PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI

PENGARUH PEMBERIAN JANGKA PANJANG INFUSA KULIT Persea americana Mill. TERHADAP AKTIVITAS ALKALI FOSFATASE PADA TIKUS JANTAN TERINDUKSI KARBON TETRAKLORIDA

SKRIPSI Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) Program Studi Farmasi

Diajukan oleh: Maria Desita Putri 118114035

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2014

i


ii


iii


HALAMAN PERSEMBAHAN

“I am sure that neither death nor life, nor angles, nor principalities, nor power, nor things present, nor things to come, not height, nor depth, nor any creature shall separate me from the love of God” (Doug Nolk & Tom Fettke dalam lagu He Loved Me)

“There can be miracles when you believe” (Whitney Houston dalam lagu When You Believe)

“The one that can make you happy is you, yourself. Don’t put your happiness in someone else” (Anastasia Kinanti)

Kupersembahkan karya ini untuk: Yesus yang selalu menopang dan setia menemaniku Bapak, Ibu, Mas, Alma, alm. Mbah Lukas, serta Almamater Universitas Sanata Dharma

iv


v


vi


PRAKATA

Puji syukur penulis panjatkan kepada Bapa yang Maha Baik atas segala kasih dan karunia, berkat, serta anugerah yang setiap hari diberikan sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul “PENGARUH PEMBERIAN JANGKA PANJANG INFUSA KULIT Persea americana Mill. TERHADAP AKTIVITAS

ALKALI

FOSFATASE

PADA

TIKUS

JANTAN

TERINDUKSI KARBON TETRAKLORIDA” dengan baik dan lancar. Skripsi ini disusun untuk memenuhi salah satu syarat memperoleh gelar Sarjana Strata Satu Program Studi Farmasi (S.Farm) Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Penulis menyadari bahwa dalam proses pelaksanaan dan penyusunan skripsi ini ada banyak pihak yang telah memberi bantuan dan dukungan. Oleh karena itu, penulis mengucapkan terima kasih kepada: 1. Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma yang telah mengijinkan penulis menjalankan pembelajaran selama masa studi. 2. Ibu Phebe Hendra, M.Si., Ph.D., Apt., selaku Dosen Pembimbing skripsi yang telah setia membimbing, mendampingi, memberikan saran dan semangat selama proses penyusunan skripsi ini. 3. Bapak Prof. Dr. C.J. Soegihardjo, Apt., selaku Dosen Penguji pada skripsi ini yang telah memberikan saran kepada penulis. 4. dr. Fenty, M.Kes., Sp.PK., selaku Dosen Penguji pada skripsi ini, atas saran dan dukungannya kepada penulis.

vii


5. Ibu Dr. Sri Hartati Yuliani, M.Si., Apt. selaku Kepala Laboratorium Fakultas Farmasi yang telah memberikan ijin dalam penggunaan semua fasilitas laboratorium untuk kepentingan dan keberlangsungan skripsi. 6. Bapak Yohanes Dwiatmaka, M.Si., yang telah memberikan bantuan dalam determinasi Persea americana Mill. 7. Bapak Heru, Bapak Suparjiman, Bapak Kayat, Mas Andi, Mas Sigit, Mas Otok selaku Laboran Laboratorium Fakultas Farmasi atas bantuan dan dukungannya kepada penulis selama proses pengerjaan skripsi. 8. Bapak Aloysius Dominikus Sutarto, Ibu Rosalia Catharina Surajini, Mas Ignatius Mariandrianto Saputra, Pudensiana Alma Nugrahaeni, alm. Mbah Andrea Bukur Tuminem atas segala cinta, doa, motivasi, dan bantuan yang selalu menghangatkan. 9. Teman-teman “Tim Persea americana Mill.” atas kerjasama dan bantuannya. 10. Seluruh anggota “Rempong Family” Yosef Yudha, Anastasia Kinanti, Kris Rahardian, Trisona Agustina, Elisabeth Okta, dkk yang memberi warna dan kisah unik yang selalu penulis rindukan. 11. Puteri Lokastithi dan Tyas Bani Pamerdi kawan SMA yang tak terlewatkan. 12. Para anggota Mendes Sejati Jolinna Michelia Bitti, Angeline Syahputri, dan Marcellina Avistya yang banyak memberikan cerita. 13. Seluruh anggota “Syalala Family” Reri, Ci Henny, Koko Rendy, Papa John, Detta Detto, dan Princess Sisca atas doa dan kiriman malaikatnya. 14. Teman-teman FKK A 2011, FSM A 2011, dan seluruh teman-teman angkatan 2011 atas kebersamaan selama masa studi.

viii


ix


DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL ..........................................................................

i

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING .................................

ii

HALAMAN PENGESAHAN ............................................................

iii

HALAMAN PERSEMBAHAN .........................................................

iv

PERNYATAAN KEASLIAN KARYA .............................................

v

LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS.............................

vi

PRAKATA ..........................................................................................

vii

DAFTAR ISI .......................................................................................

x

DAFTAR TABEL ...............................................................................

xiv

DAFTAR GAMBAR ..........................................................................

xv

DAFTAR LAMPIRAN .......................................................................

xvi

INTISARI ............................................................................................

xvii

ABSTRACT ..........................................................................................

xviii

BAB I. PENGANTAR ........................................................................

1

A. Latar Belakang ................................................................................

1

1. Perumusan masalah ..................................................................

3

2. Keaslian penelitian ...................................................................

3

3. Manfaat penelitian ....................................................................

4

B. Tujuan Penelitian .............................................................................

5

1. Tujuan umum ............................................................................

5

x


2. Tujuan khusus ...........................................................................

5

BAB II. TINJAUAN PUSTAKA ..........................................................

6

A. Hati ....................................................................................................

6

1. Anatomi dan fisiologi hati ...........................................................

6

2. Fungsi hati ...................................................................................

8

3. Jenis kerusakan hati .....................................................................

8

4. ALP ..............................................................................................

10

B. Karbon Tetraklorida ...........................................................................

11

C. Persea americana Mill. ......................................................................

14

1. Taksonomi ....................................................................................

14

2. Nama lain .....................................................................................

14

3. Morfologi .....................................................................................

15

4. Kandungan kimia .........................................................................

15

5. Khasiat dan kegunaan ..................................................................

15

D. Landasan Teori ..................................................................................

16

E. Hipotesis ............................................................................................

17

BAB III. METODE PENELITIAN ........................................................

18

A. Jenis dan Rancangan Penelitian .........................................................

18

B. Variabel dan Definisi Operasional .....................................................

19

1. Variabel utama .............................................................................

19

2. Variabel pengacau ........................................................................

19

3. Definisi operasional ......................................................................

19

C. Bahan Penelitian .................................................................................

19

xi


1. Bahan utama ..................................................................................

19

2. Bahan kimia ...................................................................................

20

D. Alat dan Instrumen Penelitian .............................................................

20

E. Tata Cara Penelitian ............................................................................

21

1. Determinasi Persea americana Mill. ............................................

21

2. Pengumpulan bahan uji .................................................................

21

3. Pembuatan serbuk kulit Persea americana Mill. ..........................

21

4. Penetapan kadar air pada serbuk kering kulit Persea americana Mill. ................................................................................................

21

5. Pembuatan infusa kulit Persea americana Mill. ............................

22

6. Pembuatan larutan CCl4 .................................................................

22

7. Uji pendahuluan .............................................................................

22

8. Pengelompokan dan perlakuan hewan uji ......................................

25

9. Pembuatan serum ...........................................................................

25

10. Pengukuran aktivitas ALP .............................................................

26

F. Tata Cara Analisis Hasil ......................................................................

26

BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN .................................................

27

A. Determinasi Persea americana Mill. ...................................................

27

B. Penetapan Kadar Air ............................................................................

27

C. Penentuan Dosis Infusa ........................................................................

28

D. Penentuan Dosis Hepatotoksik Karbon Tetraklorida ...........................

28

E. Penentuan Waktu Pencuplikan Darah ..................................................

29

F. Penentuan Lama Pemejanan Infusa Kulit Persea americana Mill. ...... 31

xii


G. Hasil Uji Pengaruh Pemberian Infusa Kulit Persea americana Mill. ... 31 H. Kontrol Olive Oil Dosis 2 mL/kgBB .................................................... 33 I. Kontrol Karbon Tetraklorida Dosis 2 mL/kgBB .................................. 34 J. Kontrol Infusa Kulit Persea americana Mill. (IKPA) Dosis 1600 mg/kgBB............................................................................. 34 K. Kelompok Perlakuan Infusa Kulit Persea americana Mill. (IKPA) Dosis 362,81; 761,90; dan 1600 mg/kgBB pada Tikus Jantan Terinduksi Karbon Tetraklorida Dosis 2 ml/kgBB ............................... 35 L. Rangkuman Pembahasan ...................................................................... 38 BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN ................................................... 40 A. Kesimpulan............................................................................................ 40 B. Saran .....................................................................................................

40

DAFTAR PUSTAKA ...............................................................................

41

LAMPIRAN....................................................................................... ........

45

BIOGRAFI PENULIS ............................................................................... 61

xiii


DAFTAR TABEL

Tabel I.

Komposisi dan konsentrasi reagen ALP Abbott

Tabel II.

Rata-rata aktivitas serum tikus paska induksi karbon

20

tetraklorida dosis 2 mL/kgBB pada selang waktu 0, 24, dan 48 jam Tabel III.

29

Hasil uji Scheffe aktivitas serum tikus paska induksi karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB pada selang waktu 0, 24, dan 48 jam

Tabel IV.

Rata-rata ± SE aktivitas ALP serum tikus pada kelompok perlakuan

Tabel V.

30

32

Hasil uji Scheffe aktivitas ALP serum tikus pada kelompok perlakuan

33

xiv


DAFTAR GAMBAR

Gambar 1.

Struktur lobulus hati.

6

Gambar 2.

Metabolisme karbon tetraklorida di hati.

12

Gambar 3.

Diagram batang rata-rata aktivitas serum tikus paska induksi karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB pada selang waktu 0, 24, dan 48 jam.

Gambar 4.

30

Diagram batang rata-rata ± SE aktivitas ALP serum tikus pada kelompok perlakuan.

xv

32


DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1.

Foto buah Persea americana Mill.

45

Lampiran 2.

Foto serbuk kulit Persea americana Mill.

45

Lampiran 3.

Foto infusa kulit Persea americana Mill.

46

Lampiran 4.

Hasil uji determinasi Persea americana Mill.

47

Lampiran 5.

Hasil uji kadar air serbuk kering kulit Persea americana Mill.

48

Lampiran 6.

Surat Ethical Clearance

49

Lampiran 7.

Analisis statistik data aktivitas ALT uji pendahuluan waktu pencuplikan darah hewan uji setelah diinduksi karbon tetraklorida 2 ml/kgBB

50

Lampiran 8.

Analisis statistik data aktivitas ALP kelompok perlakuan

53

Lampiran 9.

Perhitungan penetapan peringkat dosis infusa kulit Persea americana Mill. pada kelompok perlakuan

57

Lampiran 10. Perhitungan konversi dosis untuk manusia

58

xvi


INTISARI Penilitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian jangka panjang infusa kulit Persea americana Mill. terhadap aktivitas alkali fosfatase (ALP) serum pada tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida serta mengetahui ada tidaknya kekerabatan antara dosis pemberian infusa kulit Persea americana Mill. dengan penurunan aktivitas ALP. Jenis penelitian bersifat eksperimental murni dengan rancangan acak lengkap pola searah. Penelitian ini menggunakan 30 tikus jantan galur Wistar, umur 2-3 bulan dengan berat badan 150-250 gram. Tikus dibagi secara acak dalam 6 kelompok sama banyak. Kelompok I (kontrol hepatotoksin) diberi karbon tetraklorida dan olive oil (1:1) dengan dosis 2 mL/kgBB secara i.p. Kelompok II (kontrol negatif) diberi olive oil sebanyak 2 mL/kgBB secara i.p. Kelompok III (kontrol sediaan) diberi infusa kulit Persea americana Mill. dosis 1600 mg/kgBB setiap hari secara berturut-turut selama 6 hari. Kelompok IV, V, dan VI (perlakuan) diberi infusa kulit Persea americana Mill. dengan seri dosis 362,81; 761,90; dan 1600 mg/kgBB selama 6 hari secara berturut-turut, kemudian setelah pemberian infusa dilakukan pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB. Pada jam ke-24 paska induksi karbon tetraklorida, semua kelompok diambil darahnya pada daerah sinus orbitalis mata untuk penetapan aktivitas ALP. Aktivitas ALP serum dianalisis secara statistik dengan One Way ANOVA. Berdasarkan hasil penelitian, infusa kulit Persea americana Mill. memberikan pengaruh terhadap penurunan aktivitas ALP serum tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida, serta tidak ada kekerabatan antara dosis pemberian infusa kulit Persea americana Mill. dengan penurunan aktivitas ALP serum tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida. Kata kunci: Persea americana Mill., infusa, karbon tetraklorida, ALP

xvii


ABSTRACT The aim of study research is to find out the influence of administer long term Persea americana Mill. peel infusion for the alkaline phosphatase (ALP) activity in rat induced by carbon tetrachloride and to find out the correlation between dose of Persea americana Mill. peel infusion and the decline in ALP activity. This study purely experimental research with randomized complete direct sampling design. This research used male rats of Wistar strain as subjects, aged 2-3 months, and 150-250 for its weights. 30 male rats were divided randomly into 6 groups. Group I (hepatotoxins controlled-group) was given carbon tetrachloride and olive oil (1:1) at a dose of 2 ml/kgBW in i.p. Group II (negative controlledgroup) was given olive oil at a dose of 2 ml/kgBW in i.p. Group III (infusion controlled-group) was given Persea americana Mill. peel infusion at a dose 1600 mg/kgBW for 6 days. Group IV, V and VI (treatment group) were given Persea americana Mill. peel infusion at a dose 362,81; 761,90; and 1600 mg/kgBW for 6 days, then at 7th day, 2 ml/kgBW of carbon tetrachloride was administered intraperitonially. At the 24th hours after carbon tetrachloride administration, blood samples from all group were taken through the eyes orbital sinus for measuring the ALP activity. The data were analyzed by one way ANOVA. The result of this research showed that Persea americana Mill. peel infusion had effect to decline ALP activity in rat induced by carbon tetrachloride, and there is no correlation between dose of Persea americana Mill. peel infusion and the decline of ALP activity in rat induced by carbon tetrachloride. Keywords: Persea americana Mill., infusion, carbon tetrachloride, ALP

xviii


BAB I PENGANTAR

A. Latar Belakang Hati merupakan organ yang berperan penting dalam metabolisme, seperti metabolisme karbohidrat, lemak, dan asam amino (Mader, 2010). Hati memiliki berat 1400 g dan terletak di kuadran kanan atas abdomen di ruang peritoneum tepat di bawah sisi kanan diafragma dan di bawah rongga dada. Hati menerima hampir 25% curah jantung, yaitu sekitar 1500 mL darah per menit (McPhee dan Ganong, 2010). Jaringan hati dapat rusak oleh infeksi dan zat beracun yang mengalir lewat aliran darah (Singh, 2008). Insiden kerusakan hati di Johannesburg, Afrika Selatan pada tahun 2004-2009 berkisar 10,7 kasus per tahun pada pasien yang menerima terapi antiretroviral (Mirira, 2011). Kerusakan hati ada berbagai jenis, beberapa di antaranya adalah steatosis, nekrosis, kolestasis, dan sirosis. Berdasar penelitian Lesmana, Lesmana, Pakasi, dan Krisnuhoni (2012), kasus steatosis di Indonesia terjadi pada 30% pasien hepatitis B. Prevalensi kolestasis pada sepsis neonatorum adalah 38,9% di RSUP Sanglah Denpasar (Karyana, Putra, dan Yanti, 2012), sedangkan prevalensi sirosis hati di Jawa dan Sumatera berkisar antara 3,6-8,4% (Mondrowinduro, 2014). Kerusakan membran sel dan organel di hati menyebabkan enzim-enzim hati intrasel masuk ke dalam pembuluh darah sehingga terjadi peningkatan kadar atau aktivitas. Enzim-enzim tersebut, yaitu aspartat dan alanin aminotransferase (AST dan ALT), alkali fosfatase (ALP), bilirubin total, dan albumin total. ALP

1


2

adalah protein yang ada di jaringan tubuh dan dapat ditemukan di hati, saluran empedu, dan tulang (Dudgale, 2013). Di hati, ALP mengkatalisasi hidrolisis ester fosfat organik dalam suasana basa. Aktivitas ALP dalam darah dapat meningkat melalui kebocoran kanalikuli dan membran plasma pada kerusakan sel hati (Pramushinta, 2008). Berdasarkan alasan tersebut, peneliti menggunakan aktivitas enzim ALP serum sebagai parameter kerusakan hati. Tanaman herbal di sekitar kita sering digunakan sebagai pengobatan, baik pencegahan atau penyembuhan, termasuk pengobatan penyakit hati. Persea americana Mill. adalah tanaman yang mengandung senyawa fenolik dan flavonoid sehingga dapat digunakan untuk pengobatan penyakit hati karena mampu menangkap radikal bebas yang dapat menyebabkan steatosis (Vinha, Moreira, and Barreira, 2013). Vinha, et al., (2013) melaporkan bahwa kandungan total fenolik dan flavonoid pada biji dan kulit Persea americana Mill. relatif hampir sama. Pada penelitian Putri (2013), dilaporkan bahwa pemberian jangka panjang infusa biji Persea americana Mill. mampu menurunkan aktivitas ALT-AST serum sebagai indikator kerusakan hati pada tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida 2 mL/kgBB. Berdasarkan dua penelitian tersebut, peneliti ingin melihat pengaruh pemberian jangka panjang infusa kulit Persea americana Mill. dengan dosis yang sama, dalam mencegah kerusakan hati dengan melihat penurunan aktivitas ALP serum tikus terinduksi karbon tetraklorida. Pada umumnya, masyarakat menggunakan herbal dalam pengobatan dengan metode perebusan. Oleh sebab itu, penelitian ini menggunakan ekstrak


3

infusa, karena metode tersebut merupakan metode yang paling mendekati kebiasaan masyarakat. Selain itu, senyawa yang dituju adalah senyawa fenolik dan flavonoid yang dapat diekstrak dengan air panas (Singh, Verma, and Singh, 2012).

1. Perumusan masalah Permasalahan yang diajukan dalam penelitian ini adalah: a. Apakah pemberian infusa kulit Persea americana Mill. mempunyai pengaruh terhadap penurunan aktivitas ALP serum pada tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida? b. Apakah ada kekerabatan antara dosis pemberian dengan penurunan aktivitas ALP serum tikus terinduksi karbon tetraklorida?

2. Keaslian penelitian Sebelumnya pernah dilakukan penelitian yang berhubungan dengan Persea americana Mill., diantaranya: a. Putri (2013) melaporkan bahwa pemberian jangka panjang infusa biji Persea americana Mill. mampu menurunkan aktivitas ALT-AST serum terinduksi karbon tetraklorida. b. Vinha, et al. (2013) melaporkan bahwa kandungan flavonoid dan fenolik pada biji dan kulit Persea americana Mill. relatif hampir sama.


4

c. Torres, Garbo, and Walde (2014) melaporkan bahwa ekstrak heksana dan etanol dari kulit Persea americana Mill. dapat digunakan sebagai larvasida alami untuk mengontrol vektor dengue. d. Servillon, Dingal, Lusica, Yamson, and Balonebro (2014) melaporkan bahwa ekstrak kulit Persea americana Mill. memiliki aktivitas antimikroba seperti antibiotik Vancomycin dan Cefepime. e. Carpena, Morcuende, Andrade, Kylli, and Estévez (2011) melaporkan bahwa kulit Persea americana Mill. mengandung fenolik, memiliki aktivitas antioksidan dan antimikroba, serta mampu menghambat oksidasi lipid dan protein pada daging roti. Berdasarkan penelusuran pustaka yang dilakukan, belum pernah ada penelitian mengenai pengaruh pemberian infusa kulit Persea americana Mill. terhadap aktivitas Alkali Fosfatase pada tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida.

3. Manfaat penelitian a. Manfaat teoritis Penelitian ini mampu memberikan informasi yang berhubungan dengan pengaruh pemberian infusa kulit Persea americana Mill. b. Manfaat praktis Hasil penelitian ini mampu memberikan informasi kepada masyarakat terkait kekerabatan antara dosis pemberian infusa kulit Persea americana


5

Mill. dengan penurunan aktivitas ALP sebagai salah satu pengobatan alternatif kerusakan hati.

B. Tujuan Penelitian 1. Tujuan umum Mengetahui pengaruh pemberian jangka panjang infusa kulit Persea americana Mill. terhadap penurunan aktivitas ALP serum pada tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida. 2. Tujuan khusus a. Mengetahui pengaruh pemberian jangka panjang infusa kulit Persea americana Mill. terhadap aktivitas ALP serum pada tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida. b. Mengetahui kekerabatan antara dosis pemberian infusa kulit Persea americana Mill. dengan penurunan aktivitas ALP serum pada tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida.


BAB II TINJAUAN PUSTAKA

A. Hati 1. Anatomi dan fisiologi hati Hati terletak di kuadran kanan atas abdomen di ruang peritoneum tepat di bawah sisi kanan diafragma dan di bawah rongga dada (McPhee dan Ganong, 2010). Hati pada orang dewasa memiliki berat 1400-1600 gram, yaitu sekitar 2.5% berat badan. Hati menerima darah dari vena porta (60% sampai 70%) dan arteri hepatica (30% sampai 40%) (Robbins dan Cotran, 2010).

Gambar 1. Struktur lobulus hati (McPhee dan Ganong, 2010). Hati terdiri dari dua jenis sel utama, yaitu hepatosit dan sel Kupffer (Gambar 1). Hepatosit aktif secara metabolis dan berasal dari epitel, sedangkan sel Kupffer merupakan sel makrofag yang berada di lapisan dalam sinusoid hepatik. Makrofag ini membunuh bakteri atau partikel asing yang masuk ke vena porta melalui dinding usus halus. Sel-sel tersebut tersusun membentuk

6


7

satuan anatomik yang disebut lobulus, ditunjang oleh kerangka retikulin di sekitar pembuluh vaskular yang disebut sinusoid. Antara sinusoid dengan lempeng hepatosit terdapat ruang yang mengandung cairan interstisium (tanpa eritrosit), tempat zat gizi dan produk sisa berdifusi untuk berpindah antara darah sirkulasi dan hati (Sacher and McPherson, 2002; Shier, Butler, and Lewis, 2006). Darah masuk ke hati melalui dua sumber, yaitu arteri dan vena. Arteri hepatika membawa darah arteri langsung dari aorta yang kaya oksigen dan membawa produk sisa metabolik dari seluruh tubuh. Vena porta mengalirkan darah yang sebelumnya mengalir melalui jaringan perifer limpa dan dari saluran cerna. Cabang arteri hepatika dan vena porta mencapai bagian perifer setiap lobulus melalui triad porta agar tercapai distribusi zat gizi yang maksimum ke hapatosit. Dengan demikian, darah sinusoid adalah campuran darah arteri dan vena. Vena sentral menerima semua darah dan mengambalikan ke sirkulasi sistemik melalui vena hepatika yang besar, yang mengalirkannya ke vena kava inferior. Dua pertiga darah yang beredar melalui hati berasal dari vena porta, sisanya dari aorta, sehingga darah sinusoid mengandung lebih sedikit oksigen dibanding darah yang masuk ke sebagian besar organ lain (McPhee dan Ganong, 2010; Sacher and McPherson, 2002). Empedu merupakan produk sekretori hati yang disekresikan oleh hepatosit ke tubulus-tubulus halus, yang disebut kanalikulus biliaris. Kanalikulus biliaris yang menyatu membentuk duktulus, yang menempati kerangka jaringan ikat dan menunjang vena porta serta cabang arteri hepatika.


8

Duktulus-duktulus empedu menyatu membentuk saluran empedu intrahati yang semakin besar, akhirnya membentuk duktus ekstrahepatik yang mengalirkan empedu dari hati ke kandung empedu (Sacher and McPherson, 2002). 2. Fungsi hati Hati berperan penting dalam aktivitas metabolik. Hati berfungsi untuk merombak sel darah merah yang tua; mengekskresi bilirubin sebagai produk perombakan hemoglobin di empedu; detoksifikasi racun; menyimpan Fe2+ dan vitamin A, D, E, dan K yang larut air; memproduksi protein plasma seperti albumin dan fibrinogen; menyimpan glukosa sebagai glikogen setelah makan; merombak glikogen menjadi glukosa untuk menjaga kadar glukosa dalam darah; memproduksi urea hasil perombakan asam amino; dan membantu dalam regulasi kolesterol dalam darah serta mengubahnya menjadi garam empedu (Mader, 2010). 3. Jenis Kerusakan Hati Toksin dapat merusak hati dengan berbagai jenis kerusakan seperti: a. Perlemakan hati (Steatosis). Perlemakan hati dapat timbul karena konsumsi berlebih dari alkohol atau racun dengan bahan kimia seperti CCl4, dimetilnitrosamin, polyhalogenated biphenyls, atau fosfor. Steatosis dikarakterisasi dengan penumpukan droplet trigliserida di sitoplasma, yang dapat mengganggu sintesis dan transport lipoprotein (trigliserida, fosfolipid, dan glikoprotein). Trigliserida dilepaskan di darah dalam bentuk VLDL. Namun apabila sintesis lipoprotein terganggu, maka lipopreotein tersebut tidak dapat disekresi ke dalam darah, dan terjadi penumpukan di sel hati


9

(Timbrell, 2009). Pemeriksaan yang dilakukan pada kerusakan ini adalah pemeriksaan

enzim

alanin

aminotransferase

(ALT),

aspartat

aminotransferase (AST), dan ALP (Dudgale, 2013). b. Kematian hepatosit (Necrosis). Penampakan morfologi nekrosis merupakan hasil denaturasi protein intraselular dan digesti enzimatik dari hepatosit yang mati, ditandai dengan peningkatan jumlah eosinofil di sitoplasma dan tampak homogen dibanding sel normal karena telah kehilangan glikogen (Robins dan Cotran, 2010). Keparahan sel ini bergantung pada senyawa toksik, dimana nekrosis bisa terjadi secara lokal maupun menyebar hingga seluruh bagian hati. Pemeriksaan yang dapat dilakukan pada kerusakan ini adalah pemeriksaan enzim ALT, AST, glutamate dehydrogenase (GLDH), ornithine-carbonyl-transferase, γ-glutamyl transpeptidase, dan sorbitol dehydrogenase (Timbrell, 2009). c. Kolestasis. Kolestasis merupakan kondisi patologis karena gangguan pembentukan

maupun

aliran

cairan

empedu,

yang

menyebabkan

penumpukan zat warna empedu pada parenkim hepatik. Pembentukan empedu terjadi tergantung pada transportasi ATP empedu ke lumen kanalikuli. Pada beberapa senyawa kimia tertentu yang dapat mempengaruhi permeabilitas membran dan mengganggu gradien Na+ dan K+, senyawa tersebut dapat menyebabkan terjadinya kolestasis. Gangguan pembentukan maupun aliran cairan empedu dapat terjadi akibat kerusakan kanal empedu baik ekstra maupun intra hepatik, atau gangguan sekresi cairan empedu hepatik. Karakteristik kolestatis hasil laboratorium ditunjukkan dengan


10

peningkatan serum ALP dan GGT, enzim yang ada pada selaput hepatosit dan sel epitel saluran empedu (Robins dan Cotran, 2010). d. Sirosis. Akibat adanya inflamasi pada sel hati, maka sel hati memperbaiki dengan membentuk bekas luka atau parut kecil yang disebut fibrosis. Adanya fibrosis menyebabkan fungsi hati terganggu. Padahal, semakin rusak hati, semakin banyak fibrosis yang terbentuk dan mulai menyatu, dan disebut sirosis. Area hati yang rusak akibat sirosis dapat menjadi permanen dan sikatriks sehingga darah tidak dapat mengalir dengan baik pada jaringan hati yang rusak dan hati mulai menciut, serta menjadi keras (Direktorat Bina Farmasi Komunitas dan Klinik, 2007). 4. ALP Alkaline phosphatase (ALP) adalah protein yang ada di jaringan tubuh, mengkatalisis hidrolisis ester fosfat organik dalam suasana basa (Pramushinta, 2008). Di mitokondria, ALP menghidrolisis ATP menjadi ADP dan Pi (Zhang, Buchet, Azzar, 2004). ALP kadar tinggi terdapat dalam sel-sel yang cepat membelah atau aktif secara metabolis, seperti di hati, saluran empedu, dan tulang (Sacher and McPherson, 2002). Di hati, ALP dapat ditemukan di mitokondria hepatosit dan membran plasma sel kanalikuli biliaris (Talwar and Srivastava, 2003). Untuk mengetahui aktivitas ALP dapat dilakukan pengukuran uji dengan darah. Nilai normal aktivitas ALP manusia adalah 53-128 U/L pada pria dan 42-98 U/L pada wanita (Dudgale, 2013). Peningkatan aktivitas ALP memiliki dua makna, yaitu peningkatan normal dan tidak normal. Peningkatan normal


11

biasanya terjadi pada wanita hamil dan anak-anak pada masa pertumbuhan. Peningkatan tidak normal dapat terjadi karena obstruksi biliaris, tumor tulang osteoblastik, osteomalasia, gangguan hati atau hepatitis, hiperparatiroid, leukimia, atau limfoma (Dudgale, 2013). Meningkatnya aktivitas ALP serum dari hati biasanya berkaitan dengan kolestasis, tetapi tidak sepenuhnya spesifik untuk kolestasis. Peningkatan kurang dari tiga kali lipat dapat dijumpai pada hampir semua jenis penyakit hati (Longo dan Fauci, 2013). Peningkatan aktivitas ALP 3-10x dari nilai normal menunjukkan adanya obstruksi biliaris ekstrahepatik oleh batu, oklusi inkomplit, duktus intrahepatik atau ekstrahepatik, sedangkan peningkatan lebih dari 10x nilai normal menunjukkan adanya sirosis biliaris primer,obstruksi duktus biliaris ekstrahepatik oleh tumor, infiltrasi granulomatosa atau neoplastik daerah porta, serta atresia kongenital duktus biliaris intrahepatik (Sacher and McPherson, 2002). Aktivitas enzim ALP digunakan sebagai indikator adanya gangguan sistem sekresi hati (Ernawati, 2006).

B. Karbon Tetraklorida Karbon tetraklorida merupakan cairan jernih yang mudah menguap, tidak berwarna, dengan aroma yang manis, berbau menyengat agak menyerupai kloroform, memiliki titik didih 76,8°C. Cairan yang mempunyai titik lebur -23°C ini dapat larut dalam etanol, aseton, naphtha; dapat dicampur dengan alkohol, benzen, kloroform, eter, karbon disulfida, petroleum eter, minyak; tetapi sangat sukar larut dalam air. Karbon tetraklorida yang memiliki berat molekul 153,8227


12

g/mol dapat mengalami dekomposisi menjadi bentuk klorin dan phosgene (Phillips, 2014). Karbon tetraklorida diproduksi dalam jumlah besar untuk cairan lemari pendingin dan propellants untuk kaleng aerosol, sebagai pelarut minyak, lemak, pernis, wax, karet dan resin, dan bahan pembersih. Sejak tahun 2002, penggunaan karbon tetraklorida sudah dilarang di masyarakat karena akan mempengaruhi organ hati, ginjal, dan sistem saraf pusat, baik paparan melalui inhalasi maupun oral, bila terpapar pada manusia. Namun penggunaan cairan ini masih dapat dijumpai di kawasan industri (McCarthy, 2000).

Gambar 2. Metabolisme karbon tetraklorida di hati (Timbrell, 2009). Hati adalah target utama akibat toksisitas karbon tetraklorida, karena karbon tetraklorida (CCl4) dimetabolisme oleh enzim CYP2E1 yang banyak terdapat di hati. Metabolisme karbon tetraklorida menghasilkan radikal


13

triklorometil (●CCl3) (Gambar 2). Senyawa radikal ini akan mengalami beberapa reaksi. Radikal triklorometil akan mengikat lemak mikrosomal dan protein, kemudian bereaksi langsung dengan membran fosfolipid dan kolesterol yang akan menimbulkan efek toksik; dengan atom hidrogen akan membentuk klorofom; dengan oksigen akan membentuk peroksidasi lipid yang toksik; dan dengan oksigen akan membentuk radikal peroksi triklorometil (Timbrell, 2009). Pembentukan peroksidasi lipid di retikulum endoplasma (RE) akan menyebabkan membran mengalami autokatalitis. Kurang dari 30 menit setelah pemaparan, terjadi pemecahan lemak tak jenuh yang memberikan senyawa karbonil, seperti 4hydroxynenal dan hydroxyalkenal yang dapat menghambat sintesis enzim dan protein plasma. Selama 2 jam setelah pemaparan CCl4 terjadi pembengkakan RE halus serta pemisahan ribosom dari RE halus (Kumar, Abbas, Fausto, and Mitchell, 2007). Pemejanan

karbon

tetraklorida

dapat

mengakibatkan

trigliserida

menumpuk di hepatosit dan tampak sebagai droplet lipid. Lipid dalam hepatosit ini menghambat sintesis protein, dan mengakibatkan berkurangnya produksi lipoprotein kompleks. Lipoprotein kompleks bertanggung jawab terhadap transport lipid keluar dari hepatosit. Gangguan ini mengakibatkan lipid terakumulasi dalam hepatosit dan terjadi steatosis (Timbrell, 2009). Selain itu, terjadi pula kerusakan pada mitokondria, penurunan jumlah ATP sebagai hasil kegagalan transport ion dan pembengkakan sel yang progresif; kerusakan membran plasma akibat produksi aldehid lemak dari peroksidasi lipid di RE. Pada akhirnya, toksisitas CCl4 akan menyebabkan terjadinya influks kalsium dan


14

kematian sel (Kumar, et al., 2007). Peningkatan aktivitas ALP di darah dapat terjadi akibat adanya kebocoran membran plasma sel (Sacher and McPherson, 2002) serta pembengkakan sel hepatosit akibat paparan CCl4 yang menyebabkan kanalikuli biliaris terdesak dan mengalami penyempitan sehingga terjadi kolestasis (Gupta, 2012).

C. Persea americana Mill. 1. Taksonomi Kerajaan

: Plantae (Tumbuhan)

Sub kerajaan

: Tracheobionta (Tumbuhan berpembuluh)

Super divisi

: Spermatophyta (Tumbuhan berbiji)

Divisi

: Magnoliophyta (Tumbuhan berbunga)

Kelas

: Magnoliopsida (Berkeping dua atau dikotil)

Sub kelas

: Magnoliidae

Bangsa

: Laurales

Keluarga

: Lauraceae

Genus

: Persea

Varietas

: P. americana Mill. (USDA, 2014)

2. Nama lain Butter fruit, Avocado, Avocado-pear, Alligator pear (Inggris); Avocat, Avocatier, Zaboka, Zabelbok (Perancis); Avocadobirne (Jerman); Avokad, Adpukat (Indonesia); Apukado, Avokado (Malaysia); Pagua, Aguacate (Spanyol); Awokado (Thailand) (World Agroforestry Centre, 2002).


15

3. Morfologi Tanaman P. americana Mill. dapat tumbuh di iklim tropis maupun subtropis, daunnya berwarna hijau (Idris, Ndukwe, Gimba, 2009), tinggi tanaman P. americana Mill. mencapai 9-20 m (World Agroforestry Centre, 2002). Daun P. americana Mill. memiliki panjang 7-41 cm dengan berbagai variasi bentuk (elips, oval, lanset), berwarna merah saat muda dan menjadi kasar serta berwarna hijau tua saat matang. Bunganya berwarna hijau kekuningan dan berdiameter 1-1,3 cm (World Agroforestry Centre, 2002). Kulit buah P. americana Mill. berwarna hijau dan berdaging tebal berwarna kuning (Leite, Brito, Cordeliro, Brilhante, Sidrim, Bertini, et al., 2009), lembut dan bertekstur seperti krim (Alhassan, Sule, Atiku, Wudil, Abubakar, Mohammed, 2012). 4. Kandungan kimia Dalam penelitiannya, Vinha, et al. (2013) menemukan bahwa kulit Persea americana Mill. memiliki kandungan fenolik, flavonoid, karotenoid, vitamin C, dan vitamin E. 5. Khasiat dan kegunaan Daun Persea americana Mill. dapat dimanfaatkan sebagai diuretik, astringen, mengobati batuk, pelancar menstruasi, emollient, dan antibakteri (Hariana, 2007). Persea americana Mill. juga banyak digunakan dalam Ayurveda serta berbagai pengobatan seperti monorrhagia, hipertensi, bronkitis, dan diare (Yasir, Das, and Kharya, 2010). Ekstrak heksana dan etanol dari kulit Persea americana Mill. dapat digunakan sebagai larvasida (Torres, et al.,


16

2014); ekstrak kulit Persea americana Mill. memiliki aktivitas antimikroba (Servillon, et al., 2014); serta mampu menghambat oksidasi lipid dan protein pada daging roti (Carpena, et al., 2011).

D. Landasan Teori Hati adalah kelenjar terbesar pada tubuh manusia dengan berat 14001600 gram pada orang dewasa (Robbins dan Cotran, 2010), berperan penting dalam aktivitas metabolik, seperti merombak sel darah merah yang tua, mengekskresi bilirubin, detoksifikasi racun, dan memproduksi protein plasma (Mader, 2010). Aktivitas ALP di atas nilai normal menunjukkan adanya penyakit tertentu, seperti gangguan hati (Dudgale, 2013), dan dapat digunakan sebagai indikator adanya gangguan sistem sekresi hati (Ernawati, 2006). Karbon

tetraklorida

merupakan

senyawa

model

yang

mampu

menginduksi kerusakan hati. Karbon tetraklorida yang dimetabolisme oleh CYP2E1 akan menghasilkan radikal bebas triklorometil. Radikal bebas tersebut akan mengalami berbagai reaksi. Salah satu reaksinya mengakibatkan terjadinya peroksidasi lipid yang dapat menghambat sintesis protein. Sintesis protein yang terhambat

mengakibatkan

produksi

lipoprotein

menurun

dan

terjadi

penghambatan transport lipid keluar dari hepatosit. Penumpukan lipid dalam hepatosit inilah yang disebut steatosis. Peroksidasi lipid juga dapat mengganggu homeostasis Ca2+ sehingga menyebabkan kematian sel (Timbrell, 2009). Pada penelitian yang dilakukan Putri (2013), pemberian jangka panjang infusa biji Persea americana Mill. mampu memberikan efek hepatoprotektif


17

dengan melihat penurunan aktivitas serum ALT-AST pada tikus terinduksi karbon tetraklorida 2 mL/kgBB. selain itu, mengacu pada penelitian Vinha, et al., (2013), kandungan total fenolik dan flavonoid pada biji dan kulit Persea americana Mill. relatif hampir sama. Berdasarkan hal tersebut, maka dilakukan penelitian yang nantinya akan diketahui pengaruh pemberian jangka panjang infusa kulit Persea americana Mill. dalam mencegah kerusakan hati dengan melihat penurunan aktivitas ALP serum tikus terinduksi karbon tetraklorida.

E. Hipotesis Pemberian jangka panjang infusa kulit Persea americana Mill. dapat menurunkan aktivitas ALP pada tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida.


BAB III METODE PENELITIAN

A. Jenis dan Rancangan Penelitian Penelitian ini termasuk jenis penelitian eksperimental murni dengan rancangan acak lengkap pola searah.

B. Variabel dan Definisi Operasional Variabel-variabel yang digunakan dalam penelitian ini adalah: 1. Variabel utama a.

Variabel bebas. Variasi dosis pemberian infusa kulit Persea americana tikus jantan galur wistar terinduksi karbon tetraklorida.

b.

Variabel tergantung. Penurunan aktivitas enzim alkali fosfatase tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida setelah pemberian infusa kulit Persea americana selama 6 hari.

2. Variabel pengacau a.

Variabel pengacau terkendali. Variabel pengacau terkendali dalam penelitian ini adalah kondisi hewan uji yang digunakan, yaitu tikus jantan galur Wistar yang berumur 2-3 bulan, dengan berat badan antara 150-250 gram; cara pemberian hepatotoksin secara intraperitoneal; cara pemberian infusa kulit Persea americana secara per oral; frekuensi waktu pemberian infusa kulit Persea americana Mill. (satu kali sehari selama 6 hari berturut-turut dengan waktu pemberian yang sama); dan bahan uji berupa kulit Persea americana Mill.

18


b.

19

Variabel pengacau tak terkendali. Variabel pengacau terkendali dalam penelitian ini adalah kondisi patologis dari tikus jantan galur Wistar yang digunakan sebagai hewan uji.

3. Definisi operasional a. Infusa kulit Persea americana Mill. Infusa serbuk kering kulit Persea americana Mill. didapatkan dengan cara menginfundasi 8 gram serbuk kering kulit Persea americana Mill. dalam 100,0 ml air pada suhu 90°C selama 15 menit. b. Pemberian jangka panjang. Didefinisikan sebagai pemberian infusa kulit Persea americana Mill. satu kali sehari selama enam hari berturut-turut dalam waktu pemberian yang sama. c. Penurunan aktivitas ALP. Didefinisikan sebagai penurunan aktivitas ALP serum tikus dosis perlakuan yang dibandingkan dengan aktivitas ALP serum tikus kontrol hepatotoksin.

C. Bahan Penelitian 1. Bahan utama a. Hewan uji yang digunakan dalam penelitian ini adalah tikus jantan galur Wistar yang berumur 2-3 bulan dengan berat badan 150-250 gram yang diperoleh dari Laboratorium Imono Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.


20

b. Bahan uji yang digunakan adalah kulit Persea americana Mill. yang diperoleh dari salah satu depot es di Yogyakarta selama bulan Juni-Juli 2014. 2. Bahan kimia a. Bahan hepatotoksin yang digunakan adalah karbon tetraklorida yang diperoleh dari Laboratorium Kimia Analisis Fakultas Farmasi Universitas Sanata

Dharma Yogyakarta. b. Pelarut hepatotoksin digunakan larutan olive oil Bertoli® yang diperoleh dari Supermarket Mirota Kampus, Yogyakarta. c. Kontrol negatif yang digunakan adalah olive oil Bertoli®. d. Pelarut untuk infusa digunakan aquadest yang diperoleh dari Laboratorium Kimia Analisis Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. e. Reagen serum ALP Komposisi dan konsentrasi dari reagen ALP Abbott yang digunakan adalah sebagai berikut. Tabel I. Komposisi dan konsentrasi reagen ALP Abbott Komposisi Reagen 1 2-Amino-2-methylpropanol Magnesium Zinc Sulfate HEDTA Reagen 2

Konsentrasi

4-Nitrophenyl Phospate

>171.6 mmol/L

>1.2 mol/L >7.2 mmol/L >3.6 mmol/L >7.2 mmol/L

D. Alat dan Instrumen Penelitian Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini antara lain oven, mesin penyerbuk, ayakan, panci enamel, termometer, stopwatch, beaker glass, gelas


21

ukur, cawan porselen, penangas air, kain flannel, tabung reaksi, labu ukur, pipet tetes, batang pengaduk (Pyrex Iwaki Glass®), timbangan analitik Mettler Toledo®, sentrifuge Centurion Scientific®, vortex Genie Wilten®, spuit injeksi per oral dan syringe 3 cc Terumo®, pipa kapiler, tabung Eppendorf, dan moisture balance.

E. Tata Cara Penelitian 1. Determinasi Persea americana Mill. Determinasi dilakukan dengan mencocokkan Persea americana Mill. yang diperoleh dari salah satu depot es di Yogyakarta dengan buku acuan. 2. Pengumpulan bahan uji Bahan uji yang digunakan adalah kulit Persea americana Mill. yang masih segar dan tidak busuk selama bulan Juni-Juli 2014. 3. Pembuatan serbuk kulit Persea americana Mill. Kulit Persea americana Mill. dicuci bersih dan dipisahkan dari kulitnya. Setelah itu, kulit dipotong-potong lalu dikeringkan dalam oven pada suhu 50°C selama 24 jam. Setelah kulit benar-benar kering, kulit dihaluskan dan diayak dengan ayakan nomor 40 agar kandungan fitokimia dalam kulit Persea americana Mill. lebih mudah terekstrak karena luas permukaan serbuk lebih besar. 4. Penetapan kadar air pada serbuk kering kulit Persea americana Mill. Serbuk kering kulit Persea americana Mill. yang sudah diayak, dimasukkan ke dalam alat moisture balance sebanyak ± 5 g kemudian


22

diratakan. Bobot serbuk kering kulit tersebut ditetapkan sebagai bobot sebelum pemanasan (bobot A), setelah itu dipanaskan pada suhu 110°C. Serbuk kering kulit Persea americana Mill. yang sudah dipanaskan ditimbang kembali dan dihitung sebagai bobot setelah pemanasan (bobot B). Kemudian dilakukan perhitungan terhadap selisih bobot A terhadap bobot B yang merupakan kadar air serbuk kulit Persea americana Mill. 5. Pembuatan infusa serbuk kulit Persea americana Mill. Serbuk kering kulit Persea americana Mill. ditimbang 8,0 g dan dimasukkan ke dalam 16,0 ml pelarut aquadest dan kemudian ditambahkan lagi aquadest sebanyak 100,0 ml, kemudian dipanaskan pada suhu 90°C dan dijaga tetap dalam suhu tersebut selama 15 menit. Waktu 15 menit dihitung ketika suhu campuran mencapai 90°C. Setelah 15 menit, campuran tersebut diambil dan diperas menggunakan kain flanel kemudian tambahkan air panas secukupnya melalui ampas hingga diperoleh volume infusa kulit Persea americana Mill. yang dikehendaki. 6. Pembuatan larutan karbon tetraklorida Larutan karbon tetraklorida dibuat dalam konsentrasi 50%, dengan cara melarutkan 50 ml karbon tetraklorida ke dalam olive oil sebanyak 50 ml berdasarkan hasil penelitian Janakat dan Al-Merie (2002). 7. Uji pendahuluan a. Penetapan dosis hepatotoksik karbon tetraklorida. Pemilihan dosis ini dilakukan untuk mengetahui pada dosis berapa karbon tetraklorida mampu menyebabkan kerusakan hati tikus yang ditandai dengan peningkatan ALT-


23

AST dalam serum darah paling tinggi. Dosis hepatotoksik ini mengacu pada penelitian Janakat dan Al-Merie (2002) dan orientasi melalui induksi hewan uji dengan karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB secara i.p. b. Penetapan dosis infusa kulit Persea americana Mill. Berdasar

penelitian

yang dilakukan Putri (2013), konsentrasi infusa biji Persea americana Mill. yang mampu memberikan efek hepatoprotektif adalah 8 g/100 mL. Selain itu, mengacu pada penelitian Vinha, et al. (2013), kandungan flavonoid pada kulit dan biji Persea americana Mill. relatif sama. Maka penelitian ini menggunakan dosis seperti pada penelitian yang dilakukan Putri. Peringkat dosis didasarkan pada pengobatan yang biasa digunakan pada masyarakat yaitu ± 2 sendok makan (4 g) serbuk kulit Persea americana Mill. yang direbus dengan 250 ml air. Maka dosis perlakuan yang digunakan adalah 4 g/70 kgBB manusia. Konversi dosis tikus (manusia 70 kg ke tikus 200g) = 0,018. Dosis untuk 200 g tikus = 0,018 x 4g = 0,72 g/200 g BB = 360 mg/kgBB sebagai dosis rendah. Konsentrasi maksimal infusa kulit Persea americana Mill. yang dapat dibuat adalah 8 g/ 100 ml, dengan asumsi berat badan hewan uji maksimal adalah 250 g, dan volume maksimal pemberian infusa secara p.o = 5 ml. Berdasarkan perhitungan, D x 250 g = 8 g/ 100ml x 5 ml D = 1600 mg/kgBB, dosis ini disebut dosis tinggi perlakuan.


24

Untuk mendapatkan dosis tengah perlakuan, terlebih dahulu dihitung faktor kelipatan dari dosis rendah dan dosis tinggi yang sudah diperoleh. Perhitungan faktor kelipatan adalah sebagai berikut :

𝑛 −1

𝑑𝑜𝑠𝑖𝑠 𝑡𝑖𝑛𝑔𝑔𝑖 𝑑𝑜𝑠𝑖𝑠 𝑟𝑒𝑛𝑑𝑎ℎ

N = Jumlah peringkat dosis yang digunakan. Penelitian ini menggunakan 3 peringkat dosis maka n = 3, sehingga perhitungannya sebagai berikut : 3−1

1600 360

= 2,1 (faktor kelipatan)

Berdasarkan faktor kelipatan yang diperoleh maka dosis tengah dan dosis rendah perlakuan ditentukan sebagai berikut, D = 1600 mg/ kgBB : 2,1 = 761,90 mg/ kgBB

(dosis tengah)

D = 761,90 mg/ kgBB : 2,1 = 362,81 mg/ kgBB

(dosis rendah)

c. Penetapan waktu pencuplikan darah Berdasarkan penelitian Janakat dan Al-Merie (2002), waktu optimum kenaikan serum ALT-AST akibat pemejanan karbon tetraklorida 2 ml/kgBB adalah pada jam ke-24. Penetapan waktu pencuplikan ini ditentukan dengan orientasi tiga kelompok perlakuan waktu, yaitu pada jam ke–0, 24, dan 48 setelah pemejanan karbon tetraklorida. Setiap kelompok perlakuan terdiri dari 5 hewan uji yang pengambilan darahnya dilakukan melalui pembuluh sinus orbitalis mata kemudian diukur aktivitas ALT-AST.


25

8. Pengelompokan dan perlakuan hewan uji Digunakan 30 ekor tikus jantan galur Wistar sebagai hewan uji yang dibagi secara acak dalam 6 kelompok perlakuan masing-masing sejumlah lima ekor tikus. a. Kelompok I (kontrol hepatotoksin) diberi larutan karbon tetraklorida : olive oil (1:1) dosis 2 ml/kgBB secara i.p. b. Kelompok II (kontrol negatif) diberi olive oil dosis 2 ml/kgBB secara i.p. c. Kelompok III (kontrol IKPA) diberi infusa kulit P. americana Mill. dosis 1600 mg/kgBB secara p.o. selama 6 hari berturut-turut. d. Kelompok IV (IKPA dosis 362,81 mg/kgBB) diberi infusa kulit P. americana Mill. secara p.o. sekali sehari selama 6 hari berturut-turut. e. Kelompok V (IKPA dosis 761,90 mg/kgBB) diberi infusa kulit P. americana Mill. secara p.o. sekali sehari selama 6 hari berturut-turut. f. Kelompok VI (IKPA dosis 1600 mg/kgBB) diberi infusa kulit P. americana Mill. secara p.o. sekali sehari selama 6 hari berturut-turut. Pada hari ketujuh kelompok IV-VI diberi larutan karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB secara intraperitonial. Setelah 24 jam paska induksi karbon tetraklorida, tikus diambil darahnya melalui sinus orbitalis mata, kemudian diukur aktivitas ALP. 9.

Pembuatan serum Darah diambil melalui sinus orbitalis mata hewan uji dan ditampung dalam tabung Eppendorf dan didiamkan selama 15 menit, lalu disentrifugasi


26

selama 15 menit dengan kecepatan 5000 rpm, lalu dipisahkan bagian supernatannya. 10. Pengukuran aktivitas ALP Penetapan aktivitas ALP ditetapkan berdasarkan reaksi enzimatik menggunakan reagen kit Abbott® ALP yang terdiri dari reagen 1 (2-Amino-2methylpropanol > 1.2 mol/L, Magnesium > 7.2 mmol/L, Zinc Sulfate > 3.6 mmol/L, dan HEDTA > 7.2 mmol/L) dan reagen 2 (4-Nitrophenyl Phosphate > 171.6 mmol/L). Prosedur penetapan aktivitas ALP berdasarkan prosedur kerja dari Abbott®. Pengukuran aktivitas ALP ini dilakukan di Laboratorium Parahita, Yogyakarta.

F. Tata Cara Analisis Hasil Data aktivitas ALP diuji dengan Kolmogorov-Smirnov untuk mengetahui distribusi data tiap kelompok hewan uji. Apabila didapat distribusi data yang normal maka analisis dilanjutkan dengan analisis pola searah (One Way ANOVA) dengan taraf kepercayaan 95% untuk mengetahui perbedaan masing-masing kelompok. Kemudian dilanjutkan dengan uji Scheffe untuk melihat perbedaan masing-masing antar kelompok bermakna (signifikan) (p<0,05) atau tidak bermakna (tidak signifikan) (p>0,05). Namun bila didapatkan distribusi tidak normal, maka dilakukan analisis dengan uji Kruskal Wallis untuk mengetahui perbedaan aktivitas ALP antar kelompok. Setelah itu dilanjutkan dengan uji Mann Whitney untuk mengetahui kebermaknaan perbedaan tiap kelompok.


BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian jangka panjang infusa kulit Persea americana Mill. terhadap aktivitas ALP serum dan mengetahui kekerabatan antara dosis pemberian infusa kulit Persea americana Mill. dengan penurunan aktivitas ALP yang dihasilkan pada tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida. Hasil penelitian yang akan dibahas adalah determinasi Persea americana Mill., penetapan kadar air serbuk kulit Persea americana Mill., dan pemeriksaan aktivitas ALP serum.

A. Determinasi Persea americana Mill. Determinasi bertujuan untuk memastikan bahwa bahan yang digunakan untuk penelitian memang benar bahan yang dimaksud, di mana pada penelitian ini bahan yang digunakan adalah kulit Persea americana Mill. Determinasi dilakukan secara makroskopis dengan mencocokkan Persea americana Mill. yang diperoleh dari salah satu depot es di Yogyakarta dengan buku acuan. Hasil determinasi yang diperoleh adalah kulit yang digunakan benar kulit Persea americana Mill.

B. Penetapan Kadar Air Penetapan kadar air dari serbuk kulit Persea americana Mill. bertujuan untuk mengetahui serbuk tersebut telah memenuhi persyaratan serbuk yang baik,

27


28

yaitu kurang dari 10% (Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan, 1995). Penetapan kadar air serbuk kulit Persea americana Mill. ditetapkan di LPPT Universitas Gajah Mada Yogyakarta dengan metode gravimetri. Hasil penetapan kadar air sebuk kulit Persea americana Mill. memiliki kadar sebesar 7,1%, hal ini menunjukkan bahwa kadar air serbuk kulit Persea americana Mill. memenuhi persyaratan serbuk yang baik.

C. Penentuan Dosis Infusa Berdasar penelitian yang dilakukan Putri (2013), konsentrasi infusa biji Persea americana Mill. yang mampu memberikan efek hepatoprotektif adalah 8 g/100 mL. Selain itu, mengacu pada penelitian Vinha, et al. (2013), kandungan flavonoid pada kulit dan biji Persea americana Mill. tidak berbeda bermakna. Maka penelitian ini menggunakan konsentrasi dosis seperti pada penelitian yang dilakukan Putri, dengan dosis pemberian infusa kulit Persea americana Mill. 1600 mg/kgBB sebagai dosis tinggi; 761,90 mg/kgBB sebagai dosis tengah; dan 362,81 mg/ kgBB sebagai dosis rendah.

D. Penentuan Dosis Hepatotoksik Karbon Tetraklorida Penentuan dosis hepatotoksik karbon tetraklorida bertujuan untuk mengetahui dosis karbon tetraklorida yang mampu menyebabkan kerusakan hati tikus dengan tanda peningkatan aktivitas ALP dalam serum darah. Dosis hepatotoksik ini mengacu pada penelitian Janakat dan Al-Merie (2002) dan hasil orientasi melalui induksi hewan uji dengan karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB


29

secara i.p. Di mana dosis tersebut menyebabkan kerusakan ringan pada hati berupa steatosis (Timbrell, 2009). Pada saat orientasi, peneliti menggunakan ALT sebagai parameter kerusakan hati akibat toksisitas karbon tetraklorida. Hal ini mengacu pada penelitian Vohra dan Gupta (2013) bahwa kerusakan hati akibat paparan karbon tetraklorida mengakibatkan peningkatan aktivitas ALT yang sebanding dengan peningkatan ALP.

E. Penentuan Waktu Pencuplikan Darah Penentuan waktu pencuplikan darah hewan uji bertujuan untuk mengetahui waktu optimal karbon tetraklorida 2 mL/kgBB yang mampu memberikan efek kerusakan hati maksimal berdasar kenaikan aktivitas serum ALT-AST tertinggi pada tikus. Karbon tetraklorida 2 mL/kgBB diinduksikan pada tikus, kemudian tikus diambil darahnya dengan selang waktu 0, 24, dan 48 jam. Tabel II. Rata-rata aktivitas serum tikus paska induksi karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB pada selang waktu 0, 24, dan 48 jam (n=3) Selang waktu (jam) Rata-rata aktivitas serum ALT ± SE (mg/dL) 0 72,3 ± 4,5 24 217,3 ± 2,1 48 90,3 ± 2,9


30

Gambar 3. Diagram batang rata-rata aktivitas serum tikus paska induksi karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB pada selang waktu 0, 24, dan 48 jam.

Uji Kolmogorov-Smirnov pada aktivitas serum ALT tikus jam ke-0, 24, dan 48 menunjukkan signifikansi 0, 999 (p>0,05); 0,944 (p>0,05); dan 1,000 (p>0,05). Hasil analisis pola searah One Way ANOVA menunjukkan signifikansi 0,515 (p>0,05), sehingga dapat disimpulkan bahwa variansi data homogen. Kemudian data dianalisis dengan uji Scheffe untuk mengetahui kebermaknaan perbedaan antar kelompok tersebut. Tabel III. Hasil uji Scheffe aktivitas serum tikus paska induksi karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB pada selang waktu 0, 24, dan 48 jam Selang waktu (jam) 0 24 48 B TB 0 B B 24 TB B 48 Keterangan: B= Berbeda bermakna (p0,05); TB= Berbeda tidak bermakna (p>0,05). Pada tabel II, nampak bahwa aktivitas serum ALT tertinggi terjadi pada pencuplikan darah jam ke-24 (217,3 ± 2,1 mg/dL). Hasil uji Scheffe pun


31

menunjukkan bahwa peningkatan aktivitas serum ALT jam ke-24 yang terjadi signifikan dan berbeda bermakna dibandingkan dengan jam ke-0 dan 48. Hal ini menunjukkan bahwa terjadi kerusakan hati dengan parameter peningkatan aktivitas ALT serum tersebut. Pada jam ke-48, aktivitas ALT serum tikus mengalami penurunan (90,3 ± 2,9 mg/dL) yang secara statistik berbeda tidak bermakna terhadap jam ke-0. Hal ini menunjukkan bahwa pada jam ke-48 fungsi hati kembali normal. Berdasarkan analisis tersebut, maka ditetapkan waktu pencuplikan darah aktivitas serum ALT paska induksi karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB adalah jam ke-24.

F. Penentuan Lama Pemejanan Infusa Kulit Persea americana Mill. Penentuan lama pemejanan infusa kulit Persea americana Mill. berdasarkan penelitian Putri (2013) yang berjudul “Efek Hepatoprotektif Infusa Biji Persea americana Mill. terhadap Aktivitas ALT-AST Serum pada Tikus Terinduksi Karbon Tetraklorida”, yaitu pemejanan ekstrak selama 6 hari berturutturut, kemudian pada hari ketujuh hewan uji diinduksi karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB.

G. Hasil Uji Pengaruh Pemberian Infusa Kulit Persea americana Mill. Penelitian ini diawali dengan pemejanan infusa kulit Persea americana Mill. pada hewan uji satu kali sehari selama 6 hari, kemudian diinduksi karbon tetraklorida untuk melihat pengaruh pemberiannya. Data aktivitas ALP serum dianalisis dengan

One Way ANOVA untuk melihat homogenitas dan


32

signifikansinya. Kemudian data kebermaknaan perbedaan antar perlakuan diuji dengan uji Scheffe (tabel V). Tabel IV. Rata-rata ± SE aktivitas ALP serum tikus pada kelompok perlakuan Rerata Kelompok Perlakuan aktivitas ALP ± SE (mg/dL) Kontrol CCl4 dosis 2 mL/kgBB 440,2 ± 37,7 I Kontrol olive oil dosis 2 mL/kgBB 274,2 ± 25,7 II IKPA 1600 mg/kgBB 242,6 ± 14,5 III IKPA 362,81 mg/kgBB + CCl4 dosis 167,0 ± 10,4 IV 2 mL/kgBB IKPA 761,90 mg/kgBB + CCl4 dosis 236,4 ± 17,1 V 2 mL/kgBB IKPA 1600 mg/kgBB + CCl4 dosis 2 504,4 ± 49,4 VI mL/kgBB Keterangan: IKPA= Infusa Kulit Persea americana Mill.

Gambar 4. Diagram batang rata-rata ± SE aktivitas ALP serum tikus pada kelompok perlakuan.


33

Tabel V. Hasil uji Scheffe aktivitas ALP serum tikus pada kelompok perlakuan Kontrol IKPA IKPA IKPA Kelompok Kontrol Kontrol hepato362,81 + 761,90 + 1600 + Perlakuan negatif IKPA toksin CCl4 CCl4 CCl4 Kontrol B B B B TB hepatotoksin Kontrol B TB TB TB B negatif Kontrol B TB TB TB B IKPA IKPA 362,81 B TB TB TB B + CCl4 IKPA 761,90 B TB TB TB B + CCl4 IKPA 1600 + TB B B B B CCl4 Keterangan: IKPA= Infusa kulit Persea americana Mill.; B= Berbeda bermakna (p0,05); TB= Berbeda tidak bermakna (p>0,05). H. Kontrol Olive Oil Dosis 2 mL/kgBB Pengukuran aktivitas ALP pada kontrol olive oil bertujuan untuk menegaskan bahwa pelarut (olive oil) yang digunakan tidak memberikan pengaruh hepatotoksik terhadap serum tikus. Penggunaan dosis pada olive oil sama dengan dosis CCl4 agar hasilnya nanti dapat dibandingkan, sehingga diperoleh pembuktian bahwa peningkatan aktivitas ALP pada serum tikus murni karena CCl4. Berdasarkan penelitian Rosari (2013) dan Putri (2013), penggunaan olive oil dosis 2 mL/kgBB tidak memberikan efek hepatotoksik berupa peningkatan aktivitas ALT. Adapun Vohra dan Gupta (2013) melaporkan bahwa peningkatan aktivitas ALT sebanding dengan peningkatan aktivitas ALP. Berdasarkan penelitian tersebut, maka peneliti menggunakan olive oil sebagai pelarut hepatotoksin. Aktivitas ALP serum kontrol olive oil 274,2 ± 25,7 mg/dL dapat digunakan sebagai acuan normal.


34

I. Kontrol Karbon Tetraklorida Dosis 2 mL/kgBB Pengukuran aktivitas ALP pada kontrol karbon tetraklorida 2 mL/kgBB bertujuan untuk mengetahui pengaruh hepatotoksik senyawa model. Panjaitan, Handharyani, Chairul, Masriani, Zakiah, dan Manalu (2007) melaporkan bahwa pemberian karbon tetraklorida 1,0 mL/kgBB menyebabkan peningkatan aktivitas ALP serum tikus 1,6 kali dari nilai normal dan hasil uji histopatologi menunjukkan bahwa efek hepatotoksik yang ditimbulkan berupa steatosis. Aktivitas ALP serum tikus kelompok kontrol hepatotoksin yang diberi perlakuan CCl4 2 mL/kgBB (440,2 ± 37,7 mg/dL) bila dibandingkan dengan kelompok kontrol negatif yang diberi perlakuan olive oil 2 mL/kgBB (274,2 ± 25,7 mg/dL) pada uji Scheffe menunjukkan adanya perbedaan yang bermakna dan terjadi peningkatan aktivitas ALP serum tikus 1,6 kali (Tabel V). Peningkatan aktivitas ALP pada kontrol hepatotoksin ini membuktikan bahwa karbon tetraklorida menyebabkan kerusakan pada hati.

J. Kontrol Infusa Kulit Persea americana Mill. (IKPA) Dosis 1600 mg/kgBB Pengukuran aktivitas ALP pada kontrol IKPA bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian IKPA terhadap hati tanpa pemberian toksin karbon tetraklorida, apakah memberikan efek hepatotoksik atau tidak. Dosis yang digunakan dalam kontrol ini adalah dosis tertinggi, karena diharapkan dosis ini mampu menggambarkan kondisi hati dengan pemberian dosis di bawahnya.


35

Aktivitas ALP serum tikus pada kelompok kontrol IKPA (242,6 ± 14,5 mg/dL) bila dibandingkan dengan kelompok kontrol negatif (274,2 ± 25,7 mg/dL) pada uji statistik menunjukkan perbedaan yang tidak bermakna. Namun apabila dibandingkan dengan kelompok kontrol hepatotoksin, terdapat perbedaan yang bermakna. Hal ini membuktikan bahwa pemberian IKPA dosis 1600 mg/kgBB tidak menimbulkan peningkatan aktivitas ALP serum, yang mengindikasikan tidak terjadi kerusakan di hati tikus.

K. Kelompok Perlakuan Infusa Kulit Persea americana Mill. (IKPA) Dosis 362,81; 761,90; dan 1600 mg/kgBB pada Tikus Jantan Terinduksi Karbon Tetraklorida Dosis 2 mL/kgBB Penurunan aktivitas ALP serum tikus akibat pemberian IKPA berbagai dosis perlu dievaluasi untuk mengetahui pengaruh hepatoprotektif sediaan tersebut. Evaluasi ini dilakukan pada hari kedelapan setelah hewan uji diberi IKPA selama enam hari berturut-turut, kemudian pada hari ketujuh hewan uji diinduksi karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB. Kelompok IKPA 362,81 mg/kgBB yang memiliki aktivitas ALP 167,0 ± 10,4 mg/dL dibandingkan dengan kelompok kontrol hepatotoksin yang memiliki aktivitas ALP 440,2 ± 37,7 mg/dL menunjukkan adanya perbedaan yang bermakna (Tabel V). Namun apabila kelompok IKPA 362,81 mg/kgBB dibandingkan dengan kelompok kontrol negatif yang memiliki aktivitas ALP 274,2 ± 25,7 mg/dL, terlihat adanya perbedaan yang tidak bermakna (Tabel V). Hal ini membuktikan bahwa IKPA dosis rendah mempunyai efek dalam


36

menurunkan aktivitas ALP serum tikus terinduksi karbon tetraklorida, yang mana aktivitas ALP setara seperti keadaan normal. Kelompok IKPA 761,90 mg/kgBB yang memiliki aktivitas ALP 236,4 ± 17,1 mg/dL dibandingkan dengan kelompok kontrol hepatotoksin yang memiliki aktivitas ALP 440,2 ± 37,7 mg/dL menunjukkan adanya perbedaan yang bermakna (Tabel V). Namun apabila kelompok IKPA 761,90 mg/kgBB dibandingkan dengan kelompok kontrol negatif yang memiliki aktivitas ALP 274,2 ± 25,7 mg/dL, terlihat adanya perbedaan yang tidak bermakna (Tabel V). Aktivitas ALP serum tikus pada kelompok IKPA 761,90 mg/kgBB setara dengan kelompok kontrol negatif, yaitu seperti keadaan normal. Hal ini membuktikan bahwa IKPA dosis tengah mempunyai efek dalam menurunkan aktivitas ALP serum tikus terinduksi karbon tetraklorida. Kelompok IKPA 1600 mg/kgBB yang memiliki aktivitas ALP 504,4 ± 49,4 mg/dL dibandingkan dengan kelompok kontrol hepatotoksin yang memiliki aktivitas ALP 440,2 ± 37,7 mg/dL menunjukkan adanya perbedaan yang tidak bermakna (Tabel V). Aktivitas ALP serum tikus pada kelompok IKPA 1600 mg/kgBB setara dengan kelompok kontrol hepatotoksin. Namun apabila kelompok IKPA 1600 mg/kgBB dibandingkan dengan kelompok kontrol negatif yang memiliki aktivitas ALP 274,2 ± 25,7 mg/dL, terlihat adanya perbedaan yang bermakna (Tabel V). Hal ini membuktikan bahwa IKPA dosis tinggi mempunyai pengaruh terhadap peningkatan aktivitas ALP serum tikus. Penyebab peningkatan aktivitas ALP ini dimungkinkan karena terjadinya reaksi autooksidasi, di mana konsentrasi tinggi dari flavonoid sebagai antioksidan justru akan menjadi


37

prooksidan yang memiliki karakter sama persis dengan radikal bebas (Carocho and Ferreira, 2013). Perbandingan aktivitas ALP serum tikus dari ketiga dosis IKPA tersebut menunjukkan bahwa dosis 362,81 dan 761,90 mg/dL memberikan pengaruh dalam menurunkan aktivitas ALP serum tikus terinduksi karbon tetraklorida. Namun pada IKPA dosis 1600 mg/dL, aktivitas ALP serum tikus setara dengan kelompok kontrol hepatotoksin, yang bermakna IKPA dosis tinggi mempunyai efek meningkatkan aktivitas ALP serum tikus. Pada tabel IV atau gambar 4, terlihat bahwa dengan pemberian IKPA dosis rendah, penurunan aktivitas ALP serum yang dihasilkan justru lebih besar bila dibandingkan dengan pemberian IKPA dosis tinggi. Hasil uji Scheffe menunjukkan bahwa perlakuan IKPA dosis rendah memberikan perbedaan yang tidak bermakna bila dibandingkan dengan dosis tengah, sedangkan dosis tengah memberikan perbedaan yang bermakna bila dibandingkan dengan dosis tinggi. Hal ini menunjukkan semakin tinggi dosis tidak mempengaruhi penurunan aktibitas ALP, sehingga tidak ada kekerabatan antara dosis pemberian IKPA dengan penurunan aktivitas ALP serum yang dihasilkan.


38

L. Rangkuman Pembahasan Hasil penelitian menunjukkan bahwa pemberian infusa kulit Persea americana Mill. dosis rendah dan tengah mampu menurunkan aktivitas ALP serum tikus dibandingkan dengan kelompok kontrol hepatotoksin, artinya dosis tersebut mampu memberikan pengaruh perubahan biokimiawi terhadap kerusakan hati akibat senyawa model karbon tetraklorida. Data aktivitas ALP serum tikus menunjukkan bahwa dengan pemberian IKPA dosis rendah, penurunan aktivitas ALP serum yang dihasilkan justru lebih besar bila dibandingkan dengan Pemberian IKPA dosis tinggi. Hasil uji Scheffe menunjukkan bahwa perlakuan IKPA dosis rendah memberikan perbedaan yang tidak bermakna bila dibandingkan dengan dosis tengah, sedangkan dosis tengah memberikan perbedaan yang bermakna bila dibandingkan dengan dosis tinggi. Hal ini menunjukkan semakin tinggi dosis tidak mempengaruhi penurunan aktibitas ALP, sehingga tidak ada kekerabatan antara dosis pemberian IKPA dengan penurunan aktivitas ALP serum yang dihasilkan. Senyawa model pada penelitian ini akan membentuk radikal bebas triklorometil (●CCl3) akibat metabolisme oleh CYP2E1 pada retikulum endoplasma. Dengan adanya oksigen, radikal bebas triklorometil akan membentuk radikal peroksi triklorometil (Panjaitan, dkk., 2007). Radikal peroksi triklorometil yang lebih reaktif kemudian menyerang lipid membran RE dan terjadi peroksidasi lipid serta akan dihasilkan senyawa 4-hydroxyalkenal dan hydroxyalkenal. Senyawa tersebut dapat menghambat sintesis protein dan enzim glukosa-6fosfatase. Sintesis protein yang terhambat mengakibatkan produksi lipoprotein


39

menurun, sehingga transport lipid keluar dari hepatosit terhambat dan terjadilah steatosis (Timbrell, 2009). Kandungan flavonoid sebagai antioksidan dalam infusa kulit Persea americana Mill. mampu menurunkan aktivitas ALP serum tikus. Mekanisme yang mungkin terjadi adalah flavonoid menangkap radikal triklorometil sehingga tidak terbentuk senyawa toksik dan akhirnya RE hati tidak rusak. Namun belum diketahui pasti mekanisme aksi senyawa tersebut bekerja di komponen sel yang mana. Untuk lebih meyakinkan mekanisme ini, maka dapat dilakukan penelitian khusus tentang mekanisme aksi infusa kulit Persea americana Mill. sebagai hepatoprotektif secara in vitro. Selain itu, untuk memastikan letak kerusakan yang ditimbulkan CCl4 maka perlu dilakukan penelitian lanjutan yang melihat parameter selain ALP, seperti bilirubin.


BAB V KESIMPULAN DAN SARAN

A. Kesimpulan Berdasarkan hasil dan analisis statistik, maka dapat disimpulkan: 1. Pemberian jangka panjang infusa kulit Persea americana Mill. memberikan pengaruh terhadap penurunan aktivitas ALP serum tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida. 2. Tidak ada kekerabatan antara dosis pemberian infusa kulit Persea americana Mill. dengan penurunan aktivitas ALP serum tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida.

B. Saran Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut tentang: 1. Mekanisme aksi infusa kulit Persea americana Mill. dalam memberikan proteksi pada hati. 2. Pengaruh pemberian IKPA terhadap parameter kerusakan hati yang lain, seperti bilirubin.

40


41

DAFTAR PUSTAKA Alhassan, A. J., Sule, M. S., Atiku, M. K., Wudil, A. M., Abubakar, H., Mohammed, S. A., 2012, Effects of Aqueous Avocado Pear (P. americana) Seed Extract on Alloxan Induced Diabetes Rats, Greener Journal of Medical Sciences, 2 (1), 5-11. Carocho, M., and Ferreira, I.C.F.R., 2013, A Review on Antioxidants, Prooxidants and Related Controversy: Natural and Synthetic Compounds, Screening and Analysis Methodologies and Future Perspectives, Food and Chemical Toxicology, 51, 15-25. Carpena, J.G.R., Morcuende, D., Andrade, M.J., Kylli, P., and Estévez, M., 2011, Avocado (Persea americana Mill.) Phenolics, In Vitro Antioxidant and Antimicrobial Activities, and Inhibition of Lipid and Protein Oxidation in Porcine Patties, Journal Agricultural and Food Chemistry, 59 (10), 56255635. Direktorat Bina Farmasi Komunitas dan Klinik, 2007, Pharmaceutical Care untuk Penyakit Hati, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta. Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan, 1995, Farmakope indonesia, Edisi IV, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, hal. 46. Dudgale, D. C., 2013, ALP-Blood Test, Medline Plus, http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/ency/article/003470.htm, diakses tanggal 14 April 2014. Ernawati, M. D. W., 2006, Pengaruh Paparan Udara Halotan dengan Dosis Subanestesi terhadap Gangguan Hati Mencit, Repository Universitas Andalas, http://repository.unand.ac.id/869/1/4_md_wiwik.doc, diakses tanggal 4 Mei 2014. Gupta, R.C., 2012, Veterinary Toxicology Basic and Clinical Principles, 2nd Edition, Elsevier, New York, p. 259. Hariana, H. A., 2007, Tumbuhan Obat dan Khasiatnya, Seri 1, Penebar Swadaya, Depok, hal. 10-11. Idris, S., Ndukwe, G. I., Gimba, C. E., 2009, Preliminary Phytochemical Screening and Antimicrobial Activity of Seed Extracts of P. americana (Avocado Pear), Bayero Journal of Pure and Applied Sciences, 2(1), 173176.


42

Janakat, S., dan Al-Merie, H., 2002, Optimization of the dose and route of injection, and characterization of the time course of carbon tetrachlorideinduced hepatotoxicity in the rat, J. Pharm. Tox. Methods, 48, 41-44. Karyana, I.P.G., Putra, I.G.N.S., dan Yanti, N.P.V.K., 2012, Kolestasis pada Sepsis Neonatorum di RSUP Sanglah Denpasar, Sari Pediatri, 14 (4), 211217. Kumar, V., Abbas, A.K., Fausto, N., and Mitchell, R.N., 2007, Robbins Basic Pathology, 8th Edition, Elsevier Inc., New York, pp. 13-19. Leite, J. J. G., Brito, E. H. S., Cordeliro, R. A., Brilhante, R. S. N., Sidrim, J. J. C., Bertini, L. M., et al., 2009, Chemical Composition, Toxicity and Larvicidal and Antifungal Activities of P. americana (Avocado) Seeds Extracts, Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical, 42(2), 110-113. Lesmana, L.A., Lesmana, C.R., Pakasi, L.S., and Krisnuhoni, E., 2012, Prevalence of Hepatic Steatosis in Chronic Hepatitis B Patients and Its Association with Disease Severity, Acta Medica Indonesia, 44, 35-39. Longo, D.L., dan Fauci, A.S., 2013, Harrison: Gastroenterologi dan Hepatologi, EGC, Jakarta, hal. 299-302. Mader, S. S., 2010, Human Biology, 11th ed., McGraw-Hill, New York, pp. 166168. McCarthy, G., 2000, Carbon Tetrachloride, http://www.epa.gov/ttnatw01/hlthef/carbonte.html, diakses tanggal 26 November 2014. McPhee, S.J., dan Ganong, W.F., 2010, Patofisiologi Penyakit, EGC, Jakarta, hal. 421. Mirira, M., 2011, Insidence of and Risk Factor for Hepatotoxicity Following Antiretroviral Initiation in Patients Attending Themba Lethu Clinic, Johannesburg, Thesis, iv-v, University of The Witwatersrand, Johannesburg. Mondrowinduro, P., 2014, Disfungsi Diastolik Vebtrikel Kiri pada Pasien Sirosis Hati di Rumah Sakit Cipto Mangunkusumo: Prevalensi dan Hubungannya dengan Derajat Disfungsi Hati, Thesis, Universitas Indonesia, Jakarta. Panjaitan, R.G.D., Handharyani, E., Chairul, Masriani, Zakiah, Z., dan Manalu, W., 2007, Pengaruh Pemberian Karbon Tetraklorida Terhadap Fungsi Hati dan Ginjal Tikus, Makara, Kesehatan, 11 (1), 11-16.


43

Phillips, S.J., 2014, Carbon Tetrachloride, http://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/carbon_tetrachloride#section= Use-and-Manufacturing, diakses tanggal 26 November 2014. Pramushinta, A.A., 2008, Pengaruh Pemberian Teh Hijau terhadap Kadar Enzim Alkali Fosfatase Serum Tikus Wistar yang Diberi Kloramfenikol, Skripsi, 310, Universitas Diponegoro, Semarang. Putri, N. L. P. D. P., 2013, Efek Hepatoprotektif Infusa Biji Persea americana Mill. terhadap Aktivitas ALT-AST Serum pada Tikus Terinduksi Karbon Tetraklorida, Skripsi, 53, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Robbins dan Cotran, 2010, Pathologic Basis of Disease, 8th ed., Elsevier Inc., New York, pp. 834-889. Rosari, A., 2013, Efek Hepatoprotektif Jangka Pendek Dekok Biji Persea americana Mill. terhadap Aktivitas ALT-AST pada Tikus Terinduksi Karbon Tetraklorida, Skripsi, xvii, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Sacher, R.A., and McPherson, R.A., 2002, Tinjauan Klinis Hasil Pemeriksaan Laboratorium, Edisi 11, EGC, Jakarta, hal. 360-384. Servillon, R.J.T., Dingal, M.C.C., Lusica, M.C., Yamson, M.K.A., and Balonebro, M.J.B., 2014, Antibacterial Activity of Persea americana (Avocado) Peel Extract Against Staphylococcis aureus, Psedomonas aeruginosa, Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus (MRSA) and Multi Drug Resistant Clinical Isolates, Iamure Multidisciplinary Research, http://iamure.com/publication/index.php/ijscl/article/view/702, diakses tanggal 30 Agustus 2014. Shier, D., Butler, J., and Lewis, R., 2006, Hole’s Essentials of Human Anatomy & Physiology, 9th ed., McGraw-Hill, New York, pp. 399-402. Singh, I., 2008, Textbook of Anatomy with Colour Atlas, Jaypee Brothers, Panama, p. 695. Singh, R., Verma, P.K., and Singh, G., 2012, Total Phenolic, Flavonoids, and Tannin Contents in Different Extracts of Artemisia absinthium, Journal of Intercultural Ethnopharmacology, 1 (2), 101-104. Talwar, G.P., and Srivastava, L.M., 2003, The Textbook of Biochemistry and Human Biology, 3rd Edition, New Delhi, p. 268. Timbrell, J.A., 2009, Principles of Biochemical Toxicology, 4th Edition, Informa Healthcare, New York, pp. 195-201, 308-311.


44

Torres, R.C, Garbo, A.G., and Walde, R.Z.M.L, 2014, Larvicidal Activity of Persea americana Mill. Against Aedes aegypti, Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine, 4 (12), 960-964. USDA, 2014, P. americana Mill. – Avocado, https://plants.usda.gov/core/profile?symbol=PEAM3#tabImages, diakses tanggal 21 April 2014. World Agroforestry Centre, 2002, Botanic Nomenclature to Agroforestry trees: Persea americana, http://www.worldagroforestry.org/treedb2/speciesprofile.php?Spid=1274, diakses tanggal 1 Mei 2014. Vinha, A.F., Moreira, J., and Barreira, V.P., 2013, Physicochemical Parameters, Phytochemical Composition and Antioxidant Activity of the Algarvian Avocado (Persea americana Mill.), Journal of Agricultural Science, 5 (12), 100-109. Vohra, P., and Gupta, N.K., 2013, Carbon Tetrachloride Induced Toxicity in Liver of Albino Mice, Indian Journal of Applied Research, 3 (9), 273-275. Yasir, M., Das, S., and Kharya, M.D., 2010, The Phytochemical and Pharmacological Profile of P. americana Mill., Pharmacognosy Review, 4, 77-84. Zhang, L., Buchet, R., and Azzar, G., 2004, Phosphate Binding in the Active Site of Alkaline Phosphatase and the Interaction of 2-Nitroacetophenone with Alkaline Phosphatase-Induced Small Structural Changes, Biophysical Journal, 86 (6):3873-3881.


45

LAMPIRAN


Lampiran 1. Foto buah Persea americana Mill.

Lampiran 2. Foto serbuk kulit Persea americana Mill.

46


Lampiran 3. Foto infusa kulit Persea americana Mill.

47


Lampiran 4. Hasil uji determinasi Persea americana Mill.

48


49

Lampiran 5. Hasil uji kadar air serbuk kering kulit Persea americana Mill.


Lampiran 6. Surat Ethical Clearance

50


51

Lampiran 7. Analisis statistik data aktivitas ALT uji pendahuluan waktu pencuplikan darah hewan uji setelah diinduksi karbon tetraklorida 2 ml/kgBB

NPar Tests Descriptives

N

Mean

Std. Deviation

Minimum

Maximum

ALT 0

3

72.3333

10.06645

63.00

83.00

ALT 24

3

2.1733E2

4.72582

212.00

221.00

ALT 48

3

90.3333

6.50641

84.00

97.00

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test ALT_0 N

ALT_24

ALT_48

3

3

3

72.3333

2.1733E2

90.3333

1.00664E1

4.72582

6.50641

Absolute

.219

.304

.187

Positive

.219

.219

.187

Negative

-.189

-.304

-.181

Kolmogorov-Smirnov Z

.380

.527

.324

Asymp. Sig. (2-tailed)

.999

.944

1.000

Normal Parameters

a

Mean Std. Deviation

Most Extreme Differences

a. Test distribution is Normal.

Oneway Descriptives 95% Confidence Interval for Mean Std. N

Mean

Deviation

Std. Error

Lower

Upper

Bound

Bound

Minimum Maximum

ALT 0

3

72.3333

10.06645

5.81187

47.3269

97.3398

63.00

83.00

ALT 24

3

2.1733E2

4.72582

2.72845

205.5938

229.0729

212.00

221.00

ALT 48

3

90.3333

6.50641

3.75648

74.1705

106.4961

84.00

97.00

Total

9

1.2667E2

68.74773

22.91591

73.8225

179.5108

63.00

221.00


52

Test of Homogeneity of Variances ALT Levene Statistic

df1

.742

df2 2

Sig. 6

.515

ANOVA ALT Sum of Squares Between Groups Within Groups Total

df

Mean Square

F

37478.000

2

18739.000

332.000

6

55.333

37810.000

8

338.657

Sig. .000

Post Hoc Tests Multiple Comparisons ALT Scheffe 95% Confidence Interval

Mean (I) Perlakuan (J) Perlakuan Difference (I-J) Std. Error ALT 0

ALT 24

ALT 48

Sig.

Lower Bound

Upper Bound

ALT 24

-145.00000

*

6.07362

.000

-164.4797

-125.5203

ALT 48

-18.00000

6.07362

.067

-37.4797

1.4797

ALT 0

145.00000

*

6.07362

.000

125.5203

164.4797

ALT 48

127.00000

*

6.07362

.000

107.5203

146.4797

18.00000

6.07362

.067

-1.4797

37.4797

*

6.07362

.000

-146.4797

-107.5203

ALT 0 ALT 24

-127.00000

*. The mean difference is significant at the 0.05 level.


Homogeneous Subsets ALT Scheffe Subset for alpha = 0.05

Perlakua n

N

1

2

ALT 0

3

72.3333

ALT 48

3

90.3333

ALT 24

3

Sig.

217.3333 .067

1.000

Means for groups in homogeneous subsets are displayed.

53


54

Lampiran 8. Analisis statistik data aktivitas ALP kelompok perlakuan

NPar Tests Descriptive Statistics N

Mean

Std. Deviation

Minimum

Maximum

kontrol_hepatotoksin

5

4.4020E2

84.36054

359.00

579.00

kontrol_negatif

5

2.7420E2

57.41690

198.00

351.00

kontrol_IKPA

5

2.4260E2

32.40062

206.00

282.00

IKPA_362.81

5

1.6700E2

23.32381

132.00

196.00

IKPA_761.90

5

2.3640E2

38.13529

195.00

292.00

IKPA_1600

5

5.0440E2

110.40063

386.00

665.00

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test kontrol_he kontrol_ne kontrol_IKP IKPA_362. IKPA_761. patotoksin N Normal

Mean

gatif

A

81

90

IKPA_1600

5

5

5

5

5

5

440.2000

274.2000

242.6000

167.0000

236.4000

504.4000

84.36054

57.41690

32.40062

23.32381

38.13529 110.40063

a

Parameters

Std. Deviation

Most

Absolute

.291

.175

.185

.198

.187

.198

Extreme

Positive

.291

.165

.185

.182

.187

.198

Negative

-.168

-.175

-.183

-.198

-.139

-.163

Kolmogorov-Smirnov Z

.652

.390

.414

.444

.419

.442

Asymp. Sig. (2-tailed)

.789

.998

.995

.989

.995

.990

Differences

a. Test distribution is Normal.


55

Oneway Descriptives ALP 95% Confidence Interval for Mean Std. N

Mean

Deviation

Std. Error

Lower

Upper

Bound

Bound

Minimum Maximum

kontrol 5

4.4020E2

84.36054

37.72718 335.4526 544.9474

359.00

579.00

5

2.7420E2

57.41690

25.67762 202.9075 345.4925

198.00

351.00

kontrol IKPA

5

2.4260E2

32.40062

14.49000 202.3693 282.8307

206.00

282.00

IKPA 362.81

5

1.6700E2

23.32381

10.43072 138.0397 195.9603

132.00

196.00

IKPA 761.90

5

2.3640E2

38.13529

17.05462 189.0488 283.7512

195.00

292.00

IKPA 1600

5

5.0440E2 110.40063

49.37266 367.3195 641.4805

386.00

665.00

30

3.1080E2 135.79254

24.79221 260.0942 361.5058

132.00

665.00

hepatotoksin kontrol negatif

Total

Test of Homogeneity of Variances ALP Levene Statistic 2.052

df1

df2 5

Sig. 24

.107

ANOVA ALP Sum of Squares

df

Mean Square

Between Groups

432149.600

5

86429.920

Within Groups

102599.200

24

4274.967

Total

534748.800

29

F 20.218

Sig. .000


56

Post Hoc Tests Multiple Comparisons ALP Scheffe 95% Confidence Interval Mean

Bound

Bound

(J) Perlakuan

kontrol

kontrol negatif

166.00000

*

41.35199

.023

16.3123

315.6877

kontrol IKPA

197.60000

*

41.35199

.005

47.9123

347.2877

IKPA 362.81

273.20000

*

41.35199

.000

123.5123

422.8877

IKPA 761.90

203.80000

*

41.35199

.003

54.1123

353.4877

-64.20000

41.35199

.786 -213.8877

85.4877

*

41.35199

.023 -315.6877

-16.3123

kontrol IKPA

31.60000

41.35199

.987 -118.0877

181.2877

IKPA 362.81

107.20000

41.35199

.280

-42.4877

256.8877

IKPA 761.90

37.80000

41.35199

.972 -111.8877

187.4877

-230.20000

*

41.35199

.001 -379.8877

-80.5123

-197.60000

*

41.35199

.005 -347.2877

-47.9123

-31.60000

41.35199

.987 -181.2877

118.0877

IKPA 362.81

75.60000

41.35199

.651

-74.0877

225.2877

IKPA 761.90

6.20000

41.35199

1.000 -143.4877

155.8877

-261.80000

*

41.35199

.000 -411.4877

-112.1123

-273.20000

*

41.35199

.000 -422.8877

-123.5123

-107.20000

41.35199

.280 -256.8877

42.4877

kontrol IKPA

-75.60000

41.35199

.651 -225.2877

74.0877

IKPA 761.90

-69.40000

41.35199

.727 -219.0877

80.2877

*

41.35199

.000 -487.0877

-187.7123

IKPA 1600 kontrol negatif kontrol hepatotoksin

IKPA 1600 kontrol IKPA

kontrol hepatotoksin kontrol negatif

IKPA 1600 IKPA 362.81


IKPA 1600

-166.00000

-337.40000

Sig.

Upper

(I) Perlakuan

hepatotoksin

Difference (I-J) Std. Error

Lower


IKPA 761.90

kontrol

*

41.35199

.003 -353.4877

-54.1123

-37.80000

41.35199

.972 -187.4877

111.8877

kontrol IKPA

-6.20000

41.35199

1.000 -155.8877

143.4877

IKPA 362.81

69.40000

41.35199

.727

-80.2877

219.0877

*

41.35199

.000 -417.6877

-118.3123

64.20000

41.35199

.786

-85.4877

213.8877

-203.80000

hepatotoksin kontrol negatif

IKPA 1600 IKPA 1600

-268.00000


230.20000

*

41.35199

.001

80.5123

379.8877

kontrol IKPA

261.80000

*

41.35199

.000

112.1123

411.4877

IKPA 362.81

337.40000

*

41.35199

.000

187.7123

487.0877

IKPA 761.90

268.00000

*

41.35199

.000

118.3123

417.6877

*. The mean difference is significant at the 0.05 level.

Homogeneous Subsets ALP Scheffe Subset for alpha = 0.05 Perlakuan

N

1

2

IKPA 362.81

5

167.0000

IKPA 761.90

5

236.4000

kontrol IKPA

5

242.6000

kontrol negatif

5

274.2000

kontrol hepatotoksin

5

440.2000

IKPA 1600

5

504.4000

Sig.

57

.280

Means for groups in homogeneous subsets are displayed.

.786


58

Lampiran 9. Perhitungan penetapan peringkat dosis infusa kulit Persea americana Mill. pada kelompok perlakuan Penetapan peringkat dosis : 

Konsentrasi infusa kulit Persea americana Mill. sebesar 8% (Putri, 2013)



Bobot tikus maksimal yaitu 250 g



Volume pemberian infusa secara per oral maksimal pada tikus yaitu 5 mL Penentuan dosis rendah infusa kulit Persea americana Mill. didasarkan pada penggunaan rebusan kulit Persea americana Mill. di masyarakat sebesar 4 g/hari.



Dosis manusia 70 kgBB = 4 g



Konversi dosis manusia 70 kg ke tikus 200 g = 0,018 Dosis untuk tikus 200 gBB = 0,018 x 4 g = 0,72 g/200 gBB = 360 mg/kgBB




59

Penetapan dosis tertinggi infusa kulit Persea americana Mill. D X BB = C X V dosis x berat badan tikus = konsentrasi infusa x volume pemberian D x 250 g = 8g/100 mL x 5 mL Dosis = 1600 mg/kgBB



Penetapan dosis tengah di dasarkan pada faktor kelipatan dari kedua dosis, dengan nilai n = 3 Faktor kelipatan =

𝑛 −1

2

𝑑𝑜𝑠𝑖𝑠 𝑡𝑖𝑛𝑔𝑔𝑖 𝑑𝑜𝑠𝑖𝑠 𝑟𝑒𝑛𝑑𝑎 ℎ

1600 360

= 2,1 Dosis tengah = 1600 mg/kgBB : 2,1 = 761,9 mg/kgBB Dosis rendah = 761,9 mg/kgBB : 2,1 = 362,8 mg/kgBB

Lampiran 10. Perhitungan konversi dosis untuk manusia 

Konversi tikus 200 g ke manusia 70 kgBB = 56,0



Penetapan Dosis Infusa Kulit Persea americana Mill. : Dosis manusia = dosis tikus 200 gBB x angka konversi ke manusia 1. Infusa Kulit Persea americana Mill. dosis 362,8 mg/kgBB = 362,8 mg/1000 gBB = 72,6 mg/200gBB tikus x 56,0 = 4056,6 mg/70kgBB = 58,08 mg/kgBB manusia


2. Infusa Kulit Persea americana Mill. dosis 761,9 mg/kgBB = 761,9 mg/1000 gBB = 152,38 mg/200gBB tikus x 56,0 = 8533,28 mg/70kgBB = 121,9 mg/kgBB manusia 3. Infusa Kulit Persea americana Mill. dosis 1600 mg/kgBB = 1600 mg/1000 gBB = 320 mg/200gBB tikus x 56,0 = 17920 mg/70kgBB = 256 mg/kgBB manusia

60


61

BIOGRAFI PENULIS Penulis skripsi berjudul “Pengaruh Pemberian Jangka Panjang Infusa Kulit Persea americana Mill. terhadap Aktivitas Alkali Fosfatase pada Tikus Jantan Terinduksi Karbon Tetraklorida” memiliki nama lengkap Maria Desita Putri. Penulis dilahirkan di Banjarnegara pada tanggal 13 Desember 1992, merupakan putri kedua dari tiga bersaudara dalam keluarga pasangan Aloysius Dominikus Sutarto dan Rosalia Catharina Surajini. Penulis mengawali pendidikan di TK YPPPK Klampok, Banjarnegara (1997-1999), kemudian melanjutkan pendidikan tingkat Sekolah Dasar di SD YPPPK Klampok, Banjarnegara (1999-2005). Pendidikan Sekolah Menengah Pertama ditempuh oleh penulis di SMP Santo Borromeus Purbalingga (2005-2008), kemudian melanjutkan pendidikan Sekolah Menengah Atas di SMA Negeri 1 Purbalingga (2008-2011). Penulis kemudian melanjutkan pendidikan sarjana di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma pada tahun 2011. Semasa kuliah, penulis aktif dalam berbagai kepanitiaan dan unit kegiatan mahasiswa baik di dalam maupun di luar kampus. Penulis pernah menjadi anggota divisi Dana dan Usaha Pharmacy Performance (2011), anggota divisi Pendamping Kelompok INSADHA (2012), Sekretaris Aksi Hari Kesehatan dan Lingkungan Hidup (2012), Sekretaris Forum Komunikasi Mahasiswa Katolik Keuskupan Purwokerto (FKMKKP) periode 2012-2013, koordinator divisi Publikasi, Dekorasi, dan Dokumentasi Sambut Sahabat FKMKKP (2013), anggota divisi Koreografi PSM “Cantus Firmus” periode 2013-2014. Penulis pernah menjadi asisten praktikum Biokimia (2013). Selain itu, penulis merupakan salah satu peserta PIMNAS XXV di Yogyakarta (2012), pemenang Lomba Paduan Suara bagi Mahasiswa PTS seKopertis Wilayah V Yogyakarta (2013), serta pemenang Lomba PESPARAWI Mahasiswa Tingkat Nasional XIII di Jakarta (2014).

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Recommend Documents