2014/11/18
OH OH
HO
O OH
OH
S2-Kimia Institut Pertanian Bogor
ANTIOKSIDAN
Company
LOGO
UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN
ANTIOKSIDAN ● Zat yang menghambat/mencegah oksidasi → menghambat kerusakan lemak/minyak akibat oksidasi Oksidasi Lemak: Inisiasi; propagasi; terminasi Inisiasi
: RH + I →R• + H + I(inisiator)
Propagasi : R• + O2 →ROO• ROO• + RH → ROOH + R• Terminasi: ROO• + ROO• →ROOR + O2 R• + R• → RR ROO• + R•→ ROOR
Menghambat oksidasi zat yang mudah teroksidasi walau dalam konsentrasi rendah 2
1
2014/11/18
Company
LOGO ● Penggolongan: • Antioksidan primer: menghentikan reaksi berantai pembentukan radikal • Antioksidan sekunder/antioksidan preventif: mencegah reaksi oksidasi /mengurangi laju reaksi awal (mencegah kerja faktorfaktor yang mempercepat oksidasi (misalnya Fe, Cu dsb) ● Mekanisme kerja antioksidan - Melepaskan Hidrogen - Melepaskan elektron - Membentuk kompleks dengan lemak
● Contoh antioksidan Vitamin E (tokoferol), vvitamin C, karotenoid BHA (Butylated Hydroxy Anisol); BHT 3
Company
LOGO
Teknik Uji Aktivitas Antioksidan
Metode Penangkapan Radikal DPPH DPPH (difinil pikrill hidrazil) : • radikal bebas yang stabil • berwarna ungu dalam larutan, λmaks 515-525 nm • dapat ditangkap oleh reduktor yang memberikan atom H → bentuk terreduksi (difinil pikril hidrazin) yang tidak berwarna, dengan reaksi:
Difinil pikril hidrazil (ungu)
antioksidan
Difinil pikril hidrazin (tidak berwarna)
4
2
2014/11/18
Company
LOGO
Cara Uji
Bahan uji + DPPH dalam metanol
Inkubasi 30menit, 37oC
DPPH dalam metanol
Inkubasi 30menit, 37oC
A517 ?
= A sampel
A517 ?
= A blanko
% penangkapan radikal DPPH = (Ablangko – Asampel)/Ablangko x 100% Perbandingan aktivitas : dengan tokoferpl, BHT dsb 5
Company
LOGO
Metode reduksi Cerium (IV)
Senyawa antioksidan bisa berperan sebagai pemindah elektron. → perusakan struktur oleh oksidator kuat seperti Ce(IV)sulfat tidak terjadi, karena Ce(IV) menyerang antioksidan • Ce(IV) : menyerap uv λ 320 nm • Ce(IV) bereaksi dengan antioksidan → Ce(III) tidak menyerap pada 320 nm → serapan pada 320 nm menurun
6
3
2014/11/18
Company
LOGO
Cara Uji Bahan Uji +
Inkubasi
Ce(IV)sulfat dalam H2SO4
30 menit suhu ruang
Ce(IV)sulfat dalam H2SO4 sebagai blangko
Inkubasi 30 menit suhu ruang
A320
A320
Kapasitas reduksi = (Ablangko- Asampel )/Ablangko x 100%
7
Company
LOGO
Metode Tiosianat
Prinsip: asam linoleat teroksidasi menghasilkan radikal bebas; radikal bebas mengoksidasi Fe2+ menjadi Fe3+ yang bereaksi dengan SCN membentuk Fe(SCN)3 yang berwarna merah→ A500 ? - 2.51% asam linoleat dalam 99.9% etanol - Sampel dilarutkan dalam air/etanol - Buffer fosfat 0,02M pH 7 - Ferroklorida (FeCl2 0,02M dalam HCl 3,5%) - Ammonium tiosianant (NH4)SCN 30%
8
4
2014/11/18
Company
LOGO 4 mg sampel 4mL etanol 99.5% 4,1mL asam linoleat 2,51% 8 mL buffer fosfat 3,1 mL akuades
Inkubasi
40oC,
0,1 mL campuran A 9,7 mL etanol 75% 0,1 mL (NH4)SCN 30% 0,1 mL FeCl2 0,02M dalamHCl
Campuran A
gelap
3 menit
A500
Pengukuran dilakukan setiap 24 jam sampai A kontrol maksimum 9
Company
Penentuan Fraksi Aktif Antioksidan dengan cara Bioautografi
LOGO
Sampel → diekstraksi → ekstrak difraksionasi→fraksi aktif? Cara: f
S1
S2
S3
f
S1
S2
S3
o
o
o
S1
S2
S3
Semprot DPPH
elusi
s
f
s
o
s
Sampel 1: Fraksi 2 & 4 aktif Sampel 2: Fraksi 1, 3, 4 aktif Sampel 3: Fraksi 2 aktif 10
5
2014/11/18
Company
LOGO
Uji antioksidan lain
CUPRAC ABTS Bleaching karotenoid dll Perhatikan prinsip analisisnya
Company
LOGO
KAJIAN JURNAL
Fitoterapia 78 (2007) 401-408 MT Chomnawang, S Surassmo, VS Nukoolkarn, W Gritsanapan
EFFECT OF GARCINIA MANGOSTANA ON INFLAMMATION CAUSED BY PROPIONIBACTERIUM ACNES 12
6
2014/11/18
Company
LOGO
DPPH radical scavenging activity drying
CHCl3:EtOAc (1:4)
Sample 1mg/ml
Spraying with 0.2% DPPH 8 hours
active 13
Company
LOGO
Reaction oxygen species production assay
Preparation of P.acnes culture supernatant Cultivated 72 h
BHI & glucose With extract 100 g/ml
Anaerobic 37oC
Stored at 20oC until use
Without extract
Nitroblue tetrazolium dye (NBT) reduction test Incubated 37oC 30 min 25oC 20 min
Stained by Leishman stain
100 l NBT in PBS 100l
50 l 25oC
15 min
500 l Venous blood
Counting formazan deposit Polymorphonuclear leukocytes (PMNLs) 14
7
2014/11/18
Company
LOGO
Free radical Scavenging of the Thai medicinal plants extracts
Plants G.Mangostana
IC50 values (g/ml) 6.13
%superoxide radical inhibition ratio SD 77.80 1.28
H.Cordata
32.53
62.67 0.75
E.Odoratum
67.55
44.89 1.38
S. Alata
112.46
35.18 2.66
B. Lupulina
>150
10.74 0.86
S. Siamea
>150
67.60 1.47
A.paniculata
>150
8.02 2.11 15
Company
LOGO
Influence of G.mangostana extract on ROS level
16
8
