BB) yang menyebabkan kadar plasma diatas 30 µg/ml. gejala seperti kejangan otot (muscle twitching), kekusutan pikiran dan perkataan, aritmia kardium (gangguan pada denyutan jantung) dan bergejolaknya psikomotor (psychomotor agitation) bisa terjadi. Intoksikasi kafeina juga bisa mengakibatkan kepanikan dan penyakit kerisauan.
2.5 Na-CMC (Wade A et al, 1994)
Gambar 5. Struktur Na-CMC
24
2.5.1 Sinonim
Carboxymethylcellulosum natricum, carboxymethyl
sodium, cellulose
gum USP XXII mendeskripsikan CMC Na sebagai garam natrum sodium dari policarboxy methyl ether dari selulosa.
2.5.2 Berat Molekul
90.0
– 700.000.
2.5.3 Pemerian
Warna putih, tidak berbau, serbuk bergranul.
2.5.4 Kelarutan
Praktis tidak larut dalam aseton, etanol, eter dan toluen, mudah terdispersi dalam air pada seluruh temperatur membentuk larutan koloid yang bening.
2.5.5 Stabilitas
CMC Na stabil, materi higroskopik, pada kondisi lembab CMC Na dapat menyerap air dalam kuantitas yang besar (>50%) pada tablet hal ini diasosiasikan dengan penurunan kekerasan tablet dan meningkatkan waktu desintegran.
2.5.6 OTT
Larutan asam, garam besi terlarut, beberapa logam alumunium, merkuri, seng, xanthan gum.
25
2.5.7 Fungsi
Agen penyalut, desintegran (penghancur) tablet dan kapsul, pengikat tablet, stabilizing agent, suspending agent, agen pengikat viskositas.
2.5.8 Aplikasi
CMC Na biasa digunakan pada formula oral dan topikal, CMC Na digunakan sebagai pengikat tablet dan desintegran, konsentrasi yang lebih tinggi biasanya 4 – 6%, nilai viskositas medium digunakan untuk menghasilkan gel yang dapat digunakan sebagai bahan dasar untuk pasta.
2.5.9 Konsentrasi
Sebagai suspending agent 0.25 %-1.0%, agen pembetuk gel 4.0%-6.0%, Pengikat tablet 1.0%-6.0%, dan untuk larutan oral 0.1%-10%.
2.6 Metode Pemeriksaan Kadar Asam Urat Darah
2.6.1 Metode Enzimatik Spektrofotometer UV-Vis
Metode ini menggunakan enzim-enzim yang bekerja secara spesifik pada asam urat, sehingga memberikan hasil yang relatif lebih tepat dibandingkan metode lainnya. Prinsip reaksinya adalah mengoksidasi asam urat menjadi alantoin, hidrogen peroksida dan karbon dioksida yang dikatalisis oleh enzim urikase. Hidrogen peroksida yang terbentuk bereaksi dengan 3,5 dikloro 2hidroksibenzen sulfonat (DCHBS) dan 4 aminophenazon (PAP) membentuk zat warna quinonimin yaitu N-(4-antipirin)-3 kloro-5-sulfonat-p-benzokuinonimuin
26
yang diukur pada panjang gelombang 520 nm dengan menggunakan spektrofotometer UV-Vis. (Yuno, 2003)
2.6.2 Tes Strip Asam Urat Pengukuran kadar asam urat darah tikus putih dilakukan dengan alat tes strip asam urat. Alat ini merupakan alat yang digunakan untuk memonitor tingkat asam urat di dalam darah. Tes ini merupakan spesifik untuk asam urat. Tes tersebut menggunakan oksidasi asam urat dan berdasarkan pada kemajuan teknologi biologi sensor 2.7 Tinjauan Hewan Coba Klasifikasi hewan coba yang digunakan dalam penelitian ini adalah (Sharp et al, 1998): Regnum
: Animalia
Filum
: Chordata
Kelas
: Mammalia
Bangsa
: Rodentia
Keluarga
: Muridae
Anak keluarga
: Murinae
Marga
: Rattus
Jenis
: Rattus norvegicus L
Rattus norvegicus adalah salah satu spesies tikus yang paling sering digunakan dalam penelitian karena memiliki beberapa kelebihan antara lain : mudah
27
dipelihara dalam populasi yang besar, dapat berkembang biak dengan pesat, dan memiliki ukuran yang lebih besar dari mencit sehingga untuk beberapa percobaan tikus lebih menguntungkan. Tikus juga memperlihatkan masa hamil yang singkat (21-23 hari), jumlah anak yang cukup banyak (6-12 ekor), dan dapat hidup sampai 4 tahun (Malole, Pramono. 1989). Seekor tikus dewasa membutuhkan 15 g makanan dan 20-45 ml air per 100 g berat badan per hari. Suhu kandang yang dibutuhkan tikus 18-27 °C dan kelembaban relatif 40-70 % (Malole, Pramono. 1989). Terdapat berbagai galur tikus putih antara lain : Long-Evans, SpragueDawley, dan Wistar. Tikus putih (Rattus novergicus L) galur Wistar mempunyai ciri-ciri : warna tubuh putih, mata berwarna merah (albino), ukuran kepala dan ekor lebih pendek dari badannya; galur Sprague-Dawley mempunyai ciri-ciri : warna tubuh putih, mata berwarna merah (albino), ukuran kepala yang kecil, dan ekor lebih panjang dari badannya; sedangkan galur Long-Evans ditandai dengan warna hitam dibagian kepala, dan tubuh bagian depan.
BAB III
KERANGKA KONSEP
Pemakaian empiris herba tapak liman (Elephantopus scaber L) sebagai obat penurun asam urat darah di masyarakat
Dilakukan penelitian untuk mengetahui potensi herba tapak liman (Elephantopus scaber L) sebagai obat penurun asam urat darah
Simplisia herba tapak liman (Elephantopus scaber L)
Ekstraksi
Ekstrak kental herba tapak liman (Elephantopus scaber L)
Uji efek penurunan kadar asam urat darah
Analisa data (ANOVA satu arah)
28
BAB IV
METODOLOGI PENELITIAN
4.1 Tempat dan Waktu Penelitian Penelitian dilakukan di laboratorium Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta dan berlangsung dari bulan April 2009 sampai dengan Juni 2009. 4.2 Hewan dan Bahan Uji 4.2.1 Hewan Uji Hewan uji yang digunakan dalam penelitian ini adalah uji yang digunakan dalam penelitian ini adalah tikus putih jantan galur Sprague-Dawley berumur 3-4 bulan dengan berat badan 150-250 g yang diperoleh dari Fakultas Kedokteran Hewan IPB. Pakan berupa butiran (pellet) diberikan sebanyak ± 10 g/ekor/hari dan diberikan minum secukupnya. 4.2.2 Bahan Uji Bahan uji yang digunakan adalah ekstrak etanol 70 % herba tapak liman (Elephantopus scaber L) dan alopurinol sebagai obat pembanding. 4.2.3 Bahan Kimia Bahan-bahan yang dipergunakan dalam penelitian ini adalah etanol 70%, Kafeina, Eter ( Merck ), Na-CMC (Brataco), NaCl (Merck), ammoniak (Merck),
29
30
kloroform (Merck), HCl (Merck), pereaksi Dragendroff, pereaksi Mayer, nButanol (Merck), H2SO4 (Merck), FeCl3, NaOH (Merck), aquades, tes strip asam urat (Easy Touch) 4.3 Alat-Alat Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah sebagai berikut : timbangan hewan (Ohauss), kandang tikus beserta tempat makanan dan minum, sonde oral, jarum suntik, hotplate (Wiggen Hauser), blender, magnetic stirrer, destiller, oven, timbangan analitik (Wiggen Hauser), holder, vacuum rotary evaporator (Memmert Eyele), kertas saring, kapas, kamera, alat tes strip asam urat (EasyTouch), timbangan hewan (Mettler Toledo), timbangan analitik (Mettler Toledo), dan alat-alat gelas (Iwaki pyrex). 4.4 Metode Penelitian 4.4.1 Pembuatan simplisia Pembuatan simplisia yang baik dan memenuhi syarat terdiri dari tahaptahap sebagai berikut : sortasi basah, pencucian, perajangan, pengeringan, sortasi kering, penggilingan dan pengayakan. 4.4.2 Ekstraksi Simplisia serbuk herba tapak liman (Elephantopus scaber L) diekstraksi dengan metode maserasi secara berulang-ulang dengan menggunakan pelarut etanol 70 % dan dilakukan pengocokan sesekali. Proses tersebut dilakukan selama 2-3 minggu dimana sekali dalam dua hari pelarut diganti dan disaring sehingga didapat ekstrak cair, lalu ekstrak cair tersebut dievaporasi dengan vacuum rotary
31
evaporator sehingga didapat ekstrak kental kemudian ekstrak tersebut diuji aktivitas penurunan kadar asam urat darahnya (Lampiran 6). 4.4.3 Uji Penapisan Fitokimia (Farnsworth, 1969) A. Identifikasi golongan alkaloid Sebanyak + 5 g serbuk dilembabkan dengan 5 ml ammoniak 25 % digerus dalam mortir, kemudian ditambahkan 20 ml kloroform dan digerus kembali dengan kuat, campuran tersebut disaring dengan kertas saring, filtrat berupa larutan organik diambil (sebagai larutan A), sebagai larutan A (10 ml) diekstraksi dengan 10 ml larutan HCl 1:10 dengan pengocokan dalam tabung reaksi, diambil larutan bagian atasnya (larutan B). Larutan A diteteskan beberapa tetes pada kertas saring dan disemprot atau ditetesi dengan pereaksi Dragendroff, terbentuk warna merah atau jingga pada kertas saring menunjukkan adanya senyawa alkaloid. Larutan B dibagi dalam 2 tabung reaksi, ditambahkan masing-masing pereaksi Dragendroff dan pereaksi Mayer, terbentuk endapan merah bata dengan pereaksi Dragendroff atau endapan putih dengan pereaksi Mayer menunjukkan adanya senyawa alkaloid. B. Identifikasi golongan flavonoid Sebanyak + 10 g serbuk ditambah 100 ml air panas, didihkan selama 5 menit, saring. Ambil 5 ml filtratnya (dalam tabung reaksi), ditambahkan serbuk Mg secukupnya dan 1 ml asam klorida pekat dan 2 ml amil alkohol, kocok kuat dan biarkan memisah. Terbentuknya warna merah, kuning, atau jingga pada lapisan amil alkohol menunjukkan adanya flavonoid.
32
C. Identifikasi golongan saponin Serbuk dimasukkan ke dalam tabung reaksi, ditambah 10 ml air panas. Setelah dingin kocok kuat secara vertikal selama 10 detik. Terbentuknya busa yang stabil, menunjukkan adanya saponin, bila ditambahkan 1 tetes HCl 1% busa tetap stabil. D. Identifikasi golongan steroid dan triterpenoid Sebanyak + 5 g serbuk dimaserasi dalam 20 ml eter selama 2 jam kemudian disaring. Diuapkan dalam cawan penguap sampai kering. Ditambahkan 2 tetes asam asetat anhidrat dan 1 tetes asam sulfat pekat ke dalam residu. Terbentuknya warna hijau atau merah menunjukkan adanya steroid/triterpenoid. E. Identifikasi golongan tanin Sebanyak + 10 g serbuk ditambah 10 ml air, didihkan selama 15 menit, setelah dingin kemudian di saring dengan kertas saring. Filtrat ditambah 12 tetes FeCl3 1 %, terbentuknya warna biru, hijau atau hitam menunjukkan adanya seyawa golongan tanin. F.
Identifikasi golongan kuinon Sebanyak + 1 g serbuk dipanaskan dalam air selama 5 menit, disaring. Sebanyak 5 ml filtrat ditambah 5 ml NaOH 1 N, terbentuk warna merah menunjukkan adanya kuinon.
G. Identifikasi golongan minyak atsiri Sebanyak + 2 g serbuk dimasukkan ke dalam tabung reaksi (volume 20 ml), tambahkan 10 ml pelarut petroleum eter. Pada mulut tabung dipasang corong yang diberi lapisan kapas yang telah dibasahi dengan air, kemudian
33
disaring dengan kertas saring. Filtrat yang diperoleh diuapkan pada cawan penguap, selanjutnya residu dilarutkan dengan pelarut etanol 95 % sebanyak 5 ml lalu saring dengan kertas saring. Filtratnya diuapkan dengan cawan penguap, residu yang berbau aromatik menunjukkan adanya senyawa golongan minyak atsiri. 4.4.4 Persiapan Hewan Uji Hewan coba yang digunakan adalah tikus putih jantan galur SpragueDawley, berumur 3-4 bulan dengan berat badan 180-250 g diaklimatisasi selama dua minggu agar dapat menyesuaikan dengan lingkungannya. Selama proses adaptasi, dilakukan pengamatan kondisi umum dan penimbangan berat badan. 4.4.5 Rancangan Percobaan Hewan coba yang digunakan adalah tikus putih jantan galur SpragueDawley berumur 3-4 bulan dengan berat badan 150-250 gram diaklimatisasi selama dua minggu agar dapat menyesuaikan dengan lingkungannya. Selama proses adaptasi dilakukan pengamatan kondisi umum dan penimbangan berat badan. Hewan uji dipilih sebanyak 24 ekor tikus putih jantan secara acak untuk dibagi menjadi 6 kelompok, masing-masing terdiri dari 4 ekor (Tabel 1). Penentuan jumlah tikus tiap kelompok, dihitung berdasarkan rumus Federer : (n1) (t-1) ≥15, dimana t menunjukkan jumlah perlakuan dan n menunjukkan jumlah ulangan minimal dari tiap perlakuan (Sudjana, 1992).
34
Tabel 1. Pembagian kelompok hewan uji Kelompok Jumlah Tikus I 4
Perlakuan
II
4
III
4
IV
4
V
4
VI
4
Kontrol perlakukan, diberi kafeina 27 mg/200 g BB dalam larutan Na-CMC 0,5 % Diberi kafeina 27 mg/200 g BB dalam larutan NaCMC 0,5 % dan alopurinol 36 mg/200 g BB dalam larutan Na-CMC 0,5 % (Pembanding) Diberi kafeina 27 mg/200 g BB dalam larutan NaCMC 0,5 % dan bahan uji dosis rendah Diberi kafeina 27 mg/200 g BB dalam larutan NaCMC 0,5 % dan bahan uji dosis sedang Diberi kafeina 27 mg/200 g BB dalam larutan NaCMC 0,5 % dan bahan uji dosis tinggi
Kontrol normal, diberi air larutan Na-CMC 0,5 %
Berarti dengan jumlah kelompok percobaan sebanyak 6 kelompok maka tikus yang terdapat pada tiap kelompok yaitu > 4, sedangkan pada penelitian kali ini saya menggunakan tikus pada tiap kelompok yaitu 4 tikus, berikut perhitungannya : (n-1).(t-1) = (6-1).(4-1) = 15, jadi hasil ini sudah dapat diterima, karena berdasarkan rumus Federer jumlah yang dihasilkan > 15. 4.4.6 Pembuatan Sediaan Uji dan Dosis. A. Dosis ekstrak kental herba tapak liman Dosis Rendah = 175 mg/200 g BB Dosis Sedang = 350 mg/200 g BB Dosis Tinggi = 700 mg/200 g BB (Lampiran 8) Volume larutan ektsrak uji yang diberikan kepada setiap kelompok uji dibuat dalam konsentrasi 350 mg/ ml (Lampiran 9).
35
B. Dosis alopurinol sebagai kontrol pembanding Dosis alopurinol yang digunakan adalah 200 mg/hari untuk manusia. Faktor konversi dari manusia ke tikus adalah 0,018 (Paget & Barnes, 1964) dan faktor farmakokinetika yang digunakan adalah 10 (Mandel et al,1979). Dosis untuk tikus = 200 mg x 0,018 x 10 = 36 mg/200 g BB. C. Dosis Kafeina Dosis Kafeina yang digunakan adalah 150 mg/hari untuk manusia. Faktor konversi dari manusia ke tikus adalah 0,018 (Paget & Barnes, 1964) dan faktor farmakokinetika yang digunakan adalah 10 (Mandel et al,1979). Dosis untuk tikus = 150 mg x 0,018 x 10 = 27 mg/200 g BB. 4.4.7 Penyiapan larutan uji A. Pembuatan sediaan ekstrak kental herba tapak liman (Lampiran 9). B. Pembuatan suspensi alopurinol (Lampiran 9). C. Pembuatan suspensi kafeina (Lampiran 9). 4.4.8 Percobaan Pada uji ini dilakukan upaya peningkatan kadar asam urat darah dengan menginduksi tikus dengan kafeina 27 mg/200 g BB. Setelah penginduksian tersebut, kadar asam urat darah tikus dikontrol dan diukur pada hari ke-6 untuk meyakinkan bahwa kafeina dengan dosis tersebut menyebabkan hiperurisemia. Pada hari ke-7 dilakukan pemberian perlakuan berdasarkan kelompoknya masing-masing setiap hari dan kafeina tetap diberikan juga pada semua kelompok kecuali kelompok normal. Pengukuran kadar asam urat darah selanjutnya pada hari ke-9, ke-12 dan ke-15 (Azizahwati et al, 2005) (Lampiran 7).
36
4.4.9 Cara Pengambilan Darah Darah diambil melalui ekor dengan metode memotong ekor dengan gunting. Darah yang keluar pada ekor tikus yang telah digunting diteteskan pada tes strip asam urat dan menunggu selama dua puluh detik maka kadar asam urat darah telah terukur. Untuk menghentikan darah ekor tikus yang telah digunting diberi alkohol 70 % dan sedikit ditekan. 4.4.10 Pengukuran Kadar Asam Urat Darah Pengukuran kadar asam urat dalam darah dilakukan dengan menggunakan alat tes strip asam urat. 4.4.11 Uji Statistik Terhadap Kadar Asam Urat Darah Data yang diperoleh diolah secara statistik menggunakan SPSS. Dimana kadar asam urat darah awal untuk kelompok uji diuji homogenitasnya (Levene) dan uji kenormalannya (One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test). Bila kedua uji ini dipenuhi maka selanjutnya dilakukan uji ANOVA satu arah untuk melihat ada atau tidaknya perbedaan bermakna antara kelompok perlakuan dan bila terdapat perbedaan bermakna, maka untuk mengetahui perbedaan antar kelompok perlakuan dilanjutkan uji Beda Nyata Terkecil (BNT) dengan metode LSD. Tetapi bila ada salah satu atau kedua uji tersebut tidak dipenuhi maka analisis dilakukan dengan uji Kruskall Wallis (Santoso, 2008; Dahlan, 2004; Sudjana, 1992).
BAB V
HASIL DAN PEMBAHASAN
5.1 Hasil Penelitian 5.1.1 Determinasi Tanaman Determinasi tanaman dilakukan di Herbarium Bogoriense, Pusat Penelitian Biologi LIPI, Bogor, Jawa Barat. Hasil determinasi menunjukkan bahwa tanaman ini adalah jenis tanaman tapak liman (Elephantopus scaber L) suku Asteraceae (Lampiran 1). 5.2.1 Ekstraksi Ditimbang 500 g serbuk herba tapak liman (Elephantopus scaber L) dimaserasi dengan etanol 70%, kemudian dikentalkan dengan vacuum rotary evaporator sehingga didapatkan ekstrak kental 92,6 g dan rendemen yang didapat 18.52 % (Lampiran 8). 5.3.1 Penapisan Fitokimia Berdasarkan hasil pemeriksaan penapisan fitokimia herba tapak liman (Elephantopus scaber L) terdapat golongan senyawa flavonoid, saponin, strerois/triterpenoid, tannin dan minyak atsiri (Tabel 2).
37
38
Tabel 2. Hasil pemeriksaan penapisan fitokimia serbuk herba tapak liman Golongan senyawa a. Alkaloid b. Flavonoid c. Saponin d. Steroid/triterpenoid e. Tannin f. Kuinon g. Minyak Atsiri h. Kumarin
Hasil penapisan + + + + + -
Keterangan : (+) Memberikan reaksi positif, (-) Memberikan reaksi negatif 5.4.1 Hasil pengukuran kadar asam urat darah Hasil pengukuran rata-rata kadar asam urat darah hewan uji selama percobaan (Gambar 6 dan Tabel 3) dan untuk data hasil pengukuran kadar asam urat darah hewan uji selengkapnya selama percobaan (Tabel 5).
Gambar 6. Kurva kadar asam urat darah rata-rata hewan uji selama percobaan
39
Tabel 3. Hasil pengukuran rata-rata kadar asam urat darah hewan uji selama percobaan (mg/dl)
Waktu (Hari)
Kontrol Normal
Kontrol Negatif
Kontrol Pembanding
0 6 9 12 15
1.65 1.50 1.43 1.50 1.43
1.48 2.90 3.33 3.55 3.85
1.30 2.78 2.45 1.78 1.15
Ekstrak Dosis Rendah 1.60 2.80 2.48 2.30 1.75
Ekstrak Dosis Sedang 1.25 3.00 2.33 2.23 1.70
Ekstrak Dosis Tinggi 1.53 2.80 2.58 1.95 1.65
5.5.1 Uji statistik kadar asam urat darah Kadar asam urat darah sebelum dan sesudah percobaan seluruh kelompok hewan uji dilakukan uji normalitas (One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test) dan uji homogenitas (Levene) menunjukkan kadar asam urat darah sebelum dan sesudah percobaan terdistribusi normal (p ≥ 0.05) dan pada uji homogenitas menunjukkan bervariasi homogen (p ≥ 0.05) sehingga dapat dilanjutkan dengan uji ANOVA satu arah (Lampiran 11 dan 12). Pada Uji ANOVA satu arah bila (p ≤ 0.05) maka harus dilakukan uji Beda Nyata Terkecil (BNT) dengan metode LSD (Lampiran 13). 5.2 Pembahasan Dalam penelitian ini menggunakan ekstrak herba tapak liman (Elephantopus scaber L) dengan ekstraksi menggunakan pelarut etanol 70% yang kemudian dilakukan penapisan fitokimia dan diuji efek penurunan asam uratnya, apakah berpengaruh terhadap penurunan kadar asam urat darah tikus yang diinduksi dengan kafeina 27 mg/200 g BB tikus.
40
Penelitian ini menggunakan tikus sebagai hewan uji karena mudah didapat, murah dan telah ada penelitian sebelumnya yang berhasil. Tikus putih jantan pada usia 3-4 bulan adalah tkus dewasa muda yang mempunyai keadaan fisiologik yang optimum. Sebelum digunakan, tikus diaklimatisasi selama 2 minggu, agar dapat menyesuaikan diri dengan lingkungannnya selama penelitian berlangsung. Tikus yang dipilih untuk penelitian adalah tikus putih jantan bergalur SpragueDawley yang sehat dengan ciri-ciri adalah bulu bersih, mata merah jernih bersinar, tingkah laku normal dan berat badan bertambah setelah diaklimatisasi menjadi 180-250 g. Selama pemeliharaan semua tikus ditimbang, diberi makan dan minum dengan takaran yang sama untuk setiap ekor. Sebelum diberi perlakuan, tikus dilakukan pengukuran kadar asam urat darah awal. Penelitian ini menggunakan metode induksi kafeina yang merupakan uji praklinik yang lebih mendekati keadaan penderita asam urat yang sebenarnya. Pada metode ini, kafeina yang merupakan golongan xantin akan dimetabolisme oleh enzim xantin oksidase menjadi asam urat sehingga asam urat pada hewan uji meningkat kadarnya. Ekstrak kental herba tapak liman (Elephantopus scaber L) diuji kemampuannya untuk menghambat pembentukan enzim xantin oksidase dari hewan uji tersebut. Pada penelitian ini digunakan 3 kelompok kontrol yaitu kontrol normal, kontrol negatif dan kontrol pembanding. Kelompok kontrol normal diperlukan untuk mengetahui kadar normal asam urat darah selama percobaan. Kontrol negatif yang diinduksi dengan kafeina diperlukan untuk mengetahui peningkatan kadar asam urat darah dari keadaan normal selama percobaan. Sedangkan kontrol pembanding dalam penelitian ini adalah alopurinol, diperlukan untuk melihat
41
pengaruh obat penurun kadar asam urat darah oral yang telah terbukti khasiatnya untuk menurunkan kadar asam urat darah. Bahan uji yang digunakan dalam penelitian ini berupa ekstrak herba tapak liman dengan dosis 175 mg/200 g BB, 350 mg/200 g BB, dan 750 mg/200 g BB. Dosis ini setara dengan 0.5; 1; dan 2 kali dosis manusia dan telah dikonversikan ke dosis tikus. Sedangkan dosis kontrol pembanding yang digunakan adalah 36 mg/200 g BB. Dosis ini didapatkan berdasarkan dosis efektif oral pada manusia yang dikonversikan ke dosis tikus. Pemberian bahan uji dilakukan satu kali sehari peroral dengan menggunakan sonde lambung. Pada hari pertama percobaan, sebelum diinduksi dengan kafeina, kadar asam urat darah tikus seluruh kelompok menunjukkan hasil yang normal. Kemudian hewan uji yang telah diinduksi kafeina diperiksa kadar asam urat darahnya pada hari ke-6 untuk mengetahui kadar hiperurisemia awal. Pada hari ke-7 dilakukan pemberian perlakuan berdasarkan kelompoknya masing-masing setiap hari dan kefeina tetap diberikan juga pada semua kelompok kecuali kelompok normal. Pengukuran kadar asam urat darah selanjutnya pada hari ke-9, ke-12 dan ke-15. Hasil presentase penurunan asam urat pada hari ke-15 hewan uji yang diberikan sediaan uji ekstrak kental herba tapak liman adalah dosis rendah 175 mg/ 200 g BB sebesar 37.5 %; 350 mg/ 200 g BB sebesar 43 %; 750 mg/ 200 g BB sebesar 41 % (Tabel 4).
42
Tabel 4. Hasil persentase penurunan kadar asam urat darah rata-rata kelompok ekstrak uji, dan kontrol pembanding Kelompok Perlakuan Kontrol Pembanding Ekstrak Dosis Rendah Ekstrak Dosis Sedang Ekstrak Dosis Tinggi Keterangan :
9 hari* 11.87% 11.43% 22.33% 7.86%
% Penurunan 12 hari* 15 hari* 35.97% 58.63% 17.86% 37.50% 25.67% 43% 30.36% 41%
* Hari setelah perlakuan Berdasarkan pada uji normalitas (One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test) menunjukkan kadar asam urat darah sebelum dan sesudah percobaan terdistribusi normal (p≥0,05) dan pada uji homogenitas (Levene) menunjukkan bervariasi homogen (p≥0,05) sehingga dapat dilanjutkan dengan uji ANOVA. Pada Uji ANOVA satu arah bila (p≤0,05) maka harus dilakukan uji Beda Nyata Terkecil (BNT) dengan metode LSD (Lampiran 11 dan 12). Uji ANOVA satu arah dan BNT pada hari ke-6 terhadap kadar asam urat darah seluruh kelompok hewan uji ekstrak, kontrol negatif dan kontrol pembanding menunjukkan berbeda secara bermakna (p ≤ 0.05) dengan kelompok kontrol normal karena seluruh kelompok hewan uji ekstrak, kontrol negatif dan kontrol pembanding telah mengalami hiperurisemia. Uji ANOVA satu arah dan BNT pada hari ke-9 terhadap kadar asam urat darah seluruh kelompok hewan uji ekstrak, kontrol negatif dan kontrol pembanding menunjukkan masih berbeda secara bermakna (p ≤ 0.05) dengan kelompok kontrol normal. Uji ANOVA satu arah dan BNT pada hari ke-12 terhadap kadar asam urat darah kelompok hewan uji ekstrak dosis tinggi, dan kontrol pembanding menunjukkan tidak berbeda secara bermakna (p ≥ 0.05) dengan kontrol normal. Uji ANOVA satu arah dan
43
BNT pada hari ke-15 terhadap kadar asam urat darah seluruh kelompok hewan uji ekstrak dan kontrol pembanding menunjukkan tidak berbeda secara bermakna (p ≥ 0.05) dengan kontrol normal (Lampiran 13). Penurunan kadar asam urat darah kelompok yang diberi alopurinol disebabkan oleh kerjanya yang menghambat pembentukan enzim xantin oksidase dari hewan uji tersebut namun penurunan kadar asam urat darah kelompok yang diberi sediaan uji ekstrak kental etanol 70 % herba tapak liman (Elephantopus scaber L) belum diketahui mekanisme kerjanya.
BAB VI KESIMPULAN DAN SARAN
6.1 Kesimpulan Dari hasil penelitian uji efek penurunan kadar asam urat darah ekstrak etanol 70% herba tapak liman (Elephantopus scaber L) pada tikus putih jantan yang diinduksi dengan kafeina, diperoleh kesimpulan bahwa dosis sedang (350 mg/200 g BB) sediaan uji ekstrak kental herba tapak liman (Elephantopus scaber L) memberikan penurunan kadar asam urat darah yang paling efektif (p ≤ 0.05). Hal ini ditunjukkan dengan dosis 350 mg/200 g BB yang menurunkan kadar asam urat darah hari ke 15 sebesar 43 %. 6.2 Saran Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut tentang efek penurunan kadar asam urat darah dari ekstrak etanol herba tapak liman (Elephantopus scaber L) dan kandungan senyawa aktif yang bertanggung jawab terhadap efek penurunan kadar asam urat darah tersebut. Selain itu juga perlu dilakukan penelitian tentang toksisitas herba tapak liman (Elephantopus scaber L) pada hewan uji untuk mengevaluasi batas keamanannya jika digunakan dalam jangka panjang.
44
45
DAFTAR PUSTAKA
Azizahwati, W., Sumali, Prihandini, K. 2005. Efek Penurunan Kadar Asam Urat Dalam Darah Tikus Putih Jantan Dari Rebusan Akar Tanaman Akar Kucing (Acalypha Indica L). Departemen Farmasi FMIPA-UI. Depok: Bandolier team. 2005. Epidemiology of gout. Bandolier. Betram D., Katzung, MD. Ph.D.,2002. Farmakologi Dasar dan Klinik, alih bahasa Bagian Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga dari judul aslinya Basic & Clinical Pharmacology, 8th Ed. Penerbit Salemba Media. Jakarta: Broadhurst, C. L., 1999. Ease Gout Pain. Nutrition Science News. Dahlan, Sopiyuddin. 2004. Seri Statistik : Statistik Untuk Kedokteran dan Kesehatan Uji Hipotesis Dengan Menggunakan SPSS Program 12 Jam. PT Arkanas. Jakarta: 89-101. Departemen Kesehatan RI. 1989. Vademekum Bahan Obat Alam. Ditjen POM. Jakarta: 276-277. Departemen Kesehatan RI. 1980. Materia Medika Indonesia Jilid IV. Dirjen POM. Jakarta: 52-56. Departemen Kesehatan RI. 2000. Parameter Standard Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Dirjen POM. Jakarta: 1-12. Departemen Kesehatan RI. 2006. Pharmacetical Care Untuk Pasien Penyakit Arthritis Rematik. Direktorat Jendral Bina Farmasi Komunitas dan Klinik. Jakarta: 48-52. Department of Health and Human Services Food and Drug Administration. 2005. Guidance for Industry Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trial for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers. Center for Drug Evaluation and Research. 16. Farnswoth, NR. 1986. Biological and Phytochemical Screening of Plants. journal pharmaceutical science. 255 – 265. Ganiswarna, Sulistia, G. 1995. Farmakologi dan Terapi edisi 4. Fakultas Kedokteran UI. Jakarta: 220-222; 226-233.
46
Garreth, RH., Grishan, CM. 1995. Biochemistry. Saunders College Publishing. Florida: 871-885. Gunawan Didik. Apt.SU dan Mulyani Sri, Apt. SU. 2004. Ilmu Obat Alam (Farmakognosi) Jilid 1. 9. Harborne, J.B. 1996. Metode Fitokimia Penuntun Cara modern Menganalisis Tumbuhan. Terjemahan: Kosasih P, Soediro Iwang, ITB. Bandung: 6-17. Herlina, Tati. 2005. Senyawa Bioaktif Dari Erythrina Variegata. FMIPA Padjajaran. Bandung: Kasper, D., Braunwald, E., Fauci, A., Hauser, S., Longo, D., Jameson, L. 2004. Harrison’s Principles of Internal Medicine 16th Edition. In Wortmann, R. disorder of purine and pyrimidine metabolism. McGraw-Hill Professional. New York: Krisnatuti, D, et al. 1997. Perencanaan Mutu Untuk Penderita Asam Urat. Penebar Swadaya. Jakarta: 1-14. Malole, M.B.M, C.S.N, Pramono. 1989. Penggunaan Hewan-hewan di Labotorium. Departemen Pendidikan dan Kebudayaan Pusat Antar Universitas Bioteknologi. Bogor: 104-107. Murray, R., Granner, D., Mayes, P., Rodwell, V. 2003. Harper’s Illustrated Biochemistry, Twenty-Sixth Edition. In Rodwell, V. metabolism of purine & pyrimidine nucleotides. McGraw-Hill Companies. New York: 293-302. N. La Du Bart, Mandel HG, Way El. Fundamentals of Drugs Metabolism and Drug Disposition. Robert Krieger Publishing Company. Huntington, Newyork; 1979 : 189 Paget GE, Barnes JM. Evaluation of drug activities, Pharmacometric Vol.1, Academic Press, London, 1964. Redaksi VitaHealth. 2008. Asam Urat. PT. Gramedia Pustaka Utama. Jakarta: 12. Rodwell, V.W., Murray, R.K., Ganner, D.K,, Mayes, P.A. 1998. Biokimia Harper edisi 24. Penerbit Buku Kedokteran EGC Terjemahan Hartono. Jakarta: 378393. Santoso, Singgih. 2008. Panduan Lengkap Menguasai SPSS. PT Elek Komputindo. Jakarta: 164-180.
47
Sharp, P.E., LaRegina, M.C., Suckw, M.A. 1998. The Laboratory Rat. CRC Press. USA: Sudjana. 1992. Metode Statistika. Tarsito. Bandung: 299, 219-307. Tjay, Tan Hoan, Raharja, Kirana. 2002. Obat-obat Penting: Khasiat, Penggunaan, dan Efek-efek Sampingnya. Edisi ke5. PT. Alex Media Komputindo. Jakarta: 318-323. Voight, R. 1995. Buku Pelajaran Tekhnologi Farmasi. Alih Bahasa Drs. Soendani Noerono Soewandhi. Universitas Gajah Mada. Yogyakarta: 577-578. Wade A, et al. 1982. Martindale The Extra Pharmacopoeia Twenty-eight Edition. The Pharmaceutical Press. London: 340. Wade A, Waller P.J. 1994. Handbook of Pharmaceutical Excipients Second Edition. The Pharmaceutical Press. London: 78. Weatheral D.J., Ledingham J.G.G., Warrell D.A. 1987. Oxford Text Book of Medicine, 2nd Ed, Vol I. Oxford University Press. 9.123-9.135. Yuniarti, Titin. 2008. Ensiklopedia Tanaman Obat Tradisional. Jakarta: 391-393. Yuno, S. 2003. Uji Efek Campuran Ekstrak Herba Seledri (Apium graveolens L) dan Jahe Merah (Zingeber officinale Rosc) terhadap Penurunan Kadar Asam Urat pada Tikus Putih Jantan yang Diinduksi Kalium Oksonat. Departemen Farmasi FMIPA-UI. Depok:
48
Lampiran 1. Hasil determinasi tanaman tapak liman (Elephantopus scaber L)
49
Lampiran 2. Surat keterangan galur hewan uji
50
Lampiran 3. Bahan dan hewan uji
Gambar 7. Tanaman tapak liman (Elephantopus scaber L)
Gambar 8. Tikus putih jantan galur Sprague-Dawley
Gambar 9. Pemberian sediaan secara oral
51
Lampiran 4. Alat- alat yang digunakan dalam penelitian
Gambar 10. Vacuum rotary evaporator
Gambar 12. Timbangan tikus
Gambar 11. Timbangan analitik
Gambar 13. Timbangan
Gambar 14. Alat dan tes strip asam urat (Easytouch)
52
Lampiran 5. Skema proses ekstraksi
Serbuk simplisia kering herba tapak liman (Elephantopus scaber L)
Uji penapisan fitokimia
Ekstraksi ( maserasi berulang-ulang dengan pelarut etanol 70 % )
Ekstrak etanol 70 % cair
Diuapkan dengan vacuum rotary evaporator
Ekstrak etanol 70 % kental
Ampas
Dibuang
53
Lampiran 6. Skema uji efek penurunan kadar asam urat darah Persiapan tikus
Kontrol Normal
Kontrol Negatif
Kontrol Pembanding
Kelompok uji I
Kelompok uji II
Kelompok uji III
Larutan Na CMC 1%
Induksi Kafeina
Induksi Kafeina
Induksi Kafeina
Induksi Kafeina
Induksi Kafeina
Hari ke-6*
Pengukuran kadar asam urat darah hiperurisemia awal
Larutan Na CMC 0.5 %
Larutan Na CMC 0.5 % + Kefeina
Uji dengan Alopurinol + Kafeina
Uji Dosis Rendah + Kafeina
Uji Dosis Sedang + Kafeina
Hari ke-9*
Hari ke-12*
Hari ke-15*
Keterangan : *Pengukuran kadar asam urat darah
Uji Dosis Tinggi + Kafeina
54
Lampiran 7. Perhitungan rendemen dan dosis ekstrak kental herba tapak liman (Elephantopus scaber L)
A. Perhitungan rendemen Berat serbuk simplisia yang diekstraksi = 500 g Berat ekstrak kental yang didapat Rendemen
=
= 92.6 g
Berat ekstrak kental yang didapat Berat serbuk simplisia yang diekstraksi
=
92.6 g
X 100 %
X 100 %
500 g =
B.
18.52 %
Perhitungan dosis herba tapak liman Dosis untuk manusia 10-20 g serbuk kering, dosis yang saya pakai 11 g
Jadi, dosis pada manusia = % kadar ekstrak kental x dosis herba tapak liman yang digunakan manusia = 18.52 % X 11 g = 2.0372 g
Dosis untuk tikus
= dosis pada manusia x faktor konversi x faktor farmakokinetika = 2. 0372 g x 0.018 x 10 = 0.37 g/200 g BB
Keterangan: Faktor konversi dari manusia ke tikus = 0.018 (Paget & Barnes, 1964) dan faktor farmakokinetika yang digunakan = 10 (Mandel et al,1979).
Penetapan Pembagian Dosis Uji 1. Dosis rendah = Dosis 0.5 kali yaitu 0.5 x 0.35 g/200 g BB = 175 mg/200 g BB 2. Dosis sedang = Dosis 1 kali yaitu 1 x 350 mg/200 g BB
= 350 mg/200 g BB
3. Dosis tinggi = Dosis 2 kali
= 700 mg/200 g BB
yaitu 2 x 350 mg/200 g BB
55
Lampiran 8. Pembuatan sediaan uji
A. Pembuatan suspensi ekstrak etanol herba tapak liman (Elephantopus scaber L) 1. Dosis rendah (175 mg/200 g BB/hari) Untuk satu ekor tikus dengan berat badan 200 g dan konsentrasi ekstrak 350 mg/ml, VAO = Dosis x Berat badan = Konsentrasi
175 mg x 200 g
= 0,5 ml
200 g x 350 mg/ml
2. Dosis sedang (350 mg/200 g BB/hari) Untuk satu ekor tikus dengan berat badan 200 g dan konsentrasi ekstrak 350 mg/ml, VAO = Dosis x Berat badan = Konsentrasi
350 mg x 200 g
= 1 ml
200 g x 350 mg/ml
3. Dosis tinggi (700 mg/200 g BB/hari) Untuk satu ekor tikus dengan berat badan 200 g dan konsentrasi ekstrak 350 mg/ml, VAO = Dosis x Berat badan = Konsentrasi
700 mg x 200 g
= 2 ml
200 g x 350 mg/ml
B. Pembuatan suspensi kafeina (27 mg/200 g BB) Untuk satu ekor tikus dengan berat badan 200 g dan konsentrasi 30 mg/ml, VAO = Dosis x Berat badan = Konsentrasi
27 mg x 200 g
= 0.9 ml
200 g x 30 mg/ml
C. Pembuatan suspensi alopurinol (36 mg/200 g BB) Untuk satu ekor tikus dengan berat badan 200 g dan konsentrasi 30 mg/ml, VAO = Dosis x Berat badan = Konsentrasi
36 mg x 200 g 200 g x 40 mg/ml
= 0.9 ml
56
Lampiran 9. Hasil pengukuran kadar asam urat darah hewan uji selama percobaan
Tabel 5. Hasil pengukuran kadar asam urat darah hewan uji selengkapnya selama percobaan (mg/dl) Waktu (Hari)
Kontrol Normal
Kontrol Negatif
Kontrol Pembanding
Ekstrak Dosis Rendah
Ekstrak Dosis Sedang
Ekstrak Dosis Tinggi
0
1.7 1.3 2.1 1.5
1.7 1.5 1.2 1.5
1.0 1.4 1.3 1.5
1.3 1.5 2.1 1.5
1.2 1.5 1.3 1.0
1.7 2.1 1.0 1.3
Ratarata
1.65
1.48
1.30
1.60
1.25
1.53
6
1.2 1.2 1.7 1.5
2.9 3.1 3.0 2.6
2.6 3.3 2.7 2.5
2.9 3.1 2.5 2.7
3.2 2.8 2.9 3.1
3.0 2.8 2.5 2.9
Ratarata
1.50
2.90
2.78
2.80
3.00
2.80
1.7
3.3
2.1
1.8
2.0
2.7
1.5 1.3 1.2
3.5 3.1 3.4
2.9 2.5 2.3
3.0 2.2 2.9
2.1 3.1 2.1
3.1 2.5 2.0
1.43
3.33
2.45
2.48
2.33
2.58
1.5
3.7
1.5
1.5
2.7
2.1
2.1 1.1 1.3
3.3 3.7 3.5
2.1 1.5 2.0
2.5 3.1 2.1
2.1 2.1 2.0
2.7 1.5 1.2
1.50
3.55
1.78
2.30
2.23
1.95
15
1.3 1.7 1.5 1.2
3.9 3.7 4.1 3.7
1.1 1.2 1.0 1.3
1.5 1.8 1.9 1.8
2.0 1.5 1.6 1.7
1.8 2.1 1.5 1.2
Ratarata
1.43
3.85
1.15
1.75
1.70
1.65
9 Ratarata 12 Ratarata
57
Lampiran 10. Uji normalitas (One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test) terhadap kadar asam urat darah kelompok hewan uji
Tujuan
: Untuk melihat data kadar asam urat darah tikus terdistribusi normal
atau tidak
Hipotesis : Ho
: Data kadar asam urat darah tikus terdistribusi normal
Ha
: Data kadar asam urat darah tikus tidak terdistribusi normal
Pengambilan keputusan
:
Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak
One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test Hari Ke-0 N Normal Parametersa,,b
Mean Std. Deviation Most Extreme Absolute Differences Positive Negative Kolmogorov-Smirnov Z Asymp. Sig. (2-tailed) a. Test distribution is Normal. b. Calculated from data. Keputusan
Hari Hari Hari Hari Ke-6 Ke-9 Ke-12 Ke-15
24 24 24 24 24 1.467 2.613 2.429 2.217 1.921 .3171 .6024 .6721 .7772 .9288 .208 .259 .133 .226 .260 .208 .127 .105 .226 .260 -.102 -.259 -.133 -.095 -.161 1.020 1.270 .653 1.109 1.274 .249 .079 .788 .171 .078
: Kadar asam urat darah seluruh kelompok hewan uji terdistribusi
normal (p ≥ 0.05).
58
Lampiran 11. Uji homogenitas (Lavene) terhadap kadar asam urat darah kelompok hewan uji
Tujuan : Untuk melihat data kadar asam urat darah tikus homogen atau tidak
Hipotesis
:
Ho
: Data kadar asam urat darah tikus bervariasi homogen
Ha
: Data kadar asam urat darah tikus tidak bervariasi homogen
Pengambilan keputusan
:
Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak
Test of Homogeneity of Variances Levene Statistic Hari Ke-0 Hari Ke-6 Hari Ke-9 Hari Ke-12 Hari Ke-15 Keputusan
1.281 .518 1.937 1.486 1.591
df1
df2 5 5 5 5 5
Sig. 18 18 18 18 18
.315 .760 .138 .243 .213
: Kadar asam urat darah seluruh kelompok hewan uji bervarisasi
homogen (p ≥ 0.05).
59
Lampiran 12. Uji ANOVA satu arah dan Beda Nyata Terkecil (BNT) dengan LSD terhadap kadar asam urat darah kelompok hewan uji
Tujuan : Untuk melihat data kadar asam urat darah tikus terdapat perbedaan secara bermakna atau tidak antar kelompok Hipotesis Ho
:
: Data kadar asam urat darah tikus tidak terdapat perbedaan secara
bermakna Ha
: Data kadar asam urat darah tikus terdapat perbedaan secara bermakna
Pengambilan keputusan
:
Jika nilai signifikansi ≥ 0.05, maka Ho diterima Jika nilai signifikansi ≤ 0.05, maka Ho ditolak dan dilanjutkan dengan uji Beda Nyata Terkecil (BNT) ANOVA Sum of Squares df Mean Square Hari Ke-0
Hari Ke-6
Hari Ke-9
Between Groups
.518
5
.104
Within Groups
1.795
18
.100
Total Between Groups
2.313 7.199
23 5
1.440
Within Groups
1.148
18
.064
Total Between Groups
8.346 7.382
23 5
1.476
3.008 10.390
18 23
.167
10.258
5
2.052
3.635 13.893
18 23
.202
18.852 .988
5 18
3.770 .055
19.840
23
Within Groups Total Hari Ke-12 Between Groups Within Groups Total Hari Ke-15 Between Groups Within Groups Total
F
Sig.
1.040 .425
22.584 .000
8.836 .000
10.160 .000
68.727 .000
Keputusan : Kadar asam urat darah awal seluruh kelompok hewan uji sebelum perlakuan (hari ke-0) tidak berbeda secara bermakna (p ≥ 0.05) sedangkan kadar asam urat darah seluruh kelompok hewan uji pada hari ke-6 (hiperurisemia awal), ke-9, ke-12 dan ke-15 berbeda secara bermakna (p ≤ 0.05) sehingga harus dilanjutkan dengan uji Beda Nyata Terkecil (BNT) dengan LSD.
60
Lampiran 12. (Lanjutan) Uji BNT Hari ke-6 Multiple Comparisons Hari Ke-6 LSD
(I) Kelompok
(J) Kelompok
Kontrol Normal
Kontrol Negatif
Kontrol Pembanding
Upper Bound
-1.875
-1.125
Kontrol Pembanding
-1.3750
*
.1785
.000
-1.750
-1.000
Dosis Rendah
-1.4000*
.1785
.000
-1.775
-1.025
Dosis Sedang
-1.6000
*
.1785
.000
-1.975
-1.225
-1.4000
*
.1785
.000
-1.775
-1.025
1.5000*
.1785
.000
1.125
1.875
Kontrol Pembanding
.1250
.1785
.493
-.250
.500
Dosis Rendah
.1000
.1785
.582
-.275
.475
Dosis Sedang
-.1000
.1785
.582
-.475
.275
Dosis Tinggi
.1000
.1785
.582
-.275
.475
Kontrol Normal
1.3750*
.1785
.000
1.000
1.750
Kontrol Negatif
-.1250
.1785
.493
-.500
.250
Dosis Rendah
-.0250
.1785
.890
-.400
.350
Dosis Sedang
-.2250
.1785
.224
-.600
.150
Kontrol Normal
-.0250
.1785
.890
-.400
.350
Kontrol Normal
1.4000*
.1785
.000
1.025
1.775
Kontrol Negatif
-.1000
.1785
.582
-.475
.275
.0250
.1785
.890
-.350
.400
Dosis Sedang
-.2000
.1785
.277
-.575
.175
Dosis Tinggi
.0000
.1785
1.000
-.375
.375
Kontrol Normal
1.6000*
.1785
.000
1.225
1.975
Kontrol Negatif
.1000
.1785
.582
-.275
.475
Kontrol Pembanding
.2250
.1785
.224
-.150
.600
Dosis Rendah
.2000
.1785
.277
-.175
.575
Dosis Tinggi Dosis Tinggi
Lower Bound
.000
Kontrol Pembanding
Dosis Sedang
Sig.
.1785
Dosis Tinggi Dosis Rendah
95% Confidence Interval Std. Error
-1.5000*
Dosis Tinggi Kontrol Negatif
Mean Difference (I-J)
.2000
.1785
.277
-.175
.575
Kontrol Normal
1.4000*
.1785
.000
1.025
1.775
Kontrol Negatif
-.1000
.1785
.582
-.475
.275
.0250
.1785
.890
-.350
.400
Dosis Rendah
.0000
.1785
1.000
-.375
.375
Dosis Sedang
-.2000
.1785
.277
-.575
.175
Kontrol Pembanding
*. The mean difference is significant at the 0.05 level.
Keputusan : Kadar asam urat darah hewan uji setelah diinduksi kafeina 6 hari menunjukkan kadar asam urat darah berbeda secara bermakna (p ≤ 0.05) dan setelah dilakukan uji BNT hasilnya menunjukan kadar asam urat darah semua kelompok hewan uji berbeda secara bermakna (p ≤ 0.05) dengan kelompok normal karena telah mengalami hiperurisemia
61
Lampiran 12. (Lanjutan) Uji BNT Hari ke-9 Multiple Comparisons Hari Ke-9 LSD 95% Confidence Interval (I) Kelompok
(J) Kelompok
Kontrol Normal
Kontrol Negatif
-1.9000*
.2890
.000
-2.507
-1.293
Kontrol Pembanding
-1.0250*
.2890
.002
-1.632
-.418
Dosis Rendah
-1.0500*
.2890
.002
-1.657
-.443
Dosis Sedang
-.9000*
.2890
.006
-1.507
-.293
Dosis Tinggi
-1.1500*
.2890
.001
-1.757
-.543
1.9000*
.2890
.000
1.293
2.507
Kontrol Pembanding
.8750*
.2890
.007
.268
1.482
Dosis Rendah
.8500*
.2890
.009
.243
1.457
Dosis Sedang
1.0000*
.2890
.003
.393
1.607
Dosis Tinggi
.7500*
.2890
.018
.143
1.357
Kontrol Normal
1.0250*
.2890
.002
.418
1.632
Kontrol Negatif
-.8750*
.2890
.007
-1.482
-.268
Dosis Rendah
-.0250
.2890
.932
-.632
.582
Dosis Sedang
.1250
.2890
.671
-.482
.732
Dosis Tinggi
-.1250
.2890
.671
-.732
.482
Kontrol Normal
1.0500*
.2890
.002
.443
1.657
Kontrol Negatif
Kontrol Negatif
Kontrol Pembanding
Dosis Rendah
Dosis Sedang
Dosis Tinggi
Kontrol Normal
Mean Difference (I-J) Std. Error
Sig.
Lower Bound
Upper Bound
-.8500*
.2890
.009
-1.457
-.243
Kontrol Pembanding
.0250
.2890
.932
-.582
.632
Dosis Sedang
.1500
.2890
.610
-.457
.757
Dosis Tinggi
-.1000
.2890
.733
-.707
.507
Kontrol Normal
.9000*
.2890
.006
.293
1.507
Kontrol Negatif
-1.0000*
.2890
.003
-1.607
-.393
Kontrol Pembanding
-.1250
.2890
.671
-.732
.482
Dosis Rendah
-.1500
.2890
.610
-.757
.457
Dosis Tinggi
-.2500
.2890
.398
-.857
.357
Kontrol Normal
1.1500*
.2890
.001
.543
1.757
Kontrol Negatif
-.7500*
.2890
.018
-1.357
-.143
Kontrol Pembanding
.1250
.2890
.671
-.482
.732
Dosis Rendah
.1000
.2890
.733
-.507
.707
Dosis Sedang
.2500
.2890
.398
-.357
.857
*. The mean difference is significant at the 0.05 level.
Keputusan : Kadar asam urat darah seluruh kelompok hewan uji ekstrak, kontrol negatif dan kontrol pembanding menunjukkan berbeda secara bermakna (p ≤ 0.05) dengan kelompok kontrol normal; seluruh kelompok hewan uji ekstrak, kontrol normal dan kontrol pembanding menunjukkan berbeda secara bermakna (p ≤ 0.05) juga dengan kelompok kontrol negatif; seluruh kelompok hewan uji ekstrak menunjukkan tidak berbeda secara bermakna (p ≥ 0.05) dengan kontrol pembanding sehingga kesimpulannya walaupun seluruh kelompok hewan uji ekstrak, dan kontrol pembanding kadar asam urat darahnya belum normal tetapi telah menunjukan penurunan bila dibandingkan dengan kontrol negatif dan kerja semua ekstrak uji sebanding dengan pembanding
62
Lampiran 12. (Lanjutan) Uji BNT Hari ke-12 Multiple Comparisons Hari Ke-12 LSD 95% Confidence Interval (I) Kelompok
(J) Kelompok
Kontrol Normal
Kontrol Negatif
Kontrol Pembanding
Dosis Rendah
Dosis Sedang
Lower Bound
Upper Bound
.3178
.000
-2.718
-.2750
.3178
.398
-.943
.393
Dosis Rendah
-.8000*
.3178
.022
-1.468
-.132
Dosis Sedang
-.7250*
.3178
.035
-1.393
-.057
Dosis Tinggi
-.4500
.3178
.174
-1.118
.218
Kontrol Normal
2.0500*
.3178
.000
1.382
2.718
Kontrol Pembanding
1.7750*
.3178
.000
1.107
2.443
Dosis Rendah
1.2500*
.3178
.001
.582
1.918
Dosis Sedang
1.3250*
.3178
.001
.657
1.993
Dosis Tinggi
1.6000*
.3178
.000
.932
2.268
Kontrol Normal
.2750
.3178
.398
-.393
.943
Kontrol Negatif
-1.7750*
.3178
.000
-2.443
-1.107
Dosis Rendah
-.5250
.3178
.116
-1.193
.143
Dosis Sedang
-.4500
.3178
.174
-1.118
.218
Dosis Tinggi
-.1750
.3178
.589
-.843
.493
Kontrol Normal
.8000*
.3178
.022
.132
1.468
Kontrol Negatif
-1.382
-1.2500*
.3178
.001
-1.918
-.582
Kontrol Pembanding
.5250
.3178
.116
-.143
1.193
Dosis Sedang
.0750
.3178
.816
-.593
.743
Dosis Tinggi
.3500
.3178
.285
-.318
1.018
Kontrol Normal
.7250*
.3178
.035
.057
1.393
Kontrol Negatif
-1.3250*
.3178
.001
-1.993
-.657
.4500
.3178
.174
-.218
1.118
Dosis Rendah
-.0750
.3178
.816
-.743
.593
Dosis Tinggi
.2750
.3178
.398
-.393
.943
Kontrol Normal
.4500
.3178
.174
-.218
1.118
Kontrol Negatif
-1.6000*
.3178
.000
-2.268
-.932
.1750
.3178
.589
-.493
.843
Dosis Rendah
-.3500
.3178
.285
-1.018
.318
Dosis Sedang
-.2750
.3178
.398
-.943
.393
Kontrol Pembanding
Dosis Tinggi
Sig.
-2.0500*
Kontrol Pembanding
Kontrol Negatif
Mean Difference (I-J) Std. Error
Kontrol Pembanding
*. The mean difference is significant at the 0.05 level.
Keputusan : Kadar asam urat darah kelompok hewan uji ekstrak dosis tinggi, dan kontrol pembanding menunjukkan tidak berbeda secara bermakna (p ≥ 0.05) dengan kontrol normal; seluruh kelompok hewan uji ekstrak, kontrol normal dan kontrol pembanding menunjukkan berbeda secara bermakna (p ≤ 0.05) dengan kelompok kontrol negatif; seluruh kelompok hewan uji ekstrak menunjukkan tidak berbeda secara bermakna (p ≥ 0.05) dengan kontrol pembanding sehingga kesimpulannya kelompok hewan uji ekstrak dosis tinggi dan kontrol pembanding kadar asam urat darahnya sudah normal walaupun ekstrak dosis rendah dan sedang masih berbeda tetapi semua kelompok uji telah menunjukan penurunan bila dibandingkan dengan kontrol negatif dan kerja semua ekstrak uji sebanding dengan pembanding
63
Lampiran 12. (Lanjutan) Uji BNT Hari ke-15 Multiple Comparisons Hari Ke-15 LSD 95% Confidence Interval (I) Kelompok
(J) Kelompok
Kontrol Normal
Kontrol Negatif
Kontrol Pembanding
Dosis Rendah
Dosis Tinggi
Sig.
Lower Bound
Upper Bound
.1656
.000
-2.773
-2.077
.2750
.1656
.114
-.073
.623
Dosis Rendah
-.3250
.1656
.065
-.673
.023
Dosis Sedang
-.2750
.1656
.114
-.623
.073
Dosis Tinggi
-.2250
.1656
.191
-.573
.123
Kontrol Normal
2.4250*
.1656
.000
2.077
2.773
Kontrol Pembanding
2.7000*
.1656
.000
2.352
3.048
Dosis Rendah
2.1000*
.1656
.000
1.752
2.448
Dosis Sedang
2.1500*
.1656
.000
1.802
2.498
Dosis Tinggi
2.2000*
.1656
.000
1.852
2.548
Kontrol Normal
-.2750
.1656
.114
-.623
.073
Kontrol Negatif
-2.7000*
.1656
.000
-3.048
-2.352
Dosis Rendah
-.6000*
.1656
.002
-.948
-.252
Dosis Sedang
-.5500*
.1656
.004
-.898
-.202
Dosis Tinggi
-.5000*
.1656
.007
-.848
-.152
Kontrol Normal
.3250
.1656
.065
-.023
.673
Kontrol Negatif
-2.1000*
.1656
.000
-2.448
-1.752
.6000*
.1656
.002
.252
.948
Dosis Sedang
.0500
.1656
.766
-.298
.398
Dosis Tinggi
.1000
.1656
.554
-.248
.448
Kontrol Normal
.2750
.1656
.114
-.073
.623
Kontrol Negatif
-2.1500*
.1656
.000
-2.498
-1.802
Kontrol Pembanding
.5500*
.1656
.004
.202
.898
Dosis Rendah
-.0500
.1656
.766
-.398
.298
Dosis Tinggi
.0500
.1656
.766
-.298
.398
Kontrol Normal
.2250
.1656
.191
-.123
.573
Kontrol Negatif
-2.2000*
.1656
.000
-2.548
-1.852
Kontrol Pembanding
.5000*
.1656
.007
.152
.848
Dosis Rendah
-.1000
.1656
.554
-.448
.248
Dosis Sedang
-.0500
.1656
.766
-.398
.298
Kontrol Pembanding
Dosis Sedang
Std. Error
-2.4250*
Kontrol Pembanding
Kontrol Negatif
Mean Difference (I-J)
*. The mean difference is significant at the 0.05 level.
Keputusan : kadar asam urat darah seluruh kelompok hewan uji ekstrak dan kontrol pembanding menunjukkan tidak berbeda secara bermakna (p ≥ 0.05) dengan kontrol normal; seluruh kelompok hewan uji ekstrak, kontrol normal dan kontrol pembanding menunjukkan berbeda secara bermakna (p ≤ 0.05) dengan kelompok kontrol negatif; semua kelompok hewan uji ekstrak menunjukkan berbeda secara bermakna (p ≥ 0.05) dengan kontrol pembanding sehingga kesimpulannya seluruh kelompok hewan uji ekstrak dan kontrol pembanding kadar asam urat darahnya sudah normal dan telah menunjukan penurunan bila dibandingkan dengan kontrol negatif tetapi kerja semua dosis ekstrak uji tidak sebanding dengan pembanding karena kadar asam urat darah kontrol pembanding lebih rendah dibawah kontrol normal.
