LIQUORDIAGNOSZTIKA Dr. Seres Erika SZTE ÁOK Klinikai Kémia Intézet Magyar Laboratóriumi Diagnosztikai Társaság (MLDT) és a Magyar Immunológiai Társaság (MIT) közös szakmai továbbképzése: „Testfolyadékok laboratóriumi vizsgálata”
2006. 04. 13.
LIQUOR CEREBROSPINALIS MINTA NYERÉSE Lumbalpunctio Cysternapunctio Kamradrain Spinaldrain
LUMBALPUNCTIO INDICATIO-CONTRAINDICATIO Indicatio: KIR gyulladásos folyamatai demyelinisatios kórképek SAH-nál, ha a CT negatív
Contraindicatio: emelkedett intracranialis nyomás komplett spinalis subarachnoidalis elzáródás véralvadási zavar és antikoaguláns kezelés gennyes gócok az LP helyén ill. bakteraemia allergia a beadandó anyagra
LIQUOR CEREBROSPINALIS PREANALITIKA 1. Páciens előkészítése (lipaemia, parallel mv.) 2. Mintavétel: frakcionált, 2-2ml/frakció
3. Minta azonosítása 4. Szállítása: friss v. centrifugált fagyasztott formában 5. Tárolása: -80 oC-on 6. Vizsgálati módszer kiválasztása
LIQUOR CEREBROSPINALIS ANALITIKA Rutin liquordiagnosztika (Sangur teszt, sejtszám (vvt, fvs)-, összfehérje-, cukor-, laktát-, ionmeghatározás, spektrofotometria) Mennyiségi fehérjeanalízis (radiális immundiffúzió, turbidimetria, nephelometria, ELISA, RIA stb.) Minőségi fehérjeanalízis (agar-elektroforézis, IEF, immunoblot) Mikrobiológiai vizsgálatok
LIQUOR CEREBROSPINALIS ANALITIKA spinalis
ventricularis
cysternalis
Víztiszta, színtelen centr. után Víztiszta, színtelen Vvt Nem tartalmaz
Víztiszta, színtelen Víztiszta, színtelen Nem tartalmaz
Víztiszta, színtelen Víztiszta, színtelen Nem tartalmaz
Fvs
1-3xM/L Ly, Mo 50-100mg/L ↑a spinalisnál
3-5xM/L Ly, Mo 150-200mg/L mint a spinalis
7.4
7.4
centr.előtt
Összfeh. Cukor Laktát pH
5-7xM/L Ly, Mo 150-450mg/L vércukor 60%-a 0.5-2.44 mmol/L 7.4
VÉRES LIQUOR PROBLÉMAKÖRE Makroszkóp. Felülúszó Vvt
arteficiális véres→víztiszta alvadék színtelen ép, csoportos, 700:1 frakciók számával ↓
SPG-415nm-nél E:0.23<
patologiás egyenletesen véres folyékony xanthochrom zsugorodott, elkülönült, leukocytaszaporulat, erythrophag, siderophag E:0.23>
RUTIN LIQUORDIAGNOSZTIKA 1. Makroszkópos értékelés (víztiszta, zavaros, xanthochrom, véres ) Sangur teszt (vér kimutatása-vvt szám<700/L) Sejtszámlálás (vvt, fvs) Cytológiai vizsgálat Spektrofotometria Összfehérjemérés Cukor- és laktát meghatározás
RUTIN LIQUORDIAGNOSZTIKA 2. SEJTSZÁMLÁLÁS
RUTIN LIQUORDIAGNOSZTIKA 3. CYTOLÓGIA
RUTIN LIQUORDIAGNOSZTIKA 4. CYTOLÓGIA
RUTIN LIQUORDIAGNOSZTIKA 5. CYTOLÓGIA
RUTIN LIQUORDIAGNOSZTIKA 6. CYTOLÓGIA
RUTIN LIQUORDIAGNOSZTIKA 7. CYTOLÓGIA
RUTIN LIQUORDIAGNOSZTIKA 8. SPEKTROFOTOMETRIA ELV: A xanthochrom liquorok abszorpciós maximuai alapján eldönthető, hogy a liquorban oxi-, met-Hgb, rövid vagy hosszú hullámhosszon abszorbeáló bilirubin van jelen. Jellemző abszorbciós maximumok: met-Hgb: 406-408nm, kisérő csúcs:540, 575nm oxy-Hgb: 412-414nm, kisérő csúcs:540, 575nm S-bilirubin: 425-430nm L-bilirubin: 460nm
RUTIN LIQUORDIAGNOSZTIKA 9. Összfehérjemérés: Festékkötésen alapuló reakciók TCA, szulfoszalicilsavas kicsapás utáni turbidimetriás nefelometriás (Biuret-módszer) Mértékegysége: liquorban: mg/L szérumban: g/L
MENNYISÉGI ANALÍZIS 1. Nem elég az összfehérjemérés Pándy-reakció (telített karbolsav) (Weichbrodt, Nonne-Apelt, Takata-Ara stb.) Mancini-féle radiális immundiffúzió, turbidimetria, nefelometria, ELISA, RIA stb. (speciális vizsgálatok (NSE, S100 protein, MBP, CEA, TPHA, ACE, TNF-alfa, citokinek, interleukinek, kötő- és neutralizáló antitestek stb.) Metodikafüggő, saját referencia tartomány!
MENNYISÉGI ANALÍZIS 2. Albuminhányados: Li-alb/Se-alb Korfüggő!
Kor QAlbx10-3
15 évig 40 évig 60 évig ≤5
≤ 6.5
≤8
IgG index: Li-IgG/Se-IgG/Li-alb/Se-alb
Metodikafüggő!
Liquor és szérum Albumin, IgG, IgA, IgM meghatározása
MENNYISÉGI ANALÍZIS 3.
MENNYISÉGI ANALÍZIS 4.
LIQUORDIAGNOSZTIKA SCLEROSIS MULTIPLEX Andersson, M., Alvarez-Cermeno, J., Bernardi, G., Cogato I., Fredman P., Fredriksen J., Fredrikson S., Gallo P., Grimaldi ML., Gronning M., Keir G., Lamers K., Link H., Magalhaes A., Massaro RA., Öhman S., Reiber H., Rönnback L., Schluep M., Schuller E., Sindic CJM., Thompson EJ., Trojano M., Wurster U: Cerebrospinal fluid in the diagnosis of multiple sclerosis: a consensus report. J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry, 1994, 57, 897-902.
LIQUORDIAGNOSZTIKA (SM) Esszenciális teszt: izoelektromos fókuszálás Kiegészítő tesztek: -A vér-liquor gát integritásának vizsgálata -Az IgG index meghatározása -A liquor sejtszám mérése Választható tesztek: -IgM meghatározás -IgA meghatározás -Szabad kappa és lambda könnyűláncok kimutatása -Vírus-specifikus antitest index
MINŐSÉGI ANALÍZIS 1. Diffuse γ-szaporulat
OGP
Normális fehérjeeloszlás
MINŐSÉGI ANALÍZIS 2.
MINŐSÉGI ANALÍZIS 3. SCLEROSIS MULTIPLEX OGP (IEF)
OGP Agarose-elfo
Normális fehérjeeloszlás
WESTERN BLOTTING IgG-re Li
Normál
Se Li Se
Azonos csíkok liquorban és szérumban
WESTERN BLOTTING IgG-re Li
Liquorra korlátozott OGB-s és járulékos szérum csíkok
Se Se Li
Se
Liquorra korlátozott oligoclonalis csíkok (OGB-s)
Klinikailag definitív SM-nél előforduló abnormális liquor gyakorisága Oligoclonalis IgG (IEF) Abnormális vér-liquor gát (VLG) Megnövekedett QIgG (IgG index) Megnövekedett sejtszám (>4/μl <35/μl) Vírus elleni AT localis synthesis Szabad κ és λ könnyűláncok ↑ Megnövekedett QIgM (IgM index) Kötő és neutralizáló antitestek
>95% 12% 70-80%
50% 94% 60-80% 30-60% 60-70%
KÖSZÖNÖM A FIGYELMET!