PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

PLAGIAT PLAGIAT MERUPAKAN MERUPAKAN TINDAKAN TINDAKAN TIDAK TIDAK TERPUJI TERPUJI

VALIDASI METODE SPEKTROFOTOMETRI VISIBEL MENGGUNAKAN PEREAKSI o-FENANTROLINA PADA PENETAPAN KADAR HIDROKUINON DALAM KRIM SIMULASI

SKRIPSI Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) Program Studi Ilmu Farmasi

The image cannot be display ed. Y our computer may not hav e enough me mory to open the image, or the image m ay hav e been corrupted. Re start y our computer, and then open the file again. If the red x still appears, y ou may hav e to delete the image and then insert it again.

Oleh: Leo Christi Agustoo NIM : 048114041

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2008


VALIDASI METODE SPEKTROFOTOMETRI VISIBEL MENGGUNAKAN PEREAKSI o-FENANTROLINA PADA PENETAPAN KADAR HIDROKUINON DALAM KRIM SIMULASI

SKRIPSI Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) Program Studi Ilmu Farmasi

The image cannot be display ed. Y our computer may not hav e enough me mory to open the image, or the image m ay hav e been corrupted. Re start y our computer, and then open the file again. If the red x still appears, y ou may hav e to delete the image and then insert it again.

Oleh: Leo Christi Agustoo NIM : 048114041

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2008 ii


iii


iv


HALAMAN PERSEMBAHAN

Karya ini kupersembahkan kepada : YESUS KRISTUS Papa, Mama, Mami, Hani, Theo, Sanak Saudara, Teman

v

teman dan Almamaterku


LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS

Yang bertanda tangan dibawah ini, saya mahasiswa Universitas Sanata Dharma: Nama

: Leo Christi Agustoo

Nomor Mahasiswa

: 048114041

Demi pengembangan ilmu pengetahuan, saya memberikan kepada Perpustakaan Universitas Sanata Dharma karya ilmiah saya berjudul: “Validasi Metode Spektrofotometri Visibel menggunakan Pereaksi oFenantrolina pada Penetapan Kadar Hidrokuinon dalam Krim Simulasi” beserta perangkat yang diperlukan (bila ada). Dengan demikian saya memberikan kepada Perpustakaan Universitas Sanata Dharma hak untuk menyimpan, mengalihkan dalam bentuk media lain, mengelolanya dalam bentuk pangkalan data, mendistribusikan secara terbatas, dan mempublikasikannya di Internet atau media lain untuk kepentingan akademis tanpa perlu meminta ijin dari saya maupun memberikan royalti kepada saya selama tetap mencantumkan nama saya sebagai penulis.

Demikian pernyataan ini yang saya buat dengan sebenarnya.

Dibuat di Yogyakarta

Pada tanggal: 28 Juli 2008

Yang menyatakan

(Leo Christi Agustoo)


PRAKATA

Puji dan syukur penulis panjatkan ke hadirat Tuhan Yang Maha Esa atas segala berkat dan rahmat-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan penelitian dan penyusunan skripsi yang berjudul “Validasi Metode Spektrofotometri Visibel Menggunakan Pereaksi o-Fenantrolina Pada Penetapan Kadar Hidrokuinon Dalam Krim Simulasi” ini tepat pada waktunya. Skripsi ini disusun untuk memenuhi salah satu syarat dalam memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) Program Studi Ilmu Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Penulis berhasil menyelesaikan penelitian dan penyusunan skripsi ini tak lepas dari bantuan dan dukungan baik berupa materiil, moral maupun spiritual dari banyak pihak. Pada kesempatan ini, penulis ingin mengucapkan terimakasih kepada : 1. Rita Suhadi, M.Si., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. 2. Christine Patramurti, M.Si., Apt. selaku dosen pembimbing yang dengan kesabarannya membimbing, memberi saran dan kritik sejak penyusunan proposal hingga selesainya skripsi ini. 3. Drs. Sulasmono, Apt. selaku dosen penguji yang telah meluangkan waktu untuk memberikan masukan, saran dan kritik yang membangun selama penelitian. 4. Lucia Wiwid W., M.Si. selaku dosen penguji yang telah meluangkan waktu untuk memberikan masukan, saran dan kritik yang membangun selama penelitian. 5. Papa dan Mama serta Theo atas segala kasih sayang, dukungan, perhatian, nasehat dan doa yang senantiasa menyertai penulis. 6. Ombi , Uwak, Wakgiok,Yaya, dan Wakcak serta saudara – saudara yang lain atas segala kasih sayang, dukungan, perhatian, nasehat dan doa yang senantiasa menyertai penulis.

vi


7. Mami dan yang tercinta Hani atas segala kasih sayang, dukungan, perhatian, nasehat dan doa yang senantiasa menyertai penulis. 8. Bob, Elvan, Edvan, Bodong, Adit, Lian, Shinta, Fajar, Boris, Coco, dan Febri yang selama ini telah membantu, menemani, mendukung dan menyemangati penulis selama penelitian dan penyusunan skripsi ini. 9. Segenap staf laboran yang telah memberikan masukan, bantuan, kebersamaan dan kerjasamanya selama penelitian. 10. Teman-teman di fakultas farmasi khususnya angkatan 2004 atas persahabatan dan kekompakan selama kuliah. 11. Semua pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu persatu yang telah membantu penulis dalam menyelesaikan skripsi ini. Penulis menyadari bahwa penelitian dan penyusunan skripsi ini masih memiliki kekurangan mengingat keterbatasan kemampuan dan pengetahuan penulis. Oleh karena itu, penulis mengharapkan saran dan kritik yang membangun dari semua pihak. Semoga skripsi ini memberikan manfaat bagi orang lain yang membutuhkan.

Yogyakarta, 08 Juni 2008 Penulis

vii


viii


INTISARI

Hidrokuinon merupakan suatu bleaching agent yang digunakan secara luas pada produk kosmetika maupun obat dan biasanya berupa bentuk sediaan krim pemutih. Penggunaan hidrokuinon harus dibatasi kadarnya sebab penggunaan yang berlebihan dapat menyebabkan efek samping yang tidak diinginkan. Untuk penjaminan mutu produk dan menjaga keamanan konsumen, perlu adanya suatu analisis dengan suatu metode yang valid dan terpercaya, sehingga kandungan hidrokuinonnya dapat diketahui dan hasilnya dapat dipertanggungjawabkan. Hidrokuinon ditetapkan kadarnya dengan mengadaptasi metode spektrofotometri visibel menggunakan pereaksi o-fenantrolina pada penetapan kadar besi (III). Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui validitas metode analisis yang digunakan melalui penentuan parameter validitas yang meliputi: akurasi, presisi, spesifisitas, linieritas, dan rentang. Penelitian ini bersifat non-eksperimental deskriptif. Hidrokuinon dalam krim diisolasi terlebih dahulu menggunakan campuran air-metanol (1:1 v/v). Kadar hidrokuinon ditentukan dari senyawa kompleks [(C12H8N2)3Fe]2+ yang dihasilkan berdasarkan reaksi antara besi (II) dan o-fenantrolina. Pengukuran dilakukan pada panjang gelombang daerah visibel. Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa metode spektrofotometri visibel dengan pereaksi o-fenantrolina pada penetapan kadar hidrokuinon dalam krim simulasi telah memenuhi persyaratan validitas metode analisis, yaitu memiliki akurasi, presisi, spesifisitas, dan linearitas yang baik dengan rentang kadar hidrokuinon antara 1,5 ppm hingga 3,5 ppm. Kata kunci : Hidrokuinon, krim, o-fenantrolina, spektrofotometri visibel, validitas metode

ix


ABSTRACT

Hydroquinone is a bleaching agent that applied widely at cosmetics product and also drug and usually is in bleaching cream dosage form. Usage of hydroquinone must be limited because abundant usage can cause undesirable side effects. For guarantee quality of product and takes care of consumer security and safety, existence of an analysis with a trustworthy and valid method is needed, so that the hydroquinone content is knowable and the result can be guaranteed. Hydroquinone amount was analyzed by adaptation of visible spectrophotometry method with o-phenanthroline in iron (III) assay. Purpose of this research was to know analytical method validity applied through determination of covering validity parameter: accuration, precision, specificity, linierity, and range. This research haves the character of non-experimental descriptive. Hydroquinone in cream was isolated beforehand applies mixture methanol-water (1:1v/v). The amount of hydroquinone was determined from complex compound [( C12H8N2)3Fe]2+ that yielded based on reaction of between irons (II) and ophenanthroline. Measurement was done at visible wavelength area. Result obtained indicates that hydroquinone assay method in simulation cream in visible spectrophotometry with o-phenanthroline has fulfilled clauses of analytical method validity, that is having good accuration, precision, specificity, and linearity with the range of hydroquinone amount from 1,5 ppm until 3,5 ppm. Keywords: Hydroquinone, cream, o-phenanthroline, visible spectrophotometry, method validity

x


DAFTAR ISI

halaman HALAMAN SAMPUL ................................................................................

i

HALAMAN JUDUL ....................................................................................

ii

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING.............................................

iii

HALAMAN PENGESAHAN .......................................................................

iv

HALAMAN PERSEMBAHAN ....................................................................

v

PRAKATA ..................................................................................................

vi

PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ........................................................

viii

INTISARI ....................................................................................................

ix

ABSTRACT ..................................................................................................

x

DAFTAR ISI ...............................................................................................

xi

DAFTAR TABEL ........................................................................................

xiv

DAFTAR GAMBAR ...................................................................................

xv

DAFTAR LAMPIRAN ................................................................................

xvi

BAB I. PENGANTAR .................................................................................

1

A. Latar Belakang ...........................................................................

1

1.

Permasalahan ......................................................................

2

2.

Keaslian penelitian ..............................................................

2

3.

Manfaat penelitian ..............................................................

3

B. Tujuan Penelitian ........................................................................

3

BAB II. PENELAAHAN PUSTAKA ........................................................

4

A. Krim ............................................................................................

4

B. Hidrokuinon ...............................................................................

6

1.

Struktur dan sifat hidrokuinon .............................................

6

2.

Penggunaan dan mekanisme kerja hidrokuinon ...................

7

3.

Efek samping hidrokuinon ...................................................

7

C. Senyawa Kompleks ....................................................................

8

D. Spektrofotometri Visibel.............................................................. 10 1.

Deskripsi umum .................................................................. 10

xi


2.

Interaksi elektron dengan radiasi elektromagnetik (REM) ... 10

3.

Analisis kuantitatif dengan spektrofotometri visibel ............ 13

E. Validitas Metode Analisis ............................................................ 15 1.

Akurasi ................................................................................ 16

2.

Presisi ................................................................................. 16

3.

Linieritas dan rentang .......................................................... 17

4.

Spesifisitas .......................................................................... 17

5.

LOD (limit of detection) dan LOQ (limit of quantitation) ... 18

F. Keterangan Empiris ..................................................................... 19 BAB III. METODOLOGI PENELITIAN ................................................. 20 A. Jenis dan Rancangan Penelitian ................................................... 20 B. Definisi Operasional .................................................................... 20 C. Bahan – bahan Penelitian ............................................................. 20 D. Alat – alat Penelitian ................................................................... 21 E. Tata Cara Penelitian..................................................................... 21 1.

Pembuatan larutan................................................................ 21

2.

Optimasi metode ................................................................. 22

3.

Penetapan kadar hidrokuinon dalam krim simulasi .............. 23

F. Analisis Hasil ............................................................................. 25 BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ..................................................... 27 A. Optimasi Metode ........................................................................ 27 1.

Penentuan operating time (OT) ........................................... 29

2.

Penentuan panjang gelombang serapan maksimum (

3.

Pembuatan kurva baku ........................................................ 33

max)

.... 31

B. Penetapan Kadar Hidrokuinon dalam Krim Simulasi .................. 35 1.

Pembuatan krim simulasi .................................................... 35

2.

Preparasi krim simulasi ....................................................... 38

3.

Penetapan kadar hidrokuinon .............................................. 39

C. Parameter Validitas Metode Analisis .......................................... 40 1.

Akurasi ............................................................................... 40

2.

Presisi ................................................................................. 41

xii


3.

Linieritas ............................................................................. 41

4.

Spesifisitas .......................................................................... 42

5.

LOD (limit of detection) dan LOQ (limit of quantitation) ..... 43

BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN ...................................................... 44 A. Kesimpulan ................................................................................ 44 B. Saran .......................................................................................... 44 DAFTAR PUSTAKA .................................................................................. 45 LAMPIRAN ................................................................................................ 48 BIOGRAFI PENULIS ................................................................................ 56

xiii


DAFTAR TABEL

Tabel I.

Kriteria rentang recovery yang dapat diterima ............................ 16

Tabel II.

Kriteria KV yang dapat diterima .................................................. 17

Tabel III.

Parameter analisis yang harus dipenuhi untuk syarat validasi metode .................................................................................... 19

Tabel IV. Data replikasi seri baku hidrokuinon ........................................... 34 Tabel V.

Data serapan dan kadar hidrokuinon dalam sampel .................... 40

Tabel VI.

Hasil recovery dari enam replikasi sampel ................................. 40

xiv


DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Struktur hidrokuinon .................................................................

6

Gambar 2. Reaksi oksidasi hidrokuinon .....................................................

6

Gambar 3. Reaksi pembentukan senyawa kompleks besi(II) dan o-fenantrolina ..........................................................................

9

Gambar 4. Tingkat energi elektronik molekul ............................................. 11 Gambar 5. Reaksi redoks antara ion besi (III) dan hidrokuinon .................. 27 Gambar 6. Reaksi pembentukan senyawa kompleks [(C12H8N2)3Fe]2+ ........ 28 Gambar 7. Spektra operating time dari kadar tengah seri baku hidrokuinon ............................................................................. 30 Gambar 8. Spektra panjang gelombang serapan maksimum (

max)

tiga seri kadar larutan baku hidrokuinon ................................... 32 Gambar 9. Kurva baku hidrokuinon ........................................................... 35 Gambar 10. Spektra serapan kompleks [(C12H8N2)3Fe]2+ dari larutan sampel (a) dan baku (b) ................................................ 42

xv


DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Tabel hasil penimbangan baku hidrokuinon dan perhitungan kadar larutan baku hidrokuinon ............................................... 48 Lampiran 2. Tabel perhitungan kadar seri larutan baku hidrokuinon dan serapan seri larutan baku hidrokuinon ...................................... 49 Lampiran 3. Tabel penimbangan sampel krim simulasi dan perhitungan kadar terhitung hidrokuinon dalam sampel .............................. 50 Lampiran 4. Tabel serapan sampel dan perhitungan kadar terukur hidrokuinon dalam sampel ....................................................... 51 Lampiran 5. Tabel recovery dan perhitungan recovery ................................. 52 Lampiran 6. Tabel KV (koefisien variasi) dan perhitungan KV .................... 53 Lampiran 7. Perhitungan LOD dan LOQ ...................................................... 54 Lampiran 8. Foto larutan sampel dan blanko ................................................ 55

xvi


BAB I PENGANTAR

A. Latar Belakang Hidrokuinon merupakan suatu agen pemucat warna kulit atau yang lebih populer dikenal sebagai bleaching agent. Penggunaan hidrokuinon sebagai bleaching agent tersebar luas baik dalam produk kosmetika maupun obat. Pada umumnya, sediaan yang sering dijumpai adalah dalam bentuk sediaan krim pemutih. Hal ini dikarenakan sediaan krim memiliki beberapa keunggulan jika dibandingkan dengan sediaan lain seperti salep, yaitu: umumnya mudah menyebar rata di permukaan kulit, lebih tidak berminyak, dan tidak meninggalkan lapisan film yang basah (Ansel, 2005). Dalam produk kosmetika, hidrokuinon dijual secara bebas di pasaran dengan persyaratan kadar tertentu, yaitu

2 % b/b

(Anonim, 2007). Dalam produk obat, hidrokuinon dijual berdasarkan resep dan dengan pengawasan dari dokter sebab kadar hidrokuinon yang digunakan umumnya lebih besar dibandingkan pada produk kosmetika. Penggunaan hidrokuinon ini harus dibatasi kadarnya sebab penggunaan yang berlebihan dapat menyebabkan efek samping yang tidak diinginkan, seperti iritasi kulit ringan, kulit memerah, panas, dan gatal hingga mengakibatkan oochronosis terhadap orang berkulit gelap (Anonim, 2006). Untuk penjaminan mutu terhadap produk yang mengandung hidrokuinon dan menjaga keamanan konsumen perlu dilakukan suatu analisis untuk dapat mengetahui kadar hidrokuinon dalam produk kosmetika maupun obat. Metode analisis yang

1


2

digunakan harus valid dan terpercaya, sehingga hasil yang diperoleh dapat dipertanggungjawabkan. Hidrokuinon

ditetapkan

kadarnya

dengan

mengadopsi

metode

spektrofotometri visibel menggunakan pereaksi o-fenantrolina pada penetapan kadar besi (III). Hidrokuinon merupakan suatu agen pereduksi yang dapat mereduksi besi (III) menjadi besi (II). Besi (II) yang dihasilkan dari reaksi hidrokuinon dengan besi (III) ini dapat direaksikan dengan pereaksi o-fenantrolina membentuk senyawa kompleks berwarna merah-oranye. Senyawa kompleks ini dapat diukur serapannya pada panjang gelombang daerah visibel (Harris, D.C.,1999). Agar metode ini dapat dinyatakan valid dan terpercaya serta hasilnya nanti dapat dipertanggungjawabkan maka perlu dilakukan validasi metode. Metode ini dapat dikatakan memiliki validitas yang baik apabila sudah memenuhi persyaratan seperti akurasi, presisi, dan linieritas serta memiliki spesifisitas yang baik. 1.

Permasalahan Apakah metode spektrofotometri visibel menggunakan pereaksi o-

fenantrolina pada penetapan kadar hidrokuinon dalam krim simulasi telah memenuhi persyaratan validitas seperti: akurasi, presisi, dan linieritas, serta memiliki spesifisitas yang baik? 2.

Keaslian penelitian Sepengetahuan

peneliti,

penelitian

tentang

validasi

metode

spektrofometri visibel dengan pereaksi o-fenantrolina pada penetapan kadar hidrokuinon dalam krim simulasi belum pernah dilakukan.


3.

3

Manfaat penelitian a.

Manfaat teoritis. Hasil penelitian ini diharapkan dapat menambah

informasi kefarmasian tentang penggunaan metode spektrofotometri visibel dengan pereaksi o-fenantrolina pada penetapan kadar hidrokuinon dalam produk krim pemutih. b. memberikan

Manfaat metodologis. Hasil penelitian ini diharapkan dapat informasi

validitas

dari

metode

spektrofotometri

visibel

menggunakan pereaksi o-fenantrolina pada penetapan kadar hidrokuinon dalam produk krim pemutih. c.

Manfaat praktis. Penelitian ini diharapkan dapat dijadikan metode

alternatif untuk menetapkan kadar hidrokuinon dalam produk krim pemutih yang beredar di pasaran, sehingga kadar hidrokuinon dapat diketahui dengan pasti apakah telah memenuhi persyaratan yang berlaku atau belum. Dengan begitu dapat melindungi keamanan dan kenyamanan konsumennya.

B. Tujuan Penelitian Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui apakah metode spektrofotometri visibel menggunakan pereaksi o-fenantrolina pada penetapan kadar hidrokuinon dalam krim simulasi telah memenuhi persyaratan validitas seperti: akurasi, presisi, dan linieritas, serta memiliki spesifisitas yang baik.


BAB II PENELAAHAN PUSTAKA

A. Krim Krim adalah bentuk sediaan setengah padat yang mengandung satu atau lebih bahan obat terlarut atau terdispersi dalam bahan dasar yang sesuai dan dapat diformulasikan sebagai emulsi air dalam minyak atau minyak dalam air. Krim lebih ditujukan untuk penggunaan kosmetika dan estetika (Anonim, 1995). Krim biasanya digunakan sebagai emollient atau pemakaian obat pada kulit (Ansel, 2005). Krim pemutih merupakan campuran bahan kimia yang bertujuan untuk memucatkan noda hitam (cokelat) pada kulit. Dalam jangka waktu lama, krim tersebut dapat menghilangkan atau mengurangi hiperpigmentasi pada kulit. Namun, penggunaan yang terus – menerus justru akan menimbulkan pigmentasi dengan efek permanen (Anonim, 2006b). Krim pemutih yang mengandung zat aktif hidrokuinon dapat berubah warna dari putih menjadi coklat setelah 3-4 bulan. Krim hidrokuinon merupakan produk yang baik dalam mengatasi melasma dengan atau tanpa bahan kimia untuk pengelupasan kulit (Maibach, I.H.,2000). Menurut Keputusan Kepala Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia nomor HK.00.05.4.1745 Bab II Pasal 3, krim pemutih dengan kandungan hidrokuinon termasuk kosmetika golongan Ic yaitu kosmetika yang mengandung bahan dengan persyaratan kadar dan penandaan seperti termuat pada lampiran I no 47 (Anonim, 2003).

4


5

Formulasi krim yang merupakan suatu sistem emulsi terdiri dari tiga komponen penyusun utama, yaitu air, minyak, dan zat pengemulsi (Senzel, A.J., 1977). Untuk membuat krim digunakan zat pengemulsi, umumnya berupa surfaktan – surfaktan anionik, kationik, dan nonionik (Anief, Moh., 2005). Surfaktan anionik berupa sabun alkali, sabun logam, sabun amin, dan alkilsulfat. Surfaktan kationik berupa amonium kuarterner (setrimid), alkoniumbromida, benzalkoniumbromida, dan setilpiridiniumklorida. Surfaktan nonionik meliputi alkohol lemak tinggi (setil alkohol), ester sorbitan (span), dan ester polioksietilensorbitan/polisorbat (tween) (Voigt, R., 1994). Surfaktan

berperan

besar

dalam

formulasi

krim,

yaitu

untuk

menggabungkan antara fase minyak dan air. Untuk dapat menganalisis kandungan masing – masing komponen penyusun krim perlu dilakukan suatu pemisahan antara fase minyak dan air sehingga komponen yang hendak dianalisis dapat diisolasi dan pada waktu pengukuran tidak dipengaruhi oleh faktor dari komponen lain. Proses pemisahan komponen krim ini bergantung pada sifat dan karakteristik dari surfaktan yang digunakan. Krim yang dibuat dari surfaktan anionik dapat dipisahkan komponennya dengan penambahan suatu asam kuat. Asam kuat ini akan mengganggu kerja dari surfaktan anionik, sehingga dapat terjadi pemisahan fase minyak dan air. Sedangkan untuk krim yang dibuat dari surfaktan kationik, proses pemisahannya dapat dilakukan dengan penambahan suatu basa. Namun, untuk krim yang dibuat dari surfaktan nonionik, dimana tidak memiliki muatan, proses pemisahannya dapat dilakukan dengan penambahan salah satu fase secara berlebih dan pemanasan (Senzel, A.J., 1977).


6

B. Hidrokuinon 1. Struktur dan sifat hidrokuinon Hidrokuinon atau 1,4-Benzenediol adalah senyawa organik aromatik dengan tipe fenol yang mempunyai rumus kimia C6H6O2. Hidrokuinon memiliki 2 gugus hidroksi yang terikat cincin benzen pada posisi para(Wenninger,J.A.,2000).

HO

OH

Gambar 1. Struktur hidrokuinon Hidrokuinon mengandung tidak kurang dari 99,0% dan tidak lebih dari 100,5% C6H6O2 dihitung terhadap zat anhidrat. Hidrokuinon berbentuk jarum halus, putih, mudah menjadi gelap jika terpapar cahaya dan udara (Anonim, 1995). Hidrokuinon larut dalam air (1 dalam 17 bagian air),mudah larut dalam alkohol (1 dalam 4 bagian alkohol), dalam kloroform (1 dalam 51 bagian kloroform), dan dalam eter (1 dalam 16,5 bagian eter) (Anonim, 1999). Dengan adanya udara, larutan hidrokuinon akan berwarna coklat dikarenakan proses oksidasi. Dalam suasana basa, hidrokuinon akan mengalami oksidasi dengan cepat karena hidrokuinon merupakan agen pereduksi, maka oksidasi terjadi secara reversibel menjadi kuinon yang ditunjukkan pada reaksi dibawah ini (Anonim, 1996) : O

OH

OH H2O

OH

O

Hidrokuinon

Kuinon

Gambar 2. Reaksi oksidasi hidrokuinon


7

2. Penggunaan dan mekanisme kerja hidrokuinon Hidrokuinon digunakan sebagai agen depigmentasi untuk kulit yang dalam kondisi hiperpigmentasi seperti melasma, bintik-bintik, dan lentigines. Penggunaannya membutuhkan waktu beberapa minggu sebelum muncul suatu efek, tapi depigmentasi dapat bertahan selama 2-6 bulan setelah penghentian pemakaian. Aplikasi hidrokuinon harus dihentikan jika tidak ada peningkatan setelah 2 bulan perawatan. Hidrokuinon harus digunakan dua hari sekali hanya untuk melindungi kulit dari sinar matahari dan mengurangi repigmentasi (Anonim, 1999). Selain itu, hidrokuinon juga berfungsi sebagai antioksidan, zat pewarna rambut, dan agen pereduksi (Wenninger,J.A.,dkk., 2000). Hidrokuinon sendiri merupakan zat aktif yang paling banyak digunakan dalam sediaan pemutih wajah. Hal ini dikarenakan efektivitas kerja dari hidrokuinon yaitu dapat menginaktivasi enzim tirosinase melalui penghambatan reaksi oksidasi enzimatik dari tirosin ke 3,4-dihidroksifenilalanin (Wilkinson, J.B., 1982). Enzim tirosinase ini merupakan enzim utama dalam pembentukan melanin, sehingga jika kerjanya dihambat maka jumlah pigmen melanin pemberi warna kulitpun menjadi berkurang dan kulit dapat tampak lebih putih. Selain itu, hidrokuinon juga mampu mengelupas kulit bagian luar, sehingga akan tampak lapisan kulit di dalamnya yang lebih putih (Anonim, 2006b). 3. Efek samping hidrokuinon Penggunaan hidrokuinon lebih dari 2% b/b termasuk golongan obat keras yang hanya dapat digunakan berdasarkan resep dokter sebab dapat mengakibatkan iritasi kulit, kulit menjadi merah dan rasa terbakar juga dapat menyebabkan


8

kelainan pada ginjal (nephropathy), kanker darah (leukemia) dan kanker sel hati (hepatocelluler adenoma) (Anonim, 2007). Selain itu, penggunaan hidrokuinon yang berlebihan juga dapat menyebabkan oochronosis (kulit berbintil seperti pasir dan berwarna coklat kebiruan, serta terasa gatal dan seperti terbakar) terhadap orang yang berkulit gelap (Anonim, 2006b).

C. Senyawa Kompleks Senyawa kompleks adalah senyawa yang dibentuk oleh reaksi antara suatu ion logam (kation) dengan suatu anion atau molekul netral. Ion logam dalam kompleks itu disebut atom pusat, dan gugus yang terikat pada atom pusat disebut ligan. Banyaknya ikatan yang dibentuk oleh atom logam pusat disebut bilangan koordinasi logam itu (Day and Underwood, 1996). Reaksi pembentukan suatu senyawa kompleks dianggap sebagai suatu reaksi asam-basa Lewis dengan ligan bertindak sebagai basa, dengan menyumbangkan sepasang elektronnya kepada kation, yang merupakan asamnya. Ikatan yang terbentuk antara atom logam pusat dan ligan sering bersifat kovalen, namun dalam beberapa kasus antaraksi itu dapat berupa tarik-menarik Coulomb (Day and Underwood, 1996). Salah satu contoh senyawa kompleks adalah senyawa kompleks besi (II) dengan o-fenantrolina. Menurut Bassett, Denney, Jeffery, dan Mendham, besi (II) dapat ditetapkan kadarnya menggunakan pereaksi o-fenantrolina. Besi (II) bereaksi

dengan

o-fenantrolina

membentuk

kompleks

merah-jingga

[(C12H8N2)3Fe]2+ dalam larutan sedikit asam. Besi (III) tidak bereaksi membentuk


9

kompleks dengan o-fenantrolina (Anonim, 2001). Dalam analisis ini, perlu ditambahkan suatu agen pereduksi seperti hidrokuinon sebab besi (II) dapat mudah tereduksi menjadi besi (III) dengan adanya suatu asam dan air (Anonim, 2001). Menurut Daniel, pH dijaga agar mendekati nilai 3,5 agar kompleks yang dihasilkan dapat optimal dan stabil. Namun demikian intensitas dari larutan senyawa kompleks tersebut tidak bergantung pada pH 2-9.Untuk mengontrol tingkat keasaman dari larutan dan menjaga pH dapat ditambahkan larutan natrium asetat (Anonim, 2008). Reaksi pembentukan senyawa kompleks [(C12H8N2)3Fe]2+ adalah sebagai berikut (Harris, D.C., 1999) :

2Fe3+

HO

OH

2Fe2+

O

O

2H+

Kuinon

Hidrokuinon

N

Fe2+

Fe2+

3 N

N

N

o-phenanthroline

lambda max = 508nm

Gambar 3. Reaksi pembentukan senyawa kompleks besi(II) dan ofenantrolina Daya serap molar dari kompleks [(C12H8N2)3Fe]2+ adalah 11.100 L/molcm pada panjang gelombang serapan maksimum,

max =

508nm. Nilai yang sangat

besar ini menandakan bahwa kompleks menyerap sangat kuat. Kompleks ini


10

sangat stabil dan intensitas warnanya tidak berubah dalam waktu yang lama (Anonim, 2005).

D. Spektrofotometri Visibel 1.

Deskripsi umum Spektrofotometri visibel adalah anggota teknik analisis spektroskopik

yang memakai sumber radiasi elektromagnetik sinar tampak (380-780 nm) dengan memakai

instrumen

spektrofotometer

(Mulja

dan

Suharman,

1995).

Spektrofotometri visibel termasuk dalam spektrofotometri serapan yang melakukan pengukuran suatu interaksi antara radiasi elektromagnetik (REM) dan molekul atau atom dari suatu zat kimia. Pada awalnya, pengukuran spektrofotometri

pada

daerah

visibel

disebut

kolorimetri

tetapi

“kolorimetri” lebih tepat digunakan untuk persepsi tentang warna

istilah

(Anonim,

1995). 2.

Interaksi elektron dengan radiasi elektromagnetik (REM) Dalam metode spektrofotometeri, larutan sampel akan mengabsorpsi

REM dengan energi yang sesuai dan jumlah yang diserap tersebut berhubungan dengan konsentrasi dari analit dalam larutan. Suatu molekul mengabsorpsi photon dengan energi yang sesuai untuk menjalani suatu transisi (Christian, G.D., 2004). Jenis – jenis absorpsi yang dapat terjadi antara lain: a.

Absorpsi yang melibatkan transisi elektron , , dan n. Ada tiga macam distribusi elektron di dalam suatu senyawa organik secara umum yang selanjutnya dikenal sebagai orbital elektron pi ( ), sigma ( ), dan


11

elektron tidak berpasangan (n). Apabila pada suatu molekul dikenakan radiasi elektromagnetik maka akan terjadi eksitasi elektron ke tingkat energi yang lebih tinggi yang dikenal sebagai elektron anti-bonding (Mulja dan Suharman, 1995).

Gambar 4. Tingkat energi elektronik molekul Menurut Skoog et al, macam-macam transisi yang mungkin terjadi antara lain : 1) Transisi

*. Dibutuhkan energi yang besar untuk menginduksi

terjadinya transisi

* dan terjadi pada daerah ultraviolet jauh ( <

180 nm) yang diberikan oleh ikatan tunggal kovalen dan menduduki orbital , sebagai contoh pada alkana yang memiliki ikatan karbonkarbon dan karbon-hidrogen (Skoog et al., 1994). 2) Transisi n

*. Senyawa – senyawa jenuh yang mengandung atom

dengan pasangan elektron bebas, seperti oksigen, nitrogen, belerang, atau halogen mampu melakukan transisi n

*. Secara umum,

energi transisi yang dibutuhkan lebih kecil daripada transisi

*

dan memiliki panjang gelombang antara 150-250 nm (Skoog et al., 1998).


3) Transisi n

12

*. Transisi dari jenis ini meliputi transisi elektron –

elektron heteroatom tak berikatan ke orbital anti ikatan *. Serapan ini terjadi pada panjang gelombang yang panjang dan intensitas rendah. Transisi n

* menunjukkan pergeseran batoromik, yaitu

pergeseran serapan menuju panjang gelombang yang lebih panjang (Skoog et al., 1998). 4) Transisi

*. Transisi ini diberikan oleh ikatan rangkap dua dan

tiga dari senyawa organik, yaitu dapat berupa alkena dan alkuna yang lebih mudah untuk tereksitasi dengan adanya radiasi elektromagnetik. Transisi ini juga yang paling mudah terbaca dan bertanggung jawab terhadap spektra elektronik pada panjang gelombang antara 200-700 nm. Dengan adanya konjugasi antara dua atau lebih kromofor maka dapat menggeser panjang gelombang serapan maksimum pada panjang gelombang yang lebih panjang (Skoog et al.,1998). b.

Absorpsi yang melibatkan transisi elektron d dan f. Transisi ini kebanyakan terjadi pada logam transisi. Untuk golongan lanthanide dan actinide proses absorbsi dihasilkan oleh transisi elektronik dari elektron 4f dan 5f. Untuk logam transisi seri pertama dan kedua, transisi elektronik dari elektron 3d dan 4d yang bertanggung jawab terhadap proses absorpsinya. Logam transisi memiliki orbital d yang masih kosong sebagian (3d dan 4d) yang masing – masing dapat mengakomodasi sepasang elektron dan berikatan dengan suatu ligan membentuk


13

kompleks serta menghasilkan spektra tertentu. Berikut ini merupakan urutan ligan berdasarkan kekuatan medan yang ditimbulkannya I- < Br- < Cl- < F- < OH- < C2O42- ~ H2O < SCN- < NH3 < etilendiamina < ofenantrolina < NO2- < CN-. Semakin besar kekuatan medannya maka panjang gelombang serapan maksimumnya menurun sebab energinya meningkat (Skoog et al, 1998). c.

Absorpsi yang melibatkan charge transfer. Absorpsi tipe ini sangat penting dalam suatu analisis, karena mempunyai daya serap molar yang sangat besar (

max

> 10.000). Oleh karena itu, kompleks ini mempunyai

sensitifitas yang tinggi. Kompleks – kompleks anorganik yang melakukan absorpsi dengan charge transfer biasanya disebut kompleks charge transfer. Contoh dari kompleks ini antara lain adalah kompleks tiosianat dan fenol dengan besi (III), kompleks o-fenantrolina dengan besi (II), kompleks heksasianoferat(II) / heksasianoferat (III) yang bertanggung jawab atas warna Prussian blue (Skoog et al, 1998). Pada umumnya kompleks charge transfer yang melibatkan suatu ion logam, logam bertindak sebagai penerima elektron (acceptor) dan ligan sebagai donor elektron terkecuali untuk kompleks besi(II) dengan o-fenantrolina dimana ligannya merupakan penerima elektron sedangkan ion logam berperan sebagai donor elektron (Skoog et al, 1998). 3.

Analisis kuantitatif dengan spektrofotometri visibel Besarnya radiasi elektromagnetik (monokromatik) yang dapat diserap

oleh kromofor dapat digambarkan dengan dua hukum klasik, yaitu hukum


Lambert

dan Beer.

Hukum

Lambert

menyatakan bahwa bila

14

cahaya

monokromatik melewati medium tembus cahaya, laju berkurangnya intensitas oleh bertambahnya ketebalan, berbanding lurus dengan intensitas cahaya. Hukum Beer menyatakan bahwa intensitas berkas cahaya monokromatik berkurang secara eksponensial dengan bertambahnya konsentrasi zat penyerap secara linier (Bassett et al, 1994). Analisis dengan spektrofotometri UV-Vis selalu melibatkan pembacaan serapan radiasi elektromagnetik oleh molekul atau radiasi elektromagnetik yang diteruskan. Keduanya dikenal sebagai serapan (A) tanpa satuan dan transmitan dengan satuan persen (%T) (Mulja dan Suharman, 1995). Bouger, Lambert dan Beer membuat formula secara matematik hubungan antara transmitan atau serapan terhadap intensitas radiasi atau konsentrasi zat yang dianalisis dan tebal kuvet yang mengabsorpsi sebagai : = =

= 10 1

. .

= . .

dimana: T = persen transmitan; Io = intensitas radiasi yang datang; It = intensitas radiasi yang diteruskan; ε = daya serap molar (Lt.mol-1 cm-1); c = konsentrasi (mol Lt-1); b = tebal kuvet (cm); dan A = serapan (Mulja dan Suharman, 1995). Menurut Farmakope Indonesia edisi ke-IV tahun 1995, hubungan antara transmitan atau serapan terhadap intensitas radiasi atau konsentrasi zat yang dianalisis dan tebal kuvet dinyatakan sebagai : Log10(1/T) = A = abc = bc


15

dimana : A = serapan (logaritma dasar 10 dari kebalikan transmitan (T); a = daya serap (hasil bagi serapan (A) dibagi dengan hasil perkalian kadar yang dinyatakan dalam g per liter zat (c) dan panjang sel dalam cm (b); = daya serap molar (hasil bagi serapan (A) dengan perkalian kadar zat, dinyatakan dalam mol per liter, dan panjang serapan dalam cm. Serapan jenis yang diberi simbol A (1 %, 1 cm) adalah serapan dari larutan 1 % zat terlarut dalam sel dengan ketebalan 1 cm. Harga serapan jenis pada panjang gelombang tertentu dalam suatu pelarut merupakan sifat dari zat terlarut. Untuk pembacaan serapan (A) atau transmitan (T) pada daerah yang terbatas, kesalahan penentuan kadar hasil analisis dinyatakan sebagai : =

0,4343 . log

∆T adalah harga rentang skala transmitan terkecil dari alat yang masih dapat terbaca pada analisis dengan metode spektrofotometri UV-Vis. Pembacaan A(0,20,8) atau %T (15%-65%) akan memberikan persentase kesalahan analisis yang dapat diterima (0,5-1%) untuk ∆T = 1% (Mulja dan Suharman, 1995).

E. Validitas Metode Analisis Validasi metode analisis adalah suatu tindakan penilaian terhadap parameter tertentu, berdasarkan percobaan laboratorium, untuk membuktikan bahwa parameter tersebut memenuhi persyaratan untuk penggunaannya (Harmita, 2004). Validasi metode analisis diartikan sebagai suatu prosedur yang digunakan untuk membuktikan bahwa metode analisis tersebut dapat memberikan hasil seperti yang diharapkan dengan kecermatan dan ketelitian yang memadai. Metode


16

analisis instrumen merupakan metode yang terpilih dan memadai untuk mengantisipasi persoalan analisis yaitu sangat kecilnya kadar senyawa yang dianalisis dan kompleksnya matriks sampel yang dianalisis (Mulja dan Suharman, 1995). Untuk itu diperlukan suatu pedoman mengenai kesahihan metode analisis yang didukung oleh parameter – parameter dibawah ini: 1. Akurasi Akurasi atau kecermatan adalah ukuran yang menunjukkan derajat kedekatan hasil analis dengan kadar analit yang sebenarnya. Akurasi dinyatakan sebagai persen perolehan kembali (recovery) analit yang ditambahkan (Harmita, 2004). Tabel I. Kriteria rentang recovery yang dapat diterima (Harmita, 2004) Analit pada matriks Rentang recovery sampel (%) yang diperoleh 100 98-102 % > 10 98-102 % >1 97-103 % > 0,1 95-105 % 0,01 90-107 % 0,001 90-107 % 0,0001 (1 ppm) 80-110 % 0,00001 (100 ppb) 80-110 % 0,000001 (10 ppb) 60-115 % 0,0000001 (1 ppb) 40-120 % 2. Presisi Presisi atau keseksamaan adalah ukuran yang menunjukkan derajat kesesuaian antara hasil uji individual, diukur melalui penyebaran hasil individual dari rata – rata jika prosedur diterapkan secara berulang pada sampel – sampel yang diambil dari campuran yang homogen (Harmita, 2004). Presisi biasanya dinyatakan dalam koefisien variasi (KV). Suatu metode dapat


17

dinyatakan memiliki presisi yang baik apabila memiliki KV < 2 % tetapi kriteria ini fleksibel tergantung dari kondisi analit yang diperiksa, jumlah sampel dan kondisi laboratorium. Berikut ketentuan nilai KV yang dapat diterima (Harmita, 2004) : Tabel II. Kriteria KV yang dapat diterima Kadar Analit KV (%) 1% 2,5 0,1 % 5 1 ppm 16 1 ppb 32 3. Linieritas dan rentang Linieritas merupakan kemampuan suatu metode (pada rentang tertentu) untuk mendapatkan hasil uji yang secara langsung proporsional dengan konsentrasi (jumlah) analit di dalam sampel. Rentang adalah jarak antara level terbawah dan teratas dari metode analisis yang telah dipakai untuk mendapatkan presisi, linieritas dan akurasi yang bisa diterima (Anonim, 2007). Persyaratan data linearitas yang bisa diterima jika memenuhi nilai koefisien korelasi (r) > 0,99 atau r2

0,997 (Anonim, 2004; Chan et al, 2004)

4. Spesifisitas Spesifisitas suatu metode adalah kemampuannya yang hanya mengukur zat tertentu saja secara cermat dan seksama dengan adanya komponen lain yang mungkin ada dalam matriks sampel. Selektivitas metode ditentukan dengan membandingkan hasil analisis sampel yang mengandung cemaran, hasil urai, senyawa sejenis, senyawa asing lainnya atau pembawa plasebo dengan hasil analisis sampel tanpa penambahan bahan-bahan tadi. Penyimpangan hasil merupakan selisih dari hasil uji keduanya (Harmita, 2004).


18

5. LOD (limit of detection) dan LOQ (limit of quantitation) LOD adalah jumlah terkecil analit dalam sampel yang dapat dideteksi dan masih memberikan respon signifikan dibandingkan dengan blangko. LOQ merupakan kuantitas terkecil analit dalam sampel yang masih dapat memenuhi kriteria akurasi dan presisi. LOD dan LOQ dapat dihitung secara statistik melalui garis regresi linier dari kurva kalibrasi. Nilai pengukuran akan sama dengan nilai b pada persamaan garis linier y = a + bx, sedangkan simpangan baku blanko sama dengan simpangan baku residual (Sy/x), sehingga LOD dan LOQ dapat dihitung menggunakan rumus: LOD =

3

/

dan LOQ =

10

/

(Harmita, 2004).

Menurut The United States Pharmacopeia 30 The National Formulary 25 tahun 2007, metode/prosedur analisis dapat dibedakan menjadi 4 kategori, yaitu: a.

Kategori I Mencakup prosedur analisis kuantitatif, untuk menetapkan kadar

komponen utama bahan obat atau zat aktif dalam sediaan farmasi. b.

Kategori II Mencakup prosedur analisis kualitatif dan kuantitatif yang digunakan

untuk menganalisis impurities ataupun degradation compounds dalam sediaan farmasi. c.

Kategori III


19

Mencakup prosedur analisis yang digunakan untuk menentukan karakteristik penampilan suatu sediaan farmasi, misalnya disolusi dan pelepasan obat. d.

Kategori IV (tes identifikasi)

Tabel III. Parameter analisis yang harus dipenuhi untuk syarat validasi metode (Anonim, 2007) Parameter Kategori I Kategori II Kategori Kategori analisis III IV Kuantitatif BatasTes Akurasi Ya Ya * * Tidak Ya Ya Tidak Ya Tidak Presisi Ya Ya Ya * Ya Spesifisitas Tidak Tidak Ya * Tidak LOD Tidak Ya Tidak * Tidak LOQ Ya Ya Tidak * Tidak Linieritas Range Ya Ya * * Tidak * = Mungkin diperlukan (tergantung sifat spesifik tes) F. Keterangan Empiris Hidrokuinon merupakan bleaching agent yang bersifat sebagai reduktor dimana dapat mereduksi besi (III) menjadi besi (II). Jumlah hidrokuinon yang ditambahkan sebanding dengan jumlah besi (II) yang dihasilkan. Kemudian besi (II) dapat direaksikan dengan o-fenantrolina membentuk senyawa berwarna merah-jingga yang dapat dianalisis secara spektrofotometri visibel. Oleh karena itu, metode spektrofotometri visibel dengan pereaksi o-fenantrolina dapat digunakan untuk menetapkan kadar hidrokuinon dalam krim pemutih. Validitas dari metode dapat diketahui dari akurasi, presisi, dan linearitas. Suatu metode dikatakan valid apabila telah memenuhi syarat akurasi dengan rentang recovery antara 97-103%; syarat untuk presisi dengan nilai KV < 2,5 %; dan syarat untuk linieritas dengan nilai r > 0,99 atau r2

0,997.


BAB III METODOLOGI PENELITIAN

A. Jenis dan Rancangan Penelitian Penelitian ini termasuk jenis penelitian non-eksperimental deskriptif sebab pada penelitian ini tidak terdapat manipulasi dan perlakuan terhadap objek penelitian yang digunakan.

B. Definisi Operasional 1. Krim yang diteliti adalah bentuk sediaan setengah padat yang mengandung hidrokuinon (2 % b/b) sebagai bahan obat terlarut atau terdispersi dalam bahan dasar yang sesuai dan diformulasi sebagai emulsi minyak dalam air serta ditujukan untuk penggunaan kosmetika dan estetika. 2. Kadar hidrokuinon dalam sampel dinyatakan dalam satuan % b/b dan dihitung secara spektrofotometri visibel dari serapan kompleks [(C12H8N2)3Fe]2+ . 3. Parameter validitas metode analisis yang digunakan adalah akurasi, presisi, linieritas dan rentang, spesifisitas serta LOD dan LOQ.

C. Bahan-bahan Penelitian Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah hidrokuinon p.a. (E.Merck), FeCl3.6H2O p.a. (E.Merck), HCl p.a. (E.Merck), natrium asetat p.a. (E.Merck), o-fenantrolina p.a. (E.Merck), akuades, metanol p.a. (E.Merck),

20


21

etanol p.a. (E.Merck), setil alkohol, vaselin putih, parafin cair, tween 80, dan gliserin.

D. Alat-alat Penelitian Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah seperangkat spektrofotometer UV/VIS (Perkin-Elmer Lambda 20), neraca analitik (Scaltec), mikropipet (Socorex), waterbath, penyaring Whatman, kertas saring (Schleicher & Schuell berdiameter 50 mm), pH indikator universal, mortir dan stamper, cawan porselen, labu ukur dan alat-alat gelas lain yang lazim digunakan dalam laboratorium analisis.

E. Tata Cara Penelitian 1. Pembuatan larutan a.

Larutan baku hidrokuinon 0,01 %. Lebih kurang 0,01 g

hidrokuinon p.a. ditimbang seksama lalu dimasukkan ke dalam labu ukur 10 ml dan dilarutkan dengan akuades hingga tanda. Kemudian dari larutan tersebut dipipet sebanyak 1 ml dan dimasukkan ke dalam labu ukur 10 ml, encerkan dengan akuades hingga tanda. Larutan harus selalu dibuat baru. b.

Larutan FeCl3.6H2O 0,4 mgFe/ml. Lebih kurang 0,019 g

FeCl3.6H2O p.a. ditimbang, lalu dimasukkan ke dalam labu ukur 10 ml. Kemudian ditambahkan 1-2 tetes larutan HCl encer dan encerkan dengan akuades hingga tanda.


c.

22

Larutan o-fenantrolina 0,25 %. Lebih kurang 0,0625 g o-

fenantrolina p.a. ditimbang, lalu dimasukkan ke dalam labu ukur 25 ml dan dilarutkan dengan 2,5 ml etanol p.a., lalu diencerkan dengan akuades hingga tanda. Larutan harus disimpan dibotol gelap. d.

Larutan natrium asetat 0,25 %. Lebih kurang 0,025 g natrium

asetat p.a. ditimbang, lalu dimasukkan ke dalam labu ukur 10 ml dan dilarutkan dengan akuades hingga tanda. Larutan disimpan dalam lemari pendingin. 2. Optimasi metode a.

Penentuan Operating Time (OT). Sebanyak 0,15 ml larutan

FeCl3.6H2O 0,4 mgFe/ml ditambahkan dengan 0,25 ml larutan hidrokuinon 0,01 %. Larutan tersebut ditambahkan 1-3 tetes larutan natrium asetat 0,25 % untuk mendapatkan pH~3,5. Kemudian ditambahkan 0,5 ml larutan o-fenantrolina 0,25 %. Larutan digojog hingga homogen. Pengukuran operating time dilakukan pada panjang gelombang serapan maksimum teoritis, yaitu 508 nm. b.

Penentuan panjang gelombang serapan maksimum (

max).

Diambil

tiga buah labu ukur 10 ml, lalu pada masing – masing labu tersebut tambahkan sebanyak 0,15 ml larutan FeCl3.6H2O 0,4 mgFe/ml dan secara berurutan ditambahkan sebanyak 0,15 ml; 0,25 ml; dan 0,35 ml larutan hidrokuinon 0,01 %. Setelah itu, masing-masing larutan tersebut ditambahkan dengan 1-3 tetes larutan natrium asetat 0,25 % untuk mendapatkan pH~3,5. Kemudian tambahkan 0,5 ml larutan o-fenantrolina 0,25 %. Larutan digojog hingga homogen dan didiamkan selama operating time lalu ukur serapan larutan tersebut pada rentang panjang


23

gelombang antara 450-550 nm. Dari hasil pengukuran ditentukan panjang gelombang berapa yang memberikan serapan maksimum. c.

Pembuatan kurva baku. Diambil lima buah labu ukur, lalu pada

masing-masing labu tersebut ditambahkan 0,15 ml larutan FeCl3.6H2O 0,4 mgFe/ml, dan secara berurutan ditambahkan sebanyak 0,15 ml; 0,20 ml; 0,25 ml; 0,30 ml; dan 0,35 ml larutan hidrokuinon 0,1 %. Setelah itu, masing – masing larutan ditambahkan dengan 1-3 tetes larutan natrium asetat 0,25 % untuk mendapatkan pH~3,5. Kemudian ditambahkan 0,5 ml larutan o-fenantrolina 0,25 % pada masing-masing labu. Larutan digojog hingga homogen dan didiamkan selama operating time lalu diukur serapan larutan tersebut pada panjang gelombang serapan maksimum yang diperoleh. 3. Penetapan kadar hidrokuinon dalam krim simulasi a.

Pembuatan krim simulasi. Dibuat krim simulasi dengan formula

sebagai berikut: R/

Hidrokuinon

2%

Setil alkohol

20 %

Vaselin putih

5%

Parafin cair

7%

Tween 80

7%

Gliserin

7%

Akuades

50 %.

Gliserin dan tween 80 dicampur dalam cawan porselen (i), kemudian di cawan porselen (ii) yang lain dicampurkan juga vaselin putih dan parafin cair. Sambil


24

mencampur bahan-bahan di atas, setil alkohol dimasukkan ke dalam cawan porselen (iii) dan dilelehkan diatas waterbath. Setelah semuanya meleleh, ketiga isi cawan porselen tersebut dicampur dalam suatu mortir hangat sambil dilakukan pengadukan yang cepat dan kontinyu disertai penambahan akuades hangat sedikit demi sedikit hingga terbentuk massa krim yang homogen. b.

Preparasi krim simulasi. Lebih kurang 20 mg hidrokuinon p.a.

ditimbang seksama dan dimasukkan ke dalam lebih kurang 1 g krim simulasi. Krim dan hidrokuinon diaduk hingga rata dan dimasukkan dalam labu ukur 50 ml. Krim yang mengandung hidrokuinon tersebut didispersikan dalam 25 ml campuran akuades : metanol p.a. (1:1 v/v). Kemudian labu ditutup dan digojog kuat sampai homogen. Penggojogan dilakukan selama sedikitnya 1 menit. Labu tersebut ditaruh di atas waterbath dengan suhu 60 oC selama 30 menit untuk meningkatkan proses ekstraksi. Setelah itu, labu didinginkan dan diencerkan dengan campuran akuades : metanol p.a. (1:1 v/v) hingga tanda. Ekstrak yang diperoleh disaring menggunakan kertas saring (Schleicher & Schuell REFNO:410214, berdiameter 50 mm dan ukuran pori sebesar 0,45 µm). Pengukuran dilakukan dalam kurun waktu 24 jam. c.

Penetapan kadar hidrokuinon. Sebanyak 0,075 ml larutan

hidrokuinon hasil preparasi tadi diambil dan dimasukkan ke dalam labu ukur 10 ml yang telah berisi 0,15 ml larutan FeCl3.6H2O 0,4 mgFe/ml. Lalu ditambahkan beberapa tetes larutan natrium asetat 0,25 % untuk mendapatkan pH~3,5. Setelah itu, ditambahkan 0,5 ml larutan o-fenantrolina 0,25 %. Larutan digojog hingga homogen dan didiamkan selama operating time lalu lakukan pengukuran serapan


25

larutan tersebut pada panjang gelombang serapan maksimum yang diperoleh. Lakukan replikasi sebanyak 6 kali.

F. Analisis Hasil Validitas dari metode yang dipakai dalam penetapan kadar hidrokuinon secara spektrofotometri visibel dengan pereaksi o-fenantrolina dapat ditentukan berdasarkan parameter berikut: 1. Akurasi Akurasi metode analisis dinyatakan dengan recovery yang dapat dihitung dengan cara berikut: Recovery =

Kadar Terukur x 100% Kadar Terhitung

Metode yang digunakan adalah untuk menganalisis bahan obat dengan kadar lebih dari 1 % namun kurang dari 10 %, maka dalam penelitian ini rentang recovery yang digunakan yaitu 97-103 % agar metode analisis yang dilakukan dapat dikatakan memiliki akurasi yang baik. 2. Presisi Presisis metode analisis dinyatakan dengan KV (koefisien variasi) yang dapat dihitung dengan cara berikut: KV=

Simpangan kadar terukur x 100% rerata kadar terukur

Metode ini dapat dikatakan memiliki presisi yang baik, apabila KV yang dihasilkan harus < 2,5 %. Semakin kecil standar KV yang digunakan maka presisi metode yang digunakan semakin baik.


26

3. Linieritas dan rentang Linieritas dilihat dari harga r (koefisien korelasi) hasil pengukuran seri baku hidrokuinon. Suatu metode dapat dikatakan memiliki linieritas yang baik jika r > 0,99 atau r2

0,997. Rentang ditentukan dari kadar hidrokuinon yang

digunakan dalam analisis, mulai dari kadar terkecil hingga terbesar. 4. Spesifisitas Spesifisitas ditentukan dengan membandingkan spektra serapan antara larutan baku dan sampel. Suatu metode dapat dikatakan memiliki spesifisitas yang baik jika diperoleh hasil spektra yang lebih kurang sama antara larutan baku dan sampel yang dianalisis. 5. LOD (Limit of Detection) dan LOQ (Limit of Quantitation) LOD dan LOQ dapat dihitung menggunakan rumus: LOD =

3Sy/x b

dan LOQ =

10Sy/x b

Dimana Sy/x merupakan simpangan baku residual yang diperoleh melalui akar dari jumlah (Y-Y')2 dibagi (n-2), sedangkan b merupakan slope dari persaman kurva baku.


BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Optimasi Metode Penetapan kadar hidrokuinon pada penelitian ini dilakukan dengan mengadaptasi metode penetapan kadar besi (III) menggunakan pereaksi ofenantrolina secara spektrofotometri visibel. Berdasarkan metode tersebut, hidrokuinon yang memiliki sifat sebagai reduktor akan mereduksi besi (III) menjadi besi (II) berdasarkan reaksi sebagai berikut:

2Fe3+ >>>

HO

2Fe2+

OH

O

O

2H+

Kuinon

Hidrokuinon

Gambar 5. Reaksi redoks antara ion besi (III) dan hidrokuinon.

Dalam reaksi tersebut, hidrokuinon yang berfungsi sebagai reduktor akan mengalami oksidasi menjadi kuinon, sedangkan besi (III) akan mengalami reduksi menjadi besi (II). Besi (III) yang diperoleh dari larutan FeCl3.6H2O ini harus ditambahkan berlebih agar semua hidrokuinon dapat habis bereaksi membentuk kuinon. Akan tetapi, kelebihan jumlah besi (III) yang ada di dalam larutan tidak boleh terlalu banyak sebab dapat mengganggu pada waktu pengukuran. Pada metode ini kadar hidrokuinon ditentukan dengan mengukur serapan dari senyawa kompleks yang dihasilkan dari reaksi antara besi (II) dan ofenantrolina. Reaksi yang terjadi adalah sebagai berikut:

27


28

N

Fe2+

Fe2+

3 N

N

N

o-fenantrolina >>>

3 Senyawa Kompleks [(C12H8N2)3Fe]2+

Gambar 6. Reaksi pembentukkan senyawa kompleks [(C12H8N2)3Fe]2+. Pada reaksi di atas, o-fenantrolina ditambahkan berlebih agar dapat mereaksikan semua besi (II) yang ada dalam larutan sehingga membentuk senyawa kompleks [(C12H8N2)3Fe]2+. Menurut Harris, senyawa kompleks ini paling optimal dan stabil terbentuk pada pH sekitar 3,5. Apabila pH larutan dibuat menjadi terlalu basa dapat membuat besi menjadi mengendap; sedangkan jika terlalu asam dapat menyebabkan besi (II) mudah teroksidasi menjadi besi (III) kembali. Peningkatan pH larutan dari pH 1-2 menjadi 3-4 dilakukan dengan menambahkan suatu garam bersifat basa, yaitu natrium asetat. Satu hingga tiga tetes larutan natrium asetat dapat membuat pH larutan menjadi sekitar 3,5. Seperti senyawa kompleks pada umumnya, senyawa kompleks [(C12H8N2)3Fe]2+ juga terdiri dari suatu atom pusat dan ligan. Atom pusat dari senyawa kompleks ini adalah logam besi (Fe2+), sedangkan ligannya adalah ofenantrolina. Senyawa kompleks yang terbentuk ini dapat menyerap radiasi elektromagnetik pada panjang gelombang daerah visibel, yaitu antara 380-780


29

nm. Hal ini dikarenakan terjadinya charge transfer antara atom pusat dan ligan. Ligan kaya akan elektron, yaitu memiliki atom dengan pasangan elektron bebas; sedangkan atom pusat miskin akan elektron. Ligan dapat mendonorkan elektronnya kepada atom pusat sehingga mengakibatkan adanya charge transfer dan perubahan energi pada orbital d atom pusat. Pasangan elektron bebas yang didonorkan dapat mendorong elektron tidak berpasangan yang ada pada orbital d atom pusat menjadi berpasangan. Orbital d atom pusat mengalami splitting dan perubahan energi yang mengakibatkan elektron pada orbital d tersebut mengalami eksitasi dari menuju *. Dengan adanya eksitasi n

* yang membutuhkan energi

yang kecil, maka dapat menggeser panjang gelombang dari senyawa kompleks tersebut menuju ke panjang gelombang yang lebih panjang sehingga senyawa kompleks tersebut dapat menjadi berwarna. Hal inilah yang menyebabkan senyawa kompleks [(C12H8N2)3Fe]2+ dapat menyerap radiasi elektromagnetik pada panjang gelombang daerah visibel. Akan tetapi, Skoog et al menyatakan bahwa senyawa kompleks antara besi (II) dan o-fenantrolina adalah suatu pengecualian, dimana besi (II) yang bertindak sebagai donor elektron sedangkan o-fenantrolina bertindak sebagai akseptor elektron. Hal ini sulit untuk dijelaskan sebab pada umumnya molekul yang kaya elektron akan menyumbangkan elektronnya kepada molekul yang miskin elektron bukan malah sebaliknya. 1. Penentuan Operating Time (OT) Pada metode ini terjadi reaksi kimia pembentukan senyawa berwarna, yaitu senyawa kompleks [(C12H8N2)3Fe]2+. Suatu reaksi kimia pembentukan


30

senyawa berwarna belum tentu stabil. Serapannya dapat meningkat dengan berjalannya waktu. Reaksi pembentukan senyawa berwarna dapat dikatakan sudah optimal apabila serapan dari senyawa berwarna tersebut telah stabil. Waktu pada saat serapan yang stabil inilah yang digunakan sebagai operating time atau waktu pengukuran. Penentuan operating time dilakukan dengan mengukur hubungan antara serapan larutan dan waktu pengukuran. Penentuan operating time dilakukan dengan mengukur salah satu kadar dari seri baku, yaitu digunakan kadar tengah dari seri baku (2,5 ppm). Penentuan operating time dilakukan pada panjang gelombang serapan maksimum teoritis dari senyawa kompleks [(C12H8N2)3Fe]2+, yakni pada panjang gelombang 508 nm selama 30 menit. Dari pengukuran yang dilakukan diperoleh hasil spektra sebagai berikut:

Gambar 7. Spektra operating time dari kadar tengah seri baku hidrokuinon.


31

Berdasarkan hasil spektra tersebut dapat dilihat bahwa serapan larutan telah stabil mulai dari menit ke-0 hingga menit ke-30. Hal ini menandakan bahwa reaksi kimia pembentukan senyawa kompleks [(C12H8N2)3Fe]2+ ini berlangsung dengan cepat dan optimal, sehingga pada menit ke-0 sudah diperoleh hasil serapan yang stabil. Senyawa kompleks [(C12H8N2)3Fe]2+ yang terbentuk juga stabil dalam waktu yang cukup lama, yaitu selama 30 menit. Pada penelitian ini, untuk menyamakan waktu pengukuran digunakan menit ke-10 sebagai waktu untuk mengukur serapan dari setiap larutan, baik baku maupun sampel. 2. Penentuan panjang gelombang serapan maksimum (

max)

Panjang gelombang serapan maksimum merupakan panjang gelombang dimana serapan dari suatu senyawa yang dalam hal ini adalah senyawa [(C12H8N2)3Fe]2+ sudah mencapai maksimum. Apabila pengukuran dilakukan pada panjang gelombang serapan maksimum, maka dengan adanya perubahan kecil dari kadar larutan yang hendak dianalisis dapat memberikan perbedaan hasil serapan yang besar. Dengan begitu, sensitivitas dari metode akan semakin meningkat. Selain itu, spektra serapan disekitar panjang gelombang serapan maksimum tersebut relatif datar sehingga pada kondisi tersebut hukum LambertBeer akan terpenuhi dan jika dilakukan pengukuran ulang atau replikasi, kemungkinan terjadinya kegagalan yang disebabkan oleh pengukuran ulang dan faktor lain menjadi kecil (Skoog et al, 1998). Penentuan panjang gelombang serapan maksimum dilakukan dengan mengukur panjang gelombang dari seri baku hidrokuinon dengan tiga kadar yang berbeda, yaitu kadar terkecil, tengah, dan terbesar. Pengukuran panjang


32

gelombang serapan maksimum dilakukan melalui scanning pada panjang gelombang 450 nm hingga 550 nm. Rentang panjang gelombang ini dipilih untuk melihat adakah pergeseran panjang gelombang serapan maksimum yang diperoleh dibandingkan panjang gelombang serapan maksimum teoritis. yaitu pada panjang gelombang 508 nm (Harris D.C.,1999). Dari pengukuran yang dilakukan, diperoleh hasil spektra sebagai berikut:

Gambar 8. Spektra panjang gelombang serapan maksimum ( max) tiga seri kadar larutan baku hidrokuinon (a = 1,5 ppm; b = 2,5 ppm; c = 3,5 ppm)

Berdasarkan spektra di atas, serapan maksimum dari ketiga larutan baku hidrokuinon adalah relatif sama. Pada kadar terkecil (1,5 ppm) dan tengah (2,5 ppm) diperoleh panjang gelombang serapan maksimum sebesar 510,5 nm; sedangkan pada kadar terbesar, yaitu 3,5 ppm diperoleh panjang gelombang


33

serapan maksimum sebesar 510,4 nm. Panjang gelombang serapan maksimum yang digunakan dalam pengukuran adalah 510,5 nm. Hasil ini berbeda 2,5 nm dari panjang gelombang teroritis. Menurut Farmakope Indonesia edisi IV tahun 1995, perbedaan selisih panjang gelombang serapan maksimum antara hasil teoritis dengan percobaan tidak boleh lebih dari 2 nm. Oleh karena itu, hasil yang diperoleh pada penelitian ini tidak memenuhi persyaratan Farmakope Indonesia edisi IV tahun 1995. Perbedaan alat dan kondisi percobaan antara sumber literatur yang diacu dengan yang peneliti lakukan pada penelitian ini dapat menjadi faktor penyebab timbulnya perbedaan hasil panjang gelombang ini. Namun demikian, panjang gelombang serapan maksimum yang digunakan dalam penelitian ini tetap menggunakan panjang gelombang 510,5 nm sebab setiap kali dilakukan pengukuran terhadap larutan dengan kadar berbeda, alat yang digunakan tetap memberikan hasil yang lebih kurang sama. 3. Pembuatan kurva baku Kurva baku diperoleh dengan membuat lima seri kadar dari tiga replikasi larutan baku hidrokuinon. Seri kadar baku ini dibuat dengan kadar 1,5 ppm; 2,0 ppm; 2,5 ppm; 3,0 ppm; dan 3,5 ppm. Pemilihan seri kadar ini dilakukan berdasarkan hasil optimasi, dimana dipilih kadar yang memberikan serapan antara 0,2 hingga 0,8. Menurut Mulja dan Suharman, pada rentang serapan 0,2-0,8 tersebut akan memberikan persentase kesalahan fotometrik yang kecil dan dapat diterima yaitu 0,5-1,0 %. Setelah dilakukan pengukuran dari hidrokuinon, diperoleh data sebagai berikut :

ketiga

replikasi seri baku


34

Tabel IV. Data replikasi seri baku hidrokuinon Replikasi I Replikasi II Replikasi III Kadar Serapan Kadar Serapan Kadar Serapan 1,53 ppm 0,338 1,55 ppm 0,342 1,58 ppm 0,359 2,04 ppm 0,426 2,07 ppm 0,464 2,10 ppm 0,462 2,55 ppm 0,545 2,58 ppm 0,587 2,63 ppm 0,530 3,06 ppm 0,681 3,10 ppm 0,687 3,16 ppm 0,688 3,57 ppm 0,795 3,62 ppm 0,791 3,68 ppm 0,821 A = -0,028 A = 0,014 A = -0,003 B = 0,229 B = 0,217 B = 0,219 r = 0,998 r = 0,999 r = 0,991 Persamaan Kurva Baku: Persamaan Kurva Baku: Persamaan Kurva Baku: Y=BX+A Y=BX+A Y=BX+A Y = 0,229 X – 0,028 Y = 0,217 X + 0,014 Y = 0,219 X – 0,003

Berdasarkan data tersebut, diperoleh tiga buah persamaan kurva baku dari masing-masing replikasi. Dari ketiga persamaan kurva baku yang diperoleh tersebut dipilih persamaan kurva baku yang paling linier. Linieritas menyatakan hubungan korelasi antara kadar hidrokuinon dengan serapan yang dihasilkan. Linieritas dinyatakan sebagai koefisien korelasi (r). Secara statistika, nilai r dapat dikatakan baik apabila sudah lebih besar daripada nilai rtabel dengan taraf kepercayaan dan derajat bebas tertentu. Dengan taraf kepercayaan 99% dan derajat bebas 3, maka rtabel adalah sebesar 0,959. Ketiga persamaan kurva baku di atas sudah memberikan hubungan korelasi yang baik antara kadar dan serapan sebab nilai r-nya lebih besar daripada rtabel. Persamaan kurva baku yang dipilih untuk digunakan adalah persamaan kurva baku replikasi kedua, yaitu Y = 0,217 X + 0,014 dengan nilai r = 0,999. Pemilihan ini dikarenakan nilai r dari persamaan kurva baku kedua ini paling baik dibanding yang lainnya, yaitu nilai r2

0,997,

sehingga diharapkan dapat memberikan hubungan korelasi yang baik pula antara kadar hidrokuinon dan serapan yang diperoleh. Dengan semakin meningkatnya


35

kadar hidrokuinon dalam larutan, maka serapannya juga akan meningkat secara proporsional sebab hubungan korelasi yang terjadi adalah linier. Hubungan korelasi antara kadar hidrokuinon dan serapan yang diperoleh dapat dilihat pada gambar berikut:

Kurva Baku

Absorbansi

1

y = 0,217x + 0,014 r = 0,999

0.8 0.6 0.4 0.2 0 0

1 2 3 Kadar Hidrokuinon (ppm)

4

Gambar 9. Kurva baku hidrokuinon (replikasi kedua)

B. Penentuan Kadar Hidrokuinon dalam Krim Simulasi 1. Pembuatan krim simulasi Pembuatan krim simulasi dimaksudkan sebagai perwakilan dari krim pemutih yang beredar di pasaran. Krim simulasi ini dibuat dengan tipe yang biasa ditemukan dalam krim pemutih pada umumnya, yaitu tipe minyak dalam air (M/A). Tipe ini sering digunakan sebab mudah menyebar di kulit dan kurang berminyak, sehingga membuat konsumen merasa lebih nyaman dalam menggunakannya. Krim simulasi dibuat dari bahan – bahan seperti: setil alkohol, vaselin putih, parafin cair, tween 80, gliserin, hidrokuinon, dan akuades. Krim merupakan suatu emulsi yang terdiri atas dua fase, yaitu fase air dan minyak. Fase minyak yang digunakan adalah vaselin putih, parafin cair, dan setil alkohol; sedangkan


36

fase air yang digunakan terdiri dari gliserin dan akuades. Untuk menyatukan kedua fase tersebut, maka ditambahkan suatu surfaktan yang berfungsi untuk menurunkan tegangan muka agar kedua fase dapat saling campur. Surfaktan yang digunakan adalah tween 80. Setil alkohol juga mampu bertindak sebagai surfaktan. Tween 80 merupakan surfaktan nonionik yang mampu menurunkan tegangan muka fase minyak dan air dikarenakan memiliki gugusan hidrofil dan lipofil. Gugusan hidrofil akan mengikat fase air, sedangkan gugusan lipofil akan mengikat fase minyak. Dengan demikian, sistem emulsi dalam krim dapat terbentuk. Tween 80 memiliki sifat hidrofilisitas lebih besar dibandingkan sifat lipofilisitasnya. Harga HLB (Hydrophil Lipophil Balance) tween 80 adalah ±10, sehingga sering digunakan surfaktan untuk membentuk emulsi tipa M/A. Campuran bahan-bahan ini dimaksudkan untuk mendapatkan konsistensi massa krim yang diinginkan, yaitu tidak terlalu padat dan tidak terlalu encer. Setil alkohol yang wujudnya padatan dapat berfungsi sebagai agen pengental, sehingga konsistensi dari massa krim menjadi meningkat. Selain untuk mendapatkan konsistensi yang sesuai, campuran bahan-bahan ini memiliki fungsi pada saat krim diaplikasikan ke kulit, misalnya gliserin dapat berfungsi sebagai humektan yang mampu menjaga kelembaban kulit. Oleh karena itu digunakan campuran dari bahan minyak dan juga air. Pada krim simulasi ini, hidrokuinon tidak ditambahkan pada saat pembuatan massa krim tapi ditambahkan diluar, yaitu setelah massa krim terbentuk. Hidrokuinon ditambahkan pada sejumlah massa krim yang hendak


37

dianalisis. Penambahan hidrokuinon dengan cara ini dimaksudkan agar kadar hidrokuinon yang terkandung dalam krim yang hendak dianalisis dapat lebih diketahui dengan pasti, sehingga dapat menunjang dan menjamin data parameter validitas, seperti akurasi, presisi, dan sebagainya. Berdasarkan hasil optimasi, maka pembuatan krim simulasi dilakukan dengan mencampur bahan-bahan dari fase minyak menjadi satu dengan pelelehan di atas waterbath pada suhu ±70oC. Sama halnya dengan bahan – bahan dari fase air juga dicampur menjadi satu dalam wadah yang berbeda disertai pelelehan di atas waterbath pada suhu ±70oC. Tween 80 dilelehkan bersama dalam fase air, sebab tween 80 memiliki sifat hidrofil lebih besar dibandingkan sifat lipofilnya. Setelah semuanya meleleh dan menyatu, dilakukan penggabungan kedua fase tadi (fase minyak kemudian fase air) ke dalam suatu mortir hangat disertai pengadukan yang konstan dan kontinyu, serta penambahan akuades hangat sedikit demi sedikit hingga diperoleh suatu massa krim yang baik. Pemanasan di atas waterbath dimaksudkan untuk pelelehan bahan padat dan meningkatkan energi kinetik dari masing – masing molekul penyusun sehingga dapat saling kontak dan lebih mudah campur menjadi satu. Suhu 70oC merupakan suhu optimum untuk pelelehan. Bahan padat yang digunakan adalah setil alkohol. Berdasarkan Farmakope Indonesia edisi IV, setil alkohol meleleh pada suhu 45-50 oC, sehingga suhu 70oC sudah cukup untuk melelehkan semua bahan. Suhu yang terlalu tinggi dapat mengakibatkan rusaknya bahan penyusun krim, sedangkan suhu terlalu rendah akan mengakibatkan waktu pelelehan yang semakin lama dan tidak efisien. Penggunaan mortir dan stamper yang hangat


38

dimaksudkan untuk mencegah terjadinya shock cooling, dimana terdapat perbedaan suhu yang signifikan dan dapat mengganggu stabilitas emulsi dari krim yang terbentuk. Setil alkohol yang meleleh pada suhu tinggi tadi dapat kembali memadat apabila suhu pada waktu pencampuran berubah secara drastis. Hal ini dapat membuat massa krim yang terbentuk menjadi kasar dan tidak nyaman pada waktu pengaplikasian. 2. Preparasi krim simulasi Krim simulasi tersusun atas surfaktan nonionik, yaitu tween 80 dan setil alkohol. Menurut Newburger s Manual of Cosmetic Analysis 2 nd tahun 1977, emulsi

yang

tersusun

dari

surfaktan

nonionik

dapat

di

rusak dengan menambahkan salah satu fase secara berlebih. Pada penelitian ini digunakan campuran air-metanol (1:1 v/v) untuk memecah sistem emulsi sekaligus sebagai cairan pengekstrak dari hidrokuinon. Kandungan air dalam campuran tersebut dapat memecah sistem emulsi yang ada. Jika dilihat dari kelarutan hidrokuinon, satu bagian hidrokuinon larut dalam 17 bagian air dan satu bagian hidrokuinon juga larut dalam 4 bagian alkohol (Anonim, 1999). Hidrokuinon mudah larut dalam alkohol dan air, sehingga campuran air-metanol dapat digunakan untuk menarik hidrokuinon dalam krim simulasi. Pada krim terdapat lebih dari satu komponen, maka yang tertarik ke dalam campuran air-metanol tidak hanya hidrokuinon. Bahan-bahan lain yang larut dalam air dan alkohol juga dapat ikut terekstraksi. Bahan-bahan lain yang dapat ikut terekstraksi adalah gliserin, tween 80 dan setil alkohol. Perlu diketahui bahwa yang dimaksud dengan alkohol adalah etanol dimana mengandung tidak


39

kurang dari 94,9 % v/v dan tidak lebih dari 96,0 % v/v C2H5OH pada suhu 15,56 o

C. Dalam penelitian ini digunakan metanol bukan etanol. Hal ini didasarkan pada

kepolaran bahan, dimana metanol lebih polar dibandingkan etanol. Hidrokuinon bersifat relatif polar dibandingkan setil alkohol dan tween 80 sehingga dapat lebih mudah tertarik ke dalam campuran air-metanol. Proses ekstraksi dilakukan diatas waterbath pada suhu ±60 oC selama 30 menit. Pemanasan ini dimaksudkan untuk menambahkan energi dari luar sehingga dapat meningkatkan proses ekstraksi dari krim simulasi. Waktu selama 30 menit merupakan hasil optimasi. Setelah dilakukan proses ekstraksi selesai dan suhu dari larutan sampel sudah kembali normal, dapat dilakukan proses penyaringan. Proses penyaringan dimaksudkan untuk membantu memisahkan antara fase airmetanol dengan fase minyak. Penyaringan dilakukan dengan menggunakan kertas saring berukuran pori kecil, yaitu 0,45 µm. Dengan ukuran pori ini sudah mampu menahan semua fase minyak yang tidak larut dalam campuran air-metanol. Selanjutnya, filtrat dari air-metanol dapat langsung dilakukan analisis. 3. Penetapan kadar hidrokuinon Kadar hidrokuinon ditetapkan secara spektrofotometri visibel dengan pereaksi o-fenantrolina. Prinsip metode dan reaksinya sama seperti yang dijelaskan pada bagian awal. Hidrokuinon dalam sampel akan mereduksi besi (III) menjadi besi (II). Besi (II) akan bereaksi dengan o-fenantrolina membentuk senyawa kompleks merah-jingga. Berdasarkan hasil pengukuran diperoleh hasil sebagai berikut:


40

Tabel V. Data serapan dan kadar hidrokuinon dalam sampel Replikasi Chitung (% b/b) Serapan (Y) Cukur (% b/b) I 1,98 0,660 1,98 II 1,99 0,662 1,99 III 2,03 0,681 2,05 IV 1,98 0,676 2,03 V 2,01 0,664 2,00 VI 2,00 0,665 2,00

C. Parameter Validitas Metode Analisis 1. Akurasi Akurasi dimaksudkan untuk mengetahui seberapa dekat antara hasil yang diukur menggunakan suatu metode analisis dengan hasil yang sebenarnya. Semakin sedikit selisih antara keduanya maka akurasi metode analisis semakin baik. Akurasi metode analisis dinyatakan dalam recovery. Menurut Harmita, akurasi yang baik untuk analisis bahan obat dengan kadar kurang dari 1 % dan tidak lebih dari 10 % adalah dinyatakan dalam recovery antara 97-103 %. Dari replikasi sampel yang dilakukan sebanyak enam kali, diperoleh recovery sebagai berikut: Tabel VI. Hasil recovery dari enam kali replikasi sampel Replikasi recovery I 100,00 % II 100,00 % III 100,99 % IV 102,53 % V 99,50 % VI 100,00 %

Rentang recovery yang diperoleh adalah 99,50-102,53 %. Hasil ini sudah masuk dalam range 97-103%, sehingga dapat dikatakan bahwa metode analisis


41

hidrokuinon dalam krim pemutih secara spektrofotometri visibel dengan pereaksi o-fenantrolina sudah memenuhi syarat akurasi. 2. Presisi Presisi menunjukkan keterulangan dan ketertiruan hasil yang diperoleh. Presisi dinyatakan dalam KV (koefisien variasi). Menurut Harmita, presisi suatu metode analisis untuk kadar analit

1% dikatakan baik apabila KV < 2,5 %.

Semakin kecil KV yang diperoleh, maka semakin baik presisi metode yang digunakan. Berdasarkan pengukuran yang dilakukan dari keenam replikasi sampel, diperoleh KV sebesar 0,55 %. Hasil ini menunjukkan bahwa presisi dari metode analisis hidrokuinon dalam krim pemutih secara spektrofotometri visibel dengan pereaksi o-fenantrolina sudah memenuhi syarat presisi. 3. Linieritas dan rentang Linieritas menyatakan hubungan korelasi antara kadar dan serapan. Linieritas dinyatakan sebagai koefisien korelasi (r). Semakin baik nilai r maka semakin baik korelasi antara kadar dan serapan, yaitu dengan adanya peningkatan kadar maka akan meningkatkan serapannya secara proporsional. Berdasarkan pengukuran yang dilakukan diperoleh nilai r masing-masing sebesar 0,998; 0,999; dan 0,991. Nilai r ini sudah memenuhi persyaratan APVMA tahun 2004, yaitu > 0,99 dan lebih besar dari rtabel, yaitu 0,959 (taraf kepercayaan 99% dan derajat bebas 3). Menurut Chan et al, linieritas yang baik tercapai apabila nilai r2

0,997. Dari ketiga nilai r tersebut hanya satu yang memenuhi.

Untuk rentangnya diperoleh mulai kadar hidrokuinon terkecil, yaitu 1,5 ppm


42

hingga kadar terbesar, yaitu 3,5 ppm. Dengan demikian dapat dikatakan bahwa metode analisis hidrokuinon dalam krim pemutih secara spektrofotometri visibel dengan pereaksi o-fenantrolina memiliki korelasi yang cukup baik antara kadar yang diukur dengan serapan yang dihasilkan dengan rentang antara 1,5 ppm hingga 3,5 ppm. 4. Spesifisitas Spesifisitas menunjukkan kemampuan suatu metode untuk mengukur hanya senyawa tertentu saja secara akurat dan presisi di dalam sampel yang terdiri atas senyawa lain. Menurut Harmita, spesifisitas dapat ditunjukkan dengan membandingkan hasil yang diperoleh dari sampel dengan hasil yang diperoleh dari baku. Apabila diperoleh hasil yang lebih kurang sama serta memiliki akurasi dan presisi yang baik, maka metode yang digunakan tersebut dapat dikatakan telah memenuhi kriteria spesifisitas. Dari pengukuran yang dilakukan diperoleh hasil spektra seperti pada gambar dibawah ini :

Gambar 10. Spektra serapan kompleks [(C12H8N2)3Fe]2+ dari larutan sampel (a) dan baku (b)


43

Berdasarkan hasil tersebut dapat dilihat bahwa spektra dari larutan sampel lebih kurang sama dengan spektra dari larutan baku. Kemiripan spektra ini menandakan kemiripan dari senyawa yang analisis, yaitu senyawa kompleks [(C12H8N2)3Fe]2+, baik larutan sampel maupun baku. Hal ini menandakan bahwa metode yang digunakan memiliki spesifisitas yang baik. Spesifisitas yang baik ini juga didukung dengan akurasi dan presisi yang baik pula, yaitu dengan rentang recovery antara 99,50 – 102,53 % dan KV sebesar 0,55 %. Oleh karena itu, metode spektrofotometri visibel menggunakan pereaksi o-fenantrolina pada penetapan kadar hidrokuinon dapat dikatakan memiliki spesifisitas yang baik. 5. LOD (Limit of Detection) dan LOQ (Limit of Quantitation) LOD menyatakan batas kadar terkecil yang mampu dideteksi oleh metode analisis. Berdasarkan hasil pengukuran dan perhitungan, nilai LOD yang diperoleh adalah sebesar 0,124 ppm. Jadi, kadar minimal hidrokuinon agar masih dapat terdeteksi oleh metode ini adalah sebesar

0,124 ppm. LOQ menyatakan

batas kadar terkecil yang mampu dikuantifikasi oleh metode analisis. Berdasarkan hasil pengukuran dan perhitungan, nilai LOQ yang diperoleh adalah sebesar 0, 415 ppm. Kadar yang digunakan selama pengerjaan sudah melampaui dari LOD dan LOQ, sehingga kadar tersebut dapat dideteksi dan dikuantifikasi oleh metode yang digunakan. Nilai LOD dan LOQ ini hanya digunakan sebagai informasi tambahan, sebab metode analisis ini merupakan kategori I yang menurut USP30NF25 tahun 2007 tidak membutuhkan parameter validitas LOD dan LOQ.


BAB V KESIMPULAN DAN SARAN

A. Kesimpulan Metode spektrofotometri visibel menggunakan pereaksi o-fenantrolina pada penetapan kadar hidrokuinon dalam krim simulasi memiliki akurasi, presisi, linieritas, dan spesifisitas yang baik dengan rentang kadar hidrokuinon antara 1,5 ppm hingga 3,5 ppm.

B. Saran Perlu dilakukan penetapan kadar hidrokuinon menggunakan metode pada penelitian ini terhadap sampel lain yang mengandung hidrokuinon, baik dalam bentuk sediaan yang sama maupun berbeda.

44


45

DAFTAR PUSTAKA

Anief, Moh., 2005, Ilmu Meracik Obat Teori dan Praktek, cetakan ke-12, 71-72, Gajah Mada Univercity Press, Yogyakarta Anonim, 1995, Farmakope Indonesia, Edisi IV, 6, 72, 413, 440, 1061,1066, 1180, Departemen Kesehatan R.I., Jakarta Anonim, 1996, Hydroquinone Health and Safety Guide, http://www.inchem.org/documents/hsg/hsg/hsg101.htm , diakses tanggal 6 September 2007 Anonim, 1999, Martindale The Complete Drug Reference, 32nd Ed., 1083, edited by Kathleen Parfitt, Pharmaceutical Press, London, UK. Anonim,

2001, Spectrophotometric Determination of Iron, http://rgmlab.chem.uconn.edu/teaching/chem232/Laboratory_Manual/GA21Rev201.pdf, diakses pada tanggal 6 Januari 2008

Anonim, 2003, Keputusan Kepala Badan Pengawas Obat Dan Makanan Republik Indonesia Nomor Hk.00.05.4.1745 Tentang Kosmetik, http://www.pom.go.id/, diakses pada tanggal 13 Februari 2007 Anonim, 2004, Guidelines For The Validation Of Analytical Methods For Active Constituent, Agricultural And Veterinary Chemical Products http://www.apvma.gov.au, diakses pada tanggal 1 September 2007 Anonim, 2004, Spectrophotometric Determination Iron in a Vitamin Tablet, http://www.bc.edu/schools/cas/chemistry/undergrad/gen/fall/Iron.pdf, diakses pada tanggal 22 Februari 2008 Anonim, 2005, Molecular Absorption Spectroscopy:Determination of Iron With 1,10-Phenanthroline, http://www.iupac.org/publications/pac/2003/pdf/7508x1107.pdf, diakses pada tanggal 11 Januari 2008 Anonim, 2005, Skin Whitening, http://www.health-cares.net, diakses tanggal 10 September 2007 Anonim, 2006a, Cermat Memilih Pemutih Kulit, http://dickna.blog.com/Beauty/, diakses pada tanggal 11 September 2007 Anonim, 2006b, Cermati Produk Pemutih Kulit, http://www.kompas.com, diakses pada tanggal 15 Februari 2007


46

Anonim, 2007, Public Warning/Peringatan tentang Kosmetik mengandung Bahan Berbahaya dan Zat Warna yang dilarang, http://www.pom.go.id/public/peringatan_publik/pdf/PWKosBB.pdf, diakses pada tanggal 30 Agustus 2007 Anonim, 2007, The United States Pharmacopeia 30th The National Formulary 25th, United States Pharmacopeal Convention, inc., New York. Anonim,

2008, Spectrophotometric Determination of Iron, http://www2.truman.edu/~blamp/chem222/manual/pdf/ironspec.pdf, diakses pada tanggal 24 Maret 2008

Ansel, Howard C., 1989, Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi, Edisi IV,513,515, Penerbit Universitas Indonesia, Jakarta Bassett, J., Denney, R.C., Jeffery, G.H., Mendham, J., 1994, Vogel s Textbook of Quantitative Inorganic Analysis Including Elementary Instrumental Analysis, 863-866, diterjemahkan oleh Pudjaatmaka, A.H., Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta. Chan, C.C., Lam, H., Lee, Y.C., Zhang, X., 2004, Analytical Method Validation and Instrument Performance Verification, 16, John Wiley & Sons, Inc., USA Christian, G.D., 2004, Analytical Chemistry, 6th Ed., 458, John Wiley & Sons, Inc., USA Day, R.A., Underwood, A.L., 1996, Analisis Kimia Kuantitatif, 202-206, 413-415, 417, diterjemahkan oleh Pudjaatmaka, A.H., Penerbit Erlangga, Jakarta. De Muth, J.E., 1999, Basic Statistic and Pharmaceutical Analysis, 585, Marcel, Dekker, Inc., New York, Basel Harmita, 2004, Majalah Ilmu Kefarmasian Vol.I, No.3 :Petunjuk Pelaksanaan Validasi Metode dan Cara, 117-135, Departemen Farmasi FMIPA UI, Jakarta. Harris, D.C., 1999, Quantitative Chemical Analysis, 5th Ed., 863-864, W.H. Freeman and Company, New York Mailbach. I.H., 2000, Cosmeceuticals Drugs vs Cosmetics, 123-143, edited by Peter Elsner, Marcel Dekker, Inc., New York Mulja, M. dan Hanwar, D., 2003, Prinsip-prinsip Cara Berlaboratorium Yang Baik, 71-76, Majalah Farmasi Airlangga, Surabaya


47

Senzel, Alan J. 1977, Newburger s Manual of Cosmetic Analysis, 2nd Ed.,26-28, 32-46, The Association of Official Analytical Chemists, Inc., Washington DC Suharman, Muhammad Mulja, 1995, Analisis Instrumental, 26-33, Airlangga University Press, Surabaya Skoog, D.A., West, D.M., Holler, F.J., 1994, Analytical Chemistry, An Introduction, 6th Ed., 416-418, Saunders College Publishing, Philadelphia Skoog, D.A., Holler, F.J., Nieman, T.A., 1998, Principles of Instrumental Analysis, 5th Ed., 300-302, 330-340, Saunders College Publishing, Philadelphia Voigt, R., 1994, Buku Pelajaran Teknologi Farmasi, edisi V, 335, 410-433, Gadjah Mada University Press, Yogyakarta Wenninger, J.A.,dkk., 2000, International Cosmetics Ingredient Dictionary and Handbook, 8th Ed., Vol.I, 673, The Cosmetic, Toiletry, and Fragrance Assosiation, Washington, DC


48

Lampiran 1. Tabel hasil penimbangan baku hidrokuinon dan perhitungan kadar larutan baku hidrokuinon Berat kertas Berat kertas + zat Berat kertas + zat(Analitik) Berat kertas + sisa Berat zat

Replikasi I 0,2463 gram 0,2563 gram 0,25642 gram 0,24623 gram 0,01019 gram

Replikasi II 0,2493 gram 0,2595 gram 0,25957 gram 0,24924 gram 0,01033 gram

Perhitungan Kadar Larutan Baku Hidrokuinon Replikasi I 10,19 mg 10 ml

Larutan Stok

=

Larutan Intermediet Replikasi II

= 10 ml x 1019 ppm

Larutan Stok

=

Larutan Intermediet Replikasi III

= 10 ml x 1033 ppm

Larutan Stok

=

Larutan Intermediet

= 10 ml x 1052 ppm

= 101,9 mg% = 1019 ppm

1 ml

10,33 mg 10 ml

= 103,3 mg% = 1033 ppm

1 ml

10,52 mg 10 ml 1 ml

= 101,9 ppm

= 103,3 ppm

= 105,2 mg% = 1052 ppm = 105,2 ppm

Replikasi III 0,2417 gram 0,2519 gram 0,25208 gram 0,24156 gram 0,01052 gram


49

Lampiran 2. Tabel perhitungan kadar seri larutan baku hidrokuinon dan serapan seri larutan baku hidrokuinon Seri Larutan Baku Hidrokuinon , ml Seri 1 = ( 10 ml x a|b|c) Seri 2 = ( Seri 3 = ( Seri 4 = ( Seri 5 = (

,

ml ml , ml 10 ml , ml 10 ml , ml 10 ml

Replikasi I (a = 101,9ppm) 1,53 ppm

Replikasi II (b = 103,3ppm) 1,55 ppm

Replikasi III (c = 105,2ppm) 1,58 ppm

x a|b|c)

2,04 ppm

2,07 ppm

2,10 ppm

x a|b|c)

2,55 ppm

2,58 ppm

2,63 ppm

x a|b|c)

3,06 ppm

3,10 ppm

3,16 ppm

x a|b|c)

3,57 ppm

3,62 ppm

3,68 ppm

Replikasi I Kadar Serapan 1,53 ppm 0,338 2,04 ppm 0,426 2,55 ppm 0,545 3,06 ppm 0,681 3,57 ppm 0,795 A = -0,028 B = 0,229 r = 0,998 Persamaan Kurva Baku: Y=BX+A Y = 0,229 X – 0,028

Replikasi II Kadar Serapan 1,55 ppm 0,342 2,07 ppm 0,464 2,58 ppm 0,587 3,10 ppm 0,687 3,62 ppm 0,791 A = 0,014 B = 0,217 r = 0,999 Persamaan Kurva Baku: Y=BX+A Y = 0,217 X + 0,014

Replikasi III Kadar Serapan 1,58 ppm 0,359 2,10 ppm 0,462 2,63 ppm 0,530 3,16 ppm 0,688 3,68 ppm 0,821 A = -0,003 B = 0,219 r = 0,991 Persamaan Kurva Baku: Y=BX+A Y = 0,219 X – 0,003


50

Lampiran 3. Tabel penimbangan sampel krim simulasi dan perhitungan kadar terhitung hidrokuinon dalam sampel Berat kertas Berat kertas + zat Berat kertas + zat (Analitik) Berat kertas + sisa Berat zat

Replikasi I 0,2377 gram 0,2578 gram 0,25851 gram 0,23873 gram 0,01978 gram

Replikasi II 0,2430 gram 0,2631 gram 0,26340 gram 0,24353 gram 0,01987 gram

Replikasi III 0,2400 gram 0,2604 gram 0,26032 gram 0,24004 gram 0,02028 gram

Berat kertas Berat kertas + zat Berat kertas + zat (Analitik) Berat kertas + sisa Berat zat

Replikasi IV 0,2427 gram 0,2628 gram 0,26320 gram 0,24336 gram 0,01984 gram

Replikasi V 0,2423 gram 0,2627 gram 0,26279 gram 0,24269 gram 0,02010 gram

Replikasi VI 0,2364 gram 0,2564 gram 0,25653 gram 0,23649 gram 0,02004 gram

Perhitungan kadar terhitung (Chitung) hidrokuinon dalam sampel Rumus Umum : Chitung = berat zat (mg/50ml) x

= (% b/b)

Replikasi I

Chitung = 19,78 mg/50ml x

= 1,98 % b/b

Replikasi II


= 1,99 % b/b

Replikasi III


= 2,03 % b/b

Replikasi IV


= 1,98 % b/b

Replikasi V


= 2,01 % b/b

Replikasi VI


= 2,00 % b/b


Lampiran 4. Tabel serapan sampel dan perhitungan kadar terukur hidrokuinon dalam sampel Chitung (% b/b) 1,98 1,99 2,03 1,98 2,01 2,00

Replikasi I II III IV V VI

Serapan (Y) 0,660 0,662 0,681 0,676 0,664 0,665

Cukur (% b/b) 1,98 1,99 2,05 2,03 2,00 2,00

Perhitungan kadar terukur (Cukur) hidrokuinon dalam sampel Persamaan Kurva Baku : Y = 0,217 X + 0,014 Cukur = X (ppm) Replikasi I Cukur =

0,660 0,014 0,217

x

Replikasi II Cukur =

0,662 0,014 0,217

x

Replikasi III Cukur =

0,681 0,014 0,217

x

Replikasi IV Cukur =

0,676 0,014 0,217

x

Replikasi V Cukur =

0,664 0,014 0,217

x

Replikasi VI Cukur =

0,665 0,014 0,217

x

= (% b/b)

,

, , , , , ,

x

x

= 1,98 % b/b

x

x

= 1,99 % b/b

x

x

= 2,05 % b/b

x

x

= 2,03 % b/b

x

x

= 2,00 % b/b

x

x

= 2,00 % b/b

51


Lampiran 5. Tabel recovery dan perhitungan recovery Replikasi

Hidrokuinon recovery b b Chitung (% /b) Cukur (% /b) 1,98 1,98 100,00 % 1,99 1,99 100,00 % 2,03 2,05 100,99 % 1,98 2,03 102,53 % 2,01 2,00 99,50 % 2,00 2,00 100,00 % Rata – rata recovery = 100,50 % Rentang recovery = 99,50-102,53 %

I II III IV V VI

Perhitungan recovery Rumus Umum: Kadar terukur (C

recovery = Kadar terhitung (Cukur

)

hitung )

x 100 %

Replikasi I 1,98

recovery = 1,98 x 100 % = 100,00 % Replikasi II

1,99

recovery = 1,99 x 100 % = 100,00 % Replikasi III recovery =

2,05 ,03

x 100 % = 100,99 %

Replikasi IV

2,03

recovery = 1,98 x 100 % = 102,53 % Replikasi V recovery =

2,00 ,01

x 100 % = 99,50 %

Replikasi VI recovery =

,00 ,00

x 100 % = 100,00 %

Rata – rata recovery =

100,00+100,00+100,99 +102,53+99,50+100,00 6

Rentang recovery = 99,50-102,53 %

= 100,50 %

52


Lampiran 6. Tabel KV (koefisien variasi) dan perhitungan KV Replikasi I II III IV V VI Perhitungan KV x = 2,008 SD = 0,026 SE = KV =

= 0,011 SE x

x 100 %

0,011

= 2,008 x 100 %

= 0,548 %

Cukur (ppm) 1,98 1,99 2,05 2,03 2,00 2,00

KV

0,55 %

53


54

Lampiran 7. Perhitungan LOD dan LOQ No 1 2 3 4 5 6

Chitung (X) 2,97 ppm 2,98 ppm 3,04 ppm 2,98 ppm 3,02 ppm 3,01 ppm

Serapan (Y) 0,660 0,662 0,681 0,676 0,664 0,665

Y’ 0,658 0,661 0,674 0,661 0,669 0,667

Y-Y’ (Y-Y’)2 0,002 0,000004 0,001 0,000001 0,007 0,000049 0,015 0,000225 -0,005 0,000025 -0,002 0,000004 (Y-Y’)2 = 0,000308

Persamaan kurva baku: Y = 0,217 X + 0,014 Y’ dihitung dengan memasukkan nilai X ke dalam persamaan kurva baku, sehingga diperoleh nilai Y’sebagai berikut: (1)

Y’ = 0,217 (2,97) + 0,014 = 0,658

(2)

Y’ = 0,217 (2,98) + 0,014 = 0,661

(3)

Y’ = 0,217 (3,04) + 0,014 = 0,674

(4)

Y’ = 0,217 (2,98) + 0,014 = 0,661

(5)

Y’ = 0,217 (3,02) + 0,014 = 0,669

(6)

Y’ = 0,217 (3,01) + 0,014 = 0,667

Sy/x = Sy/x =

(Y- ) n-2

0,000308 2

Sy/x = 0,009

LOD dan LOQ dapat dihitung menggunakan rumus: LOD = LOQ =

/

= /

=

3 0,009 0,217

10 0,009 0,217

= 0,124 ppm = 0,415 ppm


Lampiran 8. Foto larutan sampel dan blanko

Keterangan gambar : larutan blanko (kiri) dan sampel (kanan)

55


56

BIOGRAFI PENULIS

Leo Christi Agustoo, penulis skripsi yang berjudul “Validasi

Metode

Spektrofotometri

Visibel

menggunakan Pereaksi o-Fenantrolina pada Penetapan Kadar Hidrokuinon dalam Krim Simulasi”, lahir di Palembang pada tanggal 11 Agustus 1986 dari pasangan Bapak Chandra dan Ibu Angela Kartini, memiliki saudara laki-laki bernama Martheo Favian. Riwayat pendidikan penulis yaitu dimulai dari TK-SD-SLTP Xaverius III Palembang (1991-2001), dilanjutkan SMU Xaverius I Palembang (2001-2004) dan pada tahun 2004 melanjutkan kuliah di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta hingga selesai pada tahun 2008. Selama kuliah penulis pernah menjadi asisten praktikum Spektroskopi (2007) dan Bioanalisis (2007). Selain itu, penulis juga pernah berperan serta sebagai anggota PSF Veronika (2007) dan pernah ikut dalam kepanitiaan pelepasan wisuda serta sumpahan apoteker.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Recommend Documents