Normalisatie van methoden, wat gaat er nou echt veranderen de komende jaren
Paul in ‘t Veld, Wetenschappelijk medewerker NVWA Laura Mout, Consultant NEN
Inhoud Introductie normalisatie Veranderingen in organisme specifieke normen • Veranderingen in algemene normen • Conclusies • •
Introductie normalisatie (1) Belangrijkste commissies m.b.t. microbiologie:
ISO/TC 34/SC 9: Food products - Microbiology CEN/TC 275/WG 6: Food Analysis Microbiology of the food chain ISO/TC 34/SC 5: Food products - Milk and milk products CEN/TC 302: Milk and milk products Methods of sampling and analysis NEN: 370 009 'Microbiologie van de voedselketen' (onderdeel is de werkgroep Zuivelmicrobiologie) ISO/TC 147/SC 4: Water quality - Microbiological methods NEN: 390 020 06: 'Microbiologische parameters' 3
4
Introductie normalisatie (2) • NEN: Nederlandse norm • NPR: Nederlandse praktijkrichtlijn • NEN-EN: Europese norm, die is overgenomen als Nederlandse norm • NEN-ISO: ISO-norm, die is overgenomen als Nederlandse norm • NEN-EN-ISO: ISO-norm die Europees is overgenomen en daardoor ook binnen Nederland
5
Introductie normalisatie (3) • TS: een Technical Specification (TS) heeft een normatief karakter. Het document wordt opgesteld voor voorlopige toepassing. Een TS kan ook overgenomen worden in Nederland en heet dan bv. NPR-CEN-ISO/TS. • TR: een Technical Report (TR) heeft een informatief karakter. Het document wordt uitgegeven als het wenselijk blijkt om bepaalde informatie beschikbaar te stellen. Een TR mag ook overgenomen worden in Nederland en heet dan bv. NPR-CEN-ISO/TR 6
Veranderingen in organisme specifieke normen • Veel van de ‘nieuwe’ normen komen van het CENmandaat • CEN-mandaat normen in 2017 gereed • Omvat zowel ontwikkeling en validatie van nieuwe methoden als ook validatie van bestaande methoden • Bij de validatie meestal ook de methode geactualiseerd • Richt zich op de normen die van belang zijn in Europese wetgeving
CEN-mandaat (1) Omvat de volgende onderwerpen: • Ontwikkeling en validatie van normen: o Detectie Staphylococcen enterotoxinen (ISO 19020) o Kwantificering B. cereus braaktoxine (cereulide, ISO 18465) o Detectie en kwantificering virussen (ISO 15216-1&2) o Gehalte aan Histamine (ISO 19343)
• Validatie van CEN en ISO normen: o Detectie Cronobacter (ISO 22964) o Detectie V. paraheamolyticus + V. cholerae (ISO 21872-1)
8
CEN-mandaat (2) • Validatie van CEN en ISO normen (vervolg): o Detectie andere Vibrio’s (ISO 21872-2) o Detectie/MPN & telling Enterobacteriaceae (ISO 21528-1 & 21528-2) o Detectie & telling L. monocytogenes (ISO 11290-1 & 11290-2) o Detectie E. coli O157 (ISO 16654) o Detectie & telling Campylobacter (ISO 10272-1 & 10272-2) o Detectie Salmonella in pps (ISO 6579 annex D) o Detectie Yersinia enterocolitica (ISO 10273) 9
ISO 19020: Staphylococcen enterotoxinen Stapylococcen toxinen (type A t/m E) is onderdeel CENmandaat Gebaseerd op de EU-RL screenings methode Commercieel verkrijgbare test kits gebruikt zoals Vidas SET2 en Ridascreen SET total In de standaard komen prestatiekenmerken Voor meeste matrices dialyse van monster extract verplicht
10
ISO 18465: Bacillus cereus braaktoxine Braaktoxine (cereulide) is onderdeel CEN mandaat Voor de bepaling van het gehalte aan cereulide in levensmiddelen Gebaseerd op de LC-MS methode
11
ISO 10272: Campylobacter detectie A: bedoeld voor producten met lage aantallen campylobacters en een laag niveau van achtergrond flora en/of met gestresste campylobacters. - Ophoping in Bolton broth (5 uur 37 ⁰C + 44 uur 41,5 ⁰C) en isolatie op mCCD (44 uur 41,5 ⁰C) + tweede medium naar keus.
B: bedoeld voor producten met lage aantallen campylobacters en een hoog niveau van achtergrond flora. - Ophoping in Preston broth (24 uur 41,5 ⁰C) en isolatie op mCCD. C: direct uitplaten (op mCCD) voor producten met hoge aantallen campylobacters. 12
ISO 6888-1: Coagulase positieve Staphylococcen Deel 1 komt amendement om een nieuwe bevestigingsmethode erin op te nemen Bevestiging met behulp van steekenting op RPF plaat naast bestaande methode met plasma
13
ISO 21527: gisten en schimmels Nu 2 delen met als onderscheid de wateractiviteit van het product Deel 1 producten met aw > 0,95, uitplaten op DRBC Deel 2 producten met aw < 0,95, uitplaten op DG 18 Veel commentaar en geprobeerd te reviseren Besloten om te kijken naar de IDF en FDA-BAM methode Geen projectleider meer en weinig experts beschikbaar
14
ISO 18744: Cryptosporidium en Giardia Eerste concept is beschikbaar. Besloten om direct naar de DIS-versie te gaan Bedoeld voor bladgroenten en bessen
15
Nieuwe onderwerpen Bacillus cereus versus Bacillus thuringiensis Probleem is dat ISO 7932 geen onderscheid maakt tussen de diverse soorten van de cereus groep. B. thuringiensis wordt ook gebruikt als insecticide.
16
Veranderingen in algemene normen 17
ISO ISO ISO ISO ISO ISO ISO ISO ISO ISO
7218, algemene richtlijnen 6887 series, voorbewerking van monsters 11133, mediabereiding en controle 13307, monsterneming primaire productiefase 16140, validatie van methoden 17604, bemonstering karkassen 17648, validatie van standaard methoden 18593, monsterneming oppervlakten 19036, meetonzekerheid 20836, prestatie thermocyclers
ISO 7218: Algemene eisen en richtlijn voor microbiologische onderzoeken In 2013 is er een Amendement uitgekomen van 69 pagina’s Belangrijkste reden is om “fouten” in de huidige norm uit 2007 te corrigeren en zaken duidelijker te maken Richt zich op de hoofdstukken 5 (apparatuur), 6 (sterilisatie en desinfectie) en 10 (tellingen) Nadeel is dat er nog andere opmerkingen zijn die niet zijn meegenomen in het Amendement Hiervoor is de revisie gestart van de gehele norm (wordt kapstok norm) 18
ISO 6887 serie: Bestaat nu uit 6 delen: 1: algemeen voorbewerking (1999) 2: specifiek vlees en vleesproducten (2003) 3: specifiek vis en visproducten (2003) 4: specifiek overig (2003 + amendement 2011) 5: specifiek melk en melkproducten (2010) 6: specifiek primaire productiefase (2013) Meeste delen worden gereviseerd en beter op elkaar afgestemd Gaat ook de methode beschrijven voor het “poolen” van monsters Annex over effect van de grootte van de testportie
19
ISO 11133: mediabereiding en -controle Speciaal onderwerp voor vandaag
20
ISO 16140 (serie): validatie van methoden (1) Van ISO 16140-1 (definities) en ISO 16140-2 (validatie alternatieve methoden) loopt de FDIS-stemming momenteel Naar verwachting nog dit jaar gepubliceerd Validatie voor ‘broad range of foods’ in plaats van ‘all foods’ ISO 16140-3 gaat over methode verificatie Wat moet een laboratorium doen om aan te tonen dat een gevalideerde methode goed werkt Matrices onderzocht die een link hebben met het validatie onderzoek (vergelijking prestatiekenmerken) en naar matrices die van belang zijn voor het laboratorium Belangrijk voor accreditatie
21
ISO 16140 (serie): validatie van methoden (2) ISO 16140-4 (in-house validation) geeft werkwijze aan voor het valideren van een methode door 1 laboratorium Vergelijking mogelijk met resultaten van de referentiemethode maar ook zonder referentiemethode Opzet zowel ‘klassiek’ als m.b.v. ‘factorial design’ ISO 16140-5 (factorial design validation) is een soort uitbreiding van ISO 16140-4 met validatie d.m.v. ringonderzoek Validatiemogelijkheden met en zonder referentiemethode
22
ISO 16140 (serie): validatie van methoden (3) ISO 16140-6 (validatie van bevestigingsmethoden) omschrijft de validatie van een methode die niet start bij het levensmiddel maar bij een isolaat dat verkregen wordt uit een levensmiddel Voorbeelden van methoden zijn bv MALDI-TOF, PCR serotypering Salmonella Loopt nog volop discussie over Deels invulling van de eis vanuit ISO 7218 dat je alternatieve bevestigingsmethoden mag gebruiken wanneer aangetoond is dat ze juist werken
23
ISO 17648: validatie gestandaardiseerde methoden Omschrijft hoe de gestandaardiseerde methoden (ISO, CEN normen) gevalideerd moeten worden De prestatiekenmerken zijn weer van belang i.v.m. verificatie Momenteel loopt hierover ook de FDIS stemming zoals voor ISO 16140-1 & -2
24
ISO 19036: meetonzekerheid Is momenteel een Technical Specification Bepalen meetonzekerheid is eis voor accreditatie Toekomst wordt link gemaakt met de verificatie werkwijze (ISO 16140-3) Voorstel om de meetonzekerheid in componenten te splitsen: Analytische component (elk lab zelf vaststellen) Matrix component (correctiefactor voor inhomogeniteit) Distributie component (correctiefactor voor verdeling, bv MPN tellingen en getelde lage aantallen)
25
ISO 20836: prestaties thermocyclers Huidige Technical Specification wordt omgezet in volledige standaard Commentaren uit het verleden zullen hierin worden meegenomen Nederlands commentaar doorgegeven over variabiliteit tussen thermocyclers
26
Challengetesten Het EU-RL voor L. moncytogenes heeft een document voor het uitvoeren van challengetesten Wel binnen de EU een formeel document maar geen ISOdocument Niet alleen voor pathogenen maar ook voor bederf Mogelijk in de toekomst 2 documenten: gericht op aantonen van groei gericht op afdoding/overleving
27
Conclusies Er wordt op dit moment aan veel onderwerpen gewerkt Nederlandse experts van de overheid, wetenschap en bedrijfsleven betrokken bij zo goed als alle internationale trajecten (nog ruimte voor nieuwe geïnteresseerde experts) Impact van verandering is niet alleen door aanpassing werkwijze voor het onderzoek naar een specifiek organisme Veel meer impact van wijzigingen ‘algemene’ procedures Validatie en verificatie steeds belangrijker! Voorbewerking van monsters Zie voor meer informatie: www.nen.nl/microbiologie 28
Vragen?
29
