Metabolická příručka 2011

Metabolická příručka 2011 Laboratorní příručka

Přehled laboratorních vyšetření a doporučení pro diagnostiku dědičných metabolických poruch Indikace vyšetření Interpretace výsledků vyšetření

Ústav dědičných metabolických poruch VFN a 1. LF UK Ke Karlovu 2, 128 08 Praha 2

Autoři Hlavní editoři: prim. MUDr. Sylvie Šťastná, CSc., MBA RNDr. Václava Mašková prim. Ing. Karolína Pešková Editoři: Ing. Petr Chrastina MUDr. Eva Košťálová RNDr. Jana Ledvinová, CSc. RNDr. Lenka Dvořáková, CSc. Spolupracovníci: Mgr. Josef Bártl Mgr. Zdeněk Čánský prof. MUDr. Milan Elleder, DrSc. RNDr. Petr Hornik, Ph.D. MUDr. Eva Hrubá MUDr. Helena Jahnová doc. MUDr. Viktor Koţich, CSc. Mgr. Lucia Krouská Ing. Helena Poupětová MUDr. Ivan Šebesta, CSc. Mgr.Hana Vlášková

Biochemická laboratoř ÚDMP je akreditovaná podle normy ČSN ISO 15189:2007. Metabolická příručka 2011 je laboratorní příručka připravená v souladu s normou ČSN ISO 15189:2007. Byla vydána jako účelová publikace Všeobecné fakultní nemocnice v Praze. Zavedení systému managementu dle ISO 15189:2007 včetně tisku laboratorní příručky bylo spolufinancováno Norským finančním mechanismem a Všeobecnou fakultní nemocnicí v Praze v rámci projektu Metabolické diagnostické centrum.

Strana 2 (celkem 77)

1. Úvod Váţené kolegyně a kolegové, Metabolická příručka 2011 je laboratorní příručka, která je věnována všem ošetřujícím lékařům a odběrovým sestrám, kteří spolupracují s Ústavem dědičných metabolických poruch VFN a 1. LF UK (dále ÚDMP) při diagnostice dědičných metabolických poruch (dále DMP). Příručka byla připravena v souladu s normou ČSN EN ISO 15189:2007 a byla vydána v rámci projektu Metabolické diagnostické centrum, který je spolufinancován Norským finančním mechanismem a Všeobecnou fakultní nemocnicí v Praze. Metabolická příručka 2011 poskytuje odborné zdravotnické veřejnosti především aktuální přehled diagnostických vyšetření prováděných v ÚDMP a základní informace o indikaci vyšetření a interpretaci získaných výsledků. Příručka dále obsahuje informace týkající se DMP (symptomy klinické i laboratorní, dědičnost a incidence, obecné principy léčby, genetické poradenství a prenatální diagnostika) a uvádí základní přehled doporučené literatury a internetových odkazů. ÚDMP poskytuje diferenciálně diagnostickou expertízu z hlediska DMP v rámci laboratorního vyšetření zaslaného biologického materiálu nebo během ambulantního vyšetření v ÚDMP, a specializovanou péči o pacienty s DMP včetně monitorování kompenzace, léčby, psychologické péče, genetického poradenství a prenatální diagnostiky. Další informace jsou dostupné na www.udmp.cz. Vaše připomínky a návrhy uvítáme na e-mailové adrese [email protected] nebo [email protected]. Sylvie Šťastná Praha, březen 2011


2. Obsah 1. Úvod ................................................................................................................................................. 3 2. Obsah ............................................................................................................................................... 4 3. Zkratky ............................................................................................................................................. 6 4. Ústav dědičných metabolických poruch VFN a 1. LF UK .............................................................. 8 5. Dědičné metabolické poruchy – jejich charakteristika, dědičnost, incidence a symptomy ........... 12 5.1 Charakteristika DMP................................................................................................................ 12 5.3 Incidence DMP ........................................................................................................................ 13 5.4 Akutní klinické symptomy u DMP .......................................................................................... 13 5.6 Klinické symptomy u DMP ..................................................................................................... 14 5.7 Biochemické symptomy u DMP .............................................................................................. 15 5.8 Hematologické symptomy u DMP ........................................................................................... 16 6. Laboratorní diagnostika DMP ........................................................................................................ 17 7. Manuál pro odběr primárního vzorku ............................................................................................ 18 7.1 Poţadavek na vyšetření DMP - ţádanka .................................................................................. 18 7.2 Dodatečná vyšetření ................................................................................................................. 18 7.3 Materiál k laboratornímu vyšetření v ÚDMP .......................................................................... 19 7.4 Skladování vzorků.................................................................................................................... 20 8. Preanalytické procesy v Biochemické laboratoři ........................................................................... 21 8.1 Kritéria pro odmítnutí vzorku nebo ţádanky ........................................................................... 21 8.2 Vyšetřování ve smluvních a spolupracujících laboratořích ..................................................... 21 9. Vydávání výsledků a komunikace s Biochemickou laboratoří ...................................................... 22 9.1 Hlášení výsledků v kritických intervalech ............................................................................... 22 9.2 Informace o vydávání výsledků ............................................................................................... 22 9.3 Změny výsledků a nálezů ......................................................................................................... 23 9.4 Interval od dodání vzorku k vydání výsledku .......................................................................... 23 9.5 Statimové vyšetření .................................................................................................................. 24 9.6 Standardní vyšetření a konzultační činnost ............................................................................. 25 9.7 Řešení stíţností a reklamací ..................................................................................................... 27 10. Přehled laboratorních vyšetření ................................................................................................... 28 10.1 Metabolické vyšetření na úrovni metabolitů .......................................................................... 28 10.2 Metabolické vyšetření na úrovni enzymů .............................................................................. 29 10.3 Metabolické vyšetření na úrovni DNA .................................................................................. 33 10.4 Metabolické vyšetření na úrovni tkání ................................................................................... 36 10.5 Novorozenecký screening DMP ............................................................................................ 38 10.6 Postmortální vyšetření DMP .................................................................................................. 38 11. Léčba DMP .................................................................................................................................. 39 12. Genetické poradenství a prenatální diagnostika u DMP .............................................................. 40 13. Zdroje odborných informací ........................................................................................................ 41 14. Abecední seznam laboratorních vyšetření metabolitů prováděných v ÚDMP ............................ 42 Aminokyseliny (AMK) kvantitativně v séru/plazmě ..................................................................... 42 Aminokyseliny (AMK) kvantitativně v moči ................................................................................ 43 Aminokyseliny (AMK) kvantitativně v likvoru............................................................................. 46 Biotinidáza kvalitativně ................................................................................................................. 46 Biotinidáza kvantitativně ............................................................................................................... 47 Disulfidy......................................................................................................................................... 47 Fenylalanin a tyrosin ...................................................................................................................... 48 Galaktitol ........................................................................................................................................ 48 Galaktóza/galaktóza-1-fosfát ......................................................................................................... 49 Globotriaosylceramid ..................................................................................................................... 49 Glykogen ........................................................................................................................................ 50 Strana 4 (celkem 77)

Guanidinoacetát (GAA), kreatin (CR) a kreatinin (kreat.) ............................................................ 50 Homocitrulin .................................................................................................................................. 51 Homocystein celkový..................................................................................................................... 52 3-Hydroxybutyrát ........................................................................................................................... 53 Karnitin volný, celkový, acylovaný, poměr acylovaný/volný karnitin v séru ............................... 54 Karnitin volný, celkový, acylovaný, poměr acylovaný/volný karnitin v moči .............................. 55 -Ketokyseliny .............................................................................................................................. 56 Kreatinin v séru, plazmě ................................................................................................................ 56 Kreatinin v moči............................................................................................................................. 57 Kyselina fenylpyrohroznová .......................................................................................................... 58 Kyselina metylmalonová................................................................................................................ 58 Kyselina močová ............................................................................................................................ 58 Kyselina močová - Index podle Kaufmana (IK) ............................................................................ 60 Kyselina močová - Index podle Stapletona (IS) ............................................................................ 60 Kyselina močová - Exkreční frakce kyseliny močové EFKM ......................................................... 61 Kyselina orotová ............................................................................................................................ 61 Kyselina sialová ............................................................................................................................. 62 Laktát a pyruvát ............................................................................................................................. 63 Mukopolysacharidy semikvantitativně (glykosaminoglykany) ..................................................... 64 Mukopolysacharidy kvantitativně (glykosaminoglykany) ............................................................. 64 Mukopolysacharidy kvalitativně – elektroforéza (glykosaminoglykany) ..................................... 65 Oligosacharidy, sialyloligosacharidy ............................................................................................. 66 Organické kyseliny v moči ............................................................................................................ 67 Organické kyseliny v séru/plazmě ................................................................................................. 67 Pteriny ............................................................................................................................................ 68 Puriny a pyrimidiny ....................................................................................................................... 68 Redukující látky ............................................................................................................................. 69 Sacharidy........................................................................................................................................ 70 Sfingolipidy.................................................................................................................................... 70 Siřičitany ........................................................................................................................................ 70 Sukcinylaceton ............................................................................................................................... 71 Sukcinylaminoimidazolkarboxamidribosid (SAICAr) .................................................................. 71 Sulfatidy ......................................................................................................................................... 72 Tandemová hmotnostní spektrometrie (MS/MS) aminokyseliny a acylkarnitiny ......................... 72 Thiosírany kvalitativně .................................................................................................................. 73 Thiosírany kvantitativně ............................................................................................................... 73 Velmi dlouhé mastné kyseliny (VLCFA) ...................................................................................... 74 15. Metabolické vyšetření pro samoplátce ......................................................................................... 75


3. Zkratky AC ADA ADSL AFLP AGAT AMK AMP APRT BTD cbl CBS cDNA CADASIL CK CoA CPT CR CRN CRTR CS CT DHPR DMP DNA DS EDTA EFKM ery FC fib FJHN GAA GABA GAG GALT GAMT GC GC/MS gDNA GSD HDL HELLP HHH HPA HPLC HPTLC HPRT HS ch

acylkarnitin adenosyldeamináza adenylosukcinátlyáza acute fatty liver of pregnancy argininglycinamidinotransferáza aminokyselina adenosinmonofosfát adeninosforibosyltransferáza biotinidáza kobalamin cystathionin -syntáza kódující DNA cerebral autosomal dominant arteriopathy with subcortical infarcts and leukoencephalopathy kreatinkináza koenzym A karnitinpalmitoyltransferáza kreatin kreatinin přenašeč kreatinu chondroitinsulfát počítačová tomografie dihydropteridinreduktáza dědičné metabolické poruchy deoxyribonukleová kyselina dermatansulfát etylendiamintetraacetát exkreční frakce kyseliny močové erytrocyty volný karnitin fibroblasty familiární juvenilní hyperurikemická nefropatie guanidinoacetát -aminobutyrát glykosaminoglykany galaktóza-1-fosfát uridyltransferáza guanidinoacetátmetyltransferáza plynová chromatografie plynová chromatografie/hmotnostní spektrometrie genomická DNA glykogenóza lipoproteiny s vysokou denzitou hemolysis, elevated liver enzyme levels, low platelet count hyperamonémie, hyperornithinémie, homocitrulinurie hyperfenylalaninémie vysokoúčinná kapalinová chromatografie vysokoúčinná tenkovrstevná chromatografie hypoxantinfosforibosyltransferáza heparansulfát odběr krve do kyseliny chloristé Strana 6 (celkem 77)

IgD IK IS ISSD JIRP k kp l leu 1. LF UK LCHAD LPI lym m MCAD MPS MR MS/MS MTHFR NAD NADH NCL NK OTC OpenLIMS p PABA PCR Phe PKU PNP PRPPs RDS RT s SAICAr SCID SIDS t TC TG TLC TRIS Tyr ÚDMP UMPS VFN VLCFA

imunoglobulin D index podle Kaufmana index podle Stapletona infantilní porucha se střádáním volné kyseliny sialové jednotka intenzívní a resuscitační péče krev krevní papírek, suchá krevní kapka likvor (mozkomíšní mok) leukocyty 1. lékařská fakulta Univerzity Karlovy v Praze 3-hydroxyacyl-CoA dehydrogenáza mastných kyselin s dlouhým řetězcem intolerance bílkovin s lysinurií lymfocyty moč acyl-CoA dehydrogenáza mastných kyselin se středně dlouhým řetězcem mukopolysacharidóza; mukopolysacharidy magnetická rezonance tandemová hmotnostní spektrometrie metylentetrahydrofolátreduktáza nikotinamidadenindinukleotid redukovaný NAD neuronální ceroidlipofuscinóza nesráţlivá krev ornithintranskarbamoyláza Laboratorní informační a manaţerský systém Stapro s.r.o. plazma kyselina paraaminobenzoová polymerázová řetězová reakce fenylalanin fenylketonurie purinnukleosidfosforyláza fosforibosylpyrofosfátsyntetáza respiratory distress syndrome pokojová teplota sérum sukcinylaminoimidazolkarboxamidribotid severe combined immunodeficiency sudden infant death syndrome tkáně celkový karnitin triacylglyceridy tenkovrstevná hromatografie trihydroxymetylaminometan tyrosin Ústav dědičných metabolických poruch VFN a 1. LF UK uridinmonofosfátsyntáza Všeobecná fakultní nemocnice v Praze velmi dlouhé mastné kyseliny


4. Ústav dědičných metabolických poruch VFN a 1. LF UK Tabulka 1: Ústav dědičných metabolických poruch Název pracoviště Ústav dědičných metabolických poruch VFN a 1. LF UK Adresa pracoviště 128 08 Praha 2, Ke Karlovu 2 Doc. MUDr. Viktor Koţich, CSc. Přednosta [email protected] TF 224 967 679 MUDr. Sylvie Šťastná, CSc., MBA Primář [email protected] klinického úseku TF 224 967 710 Ing. Karolína Pešková Primář [email protected] laboratorního úseku TF 224 967 225 p. Petra Vetešníková Sekretariát [email protected] TF 224 967 710 RNDr. Václava Mašková Manaţer kvality [email protected] Biochemické laboratoře TF 224 967 647 Eva Klímová Vedoucí laborantka [email protected] TF 224 967 712 Terezie Paterová Staniční sestra [email protected] ambulance TF 224 967 670 Lékař Konzultace TF 224 967 710 lékařská konzultace v běţnou pracovní dobu TF 725 739 992 lékařská konzultace pro statim metabolické Lékař Pohotovost vyšetření mimo běţnou pracovní dobu TF 224 967 670 Ambulance dohoda o termínu ambulantního vyšetření budova A2 přízemí TF 224 967 707 Centrální příjem příjem materiálu pro všechny laboratoře materiálu budova A2 přízemí TF 224 967 109 Laboratoř pro konzultace o novorozeneckém screeningu novorozenecký [email protected] screening DMP budova A2 přízemí TF 224 967 710 konzultace o moţnosti vyšetření, informace o výsledcích Biochemická laboratoř vyšetření metabolitů a vybraných enzymatických vyšetření, lékařská konzultace budova C3 2. patro TF 224 967 032 Enzymologická konzultace o moţnosti vyšetření, informace o výsledcích laboratoř enzymatických vyšetření lysosomálních chorob budova D 1. patro Laboratoř DNA TF 224 967 701 konzultace o moţnosti vyšetření diagnostiky budova A2 přízemí Laboratoř patologie TF 224 967 690 Strana 8 (celkem 77)

DMP

Laboratoř tkáňových kultur Fax E-mail WWW stránka Provozní doba

konzultace o moţnosti vyšetření, informace o výsledcích histologického, histochemického, imunohistochemického a elektronmikroskopického vyšetření tkání pro diagnostiku DMP budova A2 přízemí TF 224 967 710 konzultace o zaloţení nebo předání tkáňové kultury 224 967 081 [email protected] – sekretariát [email protected] – novorozenecký screening www.udmp.cz Ambulance a Centrální příjem materiálu: pondělí-středa 7:30-16:00, čtvrtek 7:30-17:00, pátek 7:30-15:00 V případě statimových vyšetření poskytuje Biochemická laboratoř po předchozí telefonické domluvě další rozšířený provoz.

Ústav dědičných metabolických poruch VFN a 1. LF UK v Praze (ÚDMP) ÚDMP je společné pracoviště Všeobecné fakultní nemocnice v Praze a 1. lékařské fakulty Univerzity Karlovy v Praze. Pracoviště se věnuje problematice dědičných metabolických poruch (DMP) - diagnostice, monitorování kompenzace, léčbě včetně dietního poradenství a psychologické péče, genetickému poradenství, prenatální diagnostice, výzkumu a vývoji a výuce. ÚDMP poskytuje diferenciálně diagnostickou expertízu z hlediska DMP.

1. Pracoviště Všeobecné fakultní nemocnice v Praze Základem činnosti zdravotnického pracoviště je laboratorní diagnostika DMP na různých úrovních (metabolit, enzym/protein, tkáň/buňka, gen) v Biochemické laboratoři, Enzymologické laboratoři, Laboratoři DNA diagnostiky a Laboratoři patologie DMP tak, aby byla DMP jednoznačně identifikována a bylo moţno v případě potřeby zajistit prenatální diagnostiku. Ambulance poskytuje diferenciálně diagnostickou expertízu u pacientů s podezřením na DMP a specializovanou péči o pacienty s DMP včetně léčby, psychologické péče, genetického poradenství a prenatální diagnostiky. Veškeré aktivity pracoviště směřují k rozšiřování a zkvalitňování diagnostiky DMP a k zajištění specializované péče o diagnostikované pacienty a jejich rodiny. Pracovníci se podílejí na celoţivotním vzdělávání lékařů a jiných zdravotnických pracovníků. Biochemická laboratoř Biochemická laboratoř provádí laboratorní vyšetření na úrovni metabolitů a enzymů. V rámci selektivního screeningu (tj. u pacientů s příznaky, které vedou k podezření na DMP) je moţno diagnostikovat cca 120 DMP. V laboratoři je zavedeno 48 kvalitativních, kvantitativních a profilových vyšetření metabolitů, stanovujeme aktivitu 9 enzymů pro diagnostiku deficitu biotinidázy, klasické galaktosémie, jaterních glykogenóz a poruch metabolismu purinů. V rámci populačního screeningu laboratoř provádí od 1.10.2009 novorozenecký screening 10 vybraných DMP (kromě hyperfenylalaninémie/fenylketonurie téţ dalších 9 aminoacidopatií, organických acidurií a poruch oxidace mastných kyselin). Provádíme téţ screening maternální hyperfenylalaninemie u těhotných. Kaţdoročně rozšiřujeme spektrum prováděných laboratorních metod. V laboratoři je zaveden laboratorní informační systém OpenLIMS.


Zavedli jsme pohotovostní služby (1 lékař, 1 analytik-biochemik, 2 laborantky), kdy poskytujeme moţnost telefonické konzultace s lékařem a provádíme 6 statimových vyšetření (aminokyseliny v séru, organické kyseliny v moči, aminokyseliny a acylkarnitiny tandemovou hmotnostní spektrometrií pro diagnostiku vybraných aminoacidopatií, poruch oxidace mastných kyselin a organických acidurií v suché krevní kapce, galaktóza a galaktóza-1-fosfát v suché krevní kapce, galaktitol v moči, kyselina orotová v moči). Je tak zajištěno metabolické vyšetření 24 hodin denně po celý rok pro diagnostiku DMP s akutním průběhem a pro monitorování jiţ diagnostikovaných pacientů při akutní dekompenzaci. Viz kapitola 9.5 Statimové vyšetření. Pracoviště je jedním z 5 center, které organizuje systém externí kontroly kvality (ERNDIM Diagnostic Proficiency Testing, tj. testování diagnostické zdatnosti) pro biochemicko-genetické laboratoře Evropy a Asie. Pracoviště se s vysokou úspěšností účastní 7 systémů externí kontroly kvality (1x český - SEKK a 6x zahraniční systémy - ERNDIM, UK NEQAS, INSTAND, MPS QAS, CDC, DGKL-RfB), které pokrývají všechny základní oblasti diagnostiky DMP. Ročně se jedná o 118 kontrolních vyšetření. Biochemická laboratoř je vedena v Registru klinických laboratoří NASKL. Biochemická laboratoř je akreditována Českým institutem pro akreditaci podle normy ČSN EN ISO 15189:2007 - Zdravotnické laboratoře – Zvláštní poţadavky na kvalitu a způsobilost. Zavedení systému managementu podle ISO 15189 bylo spolufinancováno Norským finančním mechanismem a VFN v rámci projektu Metabolické diagnostické centrum. Biochemická laboratoř ÚDMP VFN byla/je spoluřešitelem Výzkumného záměru MZ ČR Diagnostika a léčba geneticky podmíněných poruch I a II, řešitelem grantů IGA, Evropského sociálního fondu a Norského finančního mechanismu. Pro vzdělávací účely byl vydán překlad 2 knih: Hoffman GF a kol.: Dědičné metabolické poruchy (Grada 2006) Fernandes J a kol.: Diagnostika a léčba dědičných metabolických poruch (Triton 2008) Enzymologická laboratoř Laboratoř se specializuje na enzymatickou diagnostiku lysosomálních chorob pro diagnostiku postnatální i prenatální. Na pracovišti je zavedeno 27 enzymatických metod, zátěţové testy v buněčné kultuře koţních fibroblastů a screeningové enzymatické metody v suché kapce krve. Laboratoř se od roku 2006 úspěšně zapojuje do systému externí kontroly kvality QAESGLD/ERNDIM. Laboratoř DNA diagnostiky Laboratoř provádí molekulárně genetickou diagnostiku vybraných DMP a jiných genetických chorob. V současné době pracoviště můţe analyzovat více neţ 50 genů pro potřeby postnatální i prenatální diagnostiky. Laboratoř se od roku 2005 úspěšně účastní externí kontroly kvality, kterou pro evropské laboratoře organizuje německá společnost DGKL-RfB. Laboratoř patologie DMP Laboratoř provádí histologická, histochemická, imunohistochemická a elektronmikroskopická vyšetření tkání pro diagnostiku DMP. Laboratoř tkáňových kultur Laboratoř provádí dlouhodobou kultivaci koţních fibroblastů a zmrazení buněčných linií pro potřeby postnatální i prenatální diagnostiky. Strana 10 (celkem 77)

2. Pracoviště 1. lékařské fakulty Univerzity Karlovy Pracoviště se věnuje zejména výzkumné činnosti v oblasti DMP a jiných genetických chorob. Pracoviště tvoří 5 výzkumných laboratoří: Laboratoř genomiky a bioinformatiky, Laboratoř biochemické genetiky, Laboratoř pokročilých mikroskopických technik a experimentálních tkáňových kultur, Laboratoř modelových systémů a Laboratoř biologie a patologie oka. Výsledky základního výzkumu mají přímý praktický výstup v podobě rozšiřování DNA diagnostiky. Pracovníci se také podílejí na pregraduální a postgraduální výuce na 1. lékařské fakultě UK, Vysoké škole chemicko-technologické a Přírodovědecké fakultě UK.


5. Dědičné metabolické poruchy – jejich charakteristika, dědičnost, incidence a symptomy 5.1 Charakteristika DMP Dědičné poruchy metabolismu (DMP) jsou skupinou několika set různých onemocnění, která mají společné rysy: Tabulka 2: Charakteristika DMP Rys Charakteristika příčiny DMP deficit enzymu, jeho aktivátoru, transportního proteinu, základní příčina je na úrovni DNA důsledky hromadění substrátu a nedostatek produkt v příslušných metabolických deficitu cestách, coţ vede k systémovým nebo tkáňově specifickým projevům onemocnění dědičnost DMP nejčastěji autosomálně recesivní, vzácněji gonosomálně recesivní, maternální nebo autosomálně dominantní výskyt DMP incidence jednotlivých DMP je nízká, ale celková incidence DMP je relativně vysoká (1:1000* aţ 1:600**); skutečná incidence je pravděpodobně ještě vyšší a řada pacientů tak diagnóze DMP uniká** věk DMP jsou diagnostikovány hlavně v novorozeneckém a kojeneckém věku, ale mohou se projevit v jakémkoliv věku symptomy DMP mohou mít symptomy postiţení jakéhokoliv orgánu či tkáně DMP průběh můţe být chronický, progresívní i akutní diagnostika probíhá na úrovni metabolitů, enzymů, DNA a tkání DMP léčba DMP DMP jsou dobře léčitelné, omezeně léčitelné i neléčitelné prenatální je moţná, pokud byla u probanda stanovena přesná diagnóza; diagnostika provádí se vyšetřením metabolitů v plodové vodě, aktivity enzymu nebo molekulárně genetickým vyšetřením v choriových klcích nebo amniocytech * Scriver, C.R., et al. (eds.): The Metabolic and Molecular Bases of Inherited Disease. 7th. Ed. New York, McGraw-Hill 1995 ** Hoffmann GF: Selective screening for inborn errors of metabolism-past, present and future Eur J Pediatr. 1994;153(7 Suppl 1):S2-8

Tabulka 3: Rozdělení DMP dle patofyziologie Skupina DMP Charakteristika Příklady DMP s komplexními hromadění lysosomální poruchy molekulami komplexních molekul peroxisomální poruchy v buněčném poruchy glykosylace kompartmentu DMP intoxikačního akumulace toxických aminoacidopatie typu substrátů před organické acidurie blokem; intolerance cukrů akutní nebo progresívní symptomy intoxikace Strana 12 (celkem 77)

Léčba převáţně neléčitelné enzymoterapie léčba dietní a eliminační prevence katabolismu JIRP

poruchy energetického metabolismu

glykogenózy poruchy glykolýzy poruchy glukoneogeneze poruchy Krebsova cyklu poruchy oxidace mastných kyselin poruchy respiračního řetězce

poruchy produkce nebo utilizace energie

léčitelné aţ neléčitelné

5.2 Dědičnost DMP Tabulka 4: Dědičnost DMP Dědičnost Autosomálně recesivní

Zastoupení 90 %

X-vázaná

6%

Mitochondriální (maternální)

2%

Autosomálně dominantní

2%

Příklad DMP fenylketonurie/hyperfenylalaninémie z deficitu fenylalaninhydroxylázy deficit ornithinkarbamoyltransferázy adrenoleukodystrofie poruchy energetického metabolismu mitochondriálního původu porfyrie

5.3 Incidence DMP Tabulka 5: Incidence DMP DMP Incidence DMP celkově 1:1000* aţ 1:600** jednotlivé DMP 1:10 000 aţ 1:1 000 000 * Scriver, C.R., et al. (eds.): The Metabolic and Molecular Bases of Inherited Disease. 7th. Ed. New York, McGraw-Hill 1995 ** Hoffmann GF: Selective screening for inborn errors of metabolism-past, present and future Eur J Pediatr. 1994;153(7 Suppl 1):S2-8 Tabulka 6: Příklady DMP s incidencí DMP Fenylketonurie/hyperfenylalaninémie z deficitu fenylalanin hydroxylázy Leucinóza

Incidence 1: 4500 (Irsko) aţ 1:100 000 (Finsko) 1:8 000 (ČR) 1:176 (Mennonité, Pensylvánie, USA) aţ 1:290 000 (Nová Anglie, USA)

5.4 Akutní klinické symptomy u DMP Tabulka 7: Akutní klinické symptomy u DMP Systém Symptomy Akutní symptomy v graviditě HELLP syndrom, AFLP Akutní symptomy hypotermie, porucha sacího reflexu, problémy s krmením, opisthotonus, u novorozence abnormální pohyby, RDS, apnoické pauzy, ikterus, sepse E. coli Akutní celkové symptomy ataky dehydratace, abnormální zápach moči a potu, epistaxe, krvácivé projevy, hemolýza, tromboembolické příhody, horečka, Reyův a Reyelike syndrom, časné úmrtí, neočekávané úmrtí, náhlé úmrtí Akutní neurologické letargie, dráţdivost, poruchy vědomí, koma, křeče, infantilní spasmy, symptomy myoklonie, stroke-like episody, extrapyramidové příznaky, ataxie, Strana 13 (celkem 77)

Akutní psychiatrické symptomy Akutní gastrointestinální symptomy Akutní renální symptomy Akutní svalové symptomy Akutní kardiální symptomy Akutní respirační symptomy Akutní kostní symptomy Akutní koţní symptomy Akutní endokrinní symptomy

cerebellární symptomy poruchy chování, hyperaktivita, sebepoškozování, psychotické symptomy, autistické rysy neprospívání, ataky zvracení, intolerance některé sloţky potravy, bolesti břicha, opakované průjmy, hepatomegalie, ikterus, jaterní dysfunkce aţ selhání, akutní pankreatitida renální kolika, abnormální zápach moči, abnormální barva moči, akutní selhání ledvin svalová slabost, intolerance cvičení, svalové křeče, únavnost, bolesti svalů kardiomyopatie dilatační, arytmie, poruchy vedení vzruchu převodním systémem, srdeční selhání respirační insuficience, ataky hyperventilace bolesti kostí, osteoporóza fotosenzitivita adrenální insuficience, diabetes mellitus

5.5 Symptomy akutních DMP při rutinním biochemickém a hematologickém vyšetření Tabulka 8: Symptomy akutních DMP při rutinním laboratorním vyšetření Vyšetření Nálezy Zápach moči atypický zápach moči Glukóza hypoglykémie, hyperglykémie, glykosurie Redukující látky melliturie Ketokyseliny pozitivní ketokyseliny v moči Amoniak hyperammonémie Acidobazická rovnováha metabolická alkalóza, metabolická acidóza, laktátová acidóza, ketoacidóza, respirační alkalóza Anion gap zvýšená hodnota Laktát hyperlaktacidémie, hyperlaktacidurie Ketolátky hyperketotické stavy, ketonurie Transaminázy (ALT, AST) hepatocelulární dysfunkce Bilirubin celkový a přímý hyperbilirubinémie Myoglobin myoglobinémie/myoglobinurie Kreatinkináza (CK) zvýšená aktivita Krevní obraz anémie, leukopenie, neutropenie, trombocytopenie, pancytopenie, retikulocytóza, trombocytóza Hemokoagulace koagulopatie

5.6 Klinické symptomy u DMP Tabulka 9: Klinické symptomy u DMP Systém Symptomy hypotrofie fétu, hypokineze aţ akineze fétu, neimunní hydrops fetalis, Symptomy v graviditě polyhydramnion, HELLP syndrom, AFLP malformace, hypotrofie, mikrocefalie, hypotermie, porucha sacího reflexu, Symptomy u problémy s krmením, opisthotonus, abnormální pohyby, RDS, apnoické novorozence pauzy, ikterus, sepse E. coli dysmorfie, stigmatizace, projevy střádání, hypotrofie, ataky dehydratace, Celkové symptomy abnormální zápach moči a potu, epistaxe, krvácivé projevy, hemolýza, tromboembolické příhody, horečka, opakované infekce, SCID, únavový Strana 14 (celkem 77)

Neurologické symptomy

Psychiatrické symptomy Oční symptomy

Symptomy postižení sluchu Gastrointestinální symptomy

Renální symptomy Svalové symptomy Kardiální symptomy Respirační symptomy Kostní symptomy Kožní symptomy Endokrinní symptomy

syndrom, opoţděná puberta, Reyův a Reye-like syndrom, časné úmrtí, neočekávané úmrtí, náhlé úmrtí oligofrenie, mentální retardace, psychomotorická retardace, regres psychomotorického vývoje, demence, opoţděný vývoj řeči, letargie, dráţdivost, poruchy vědomí, koma, křeče, záchvatovité onemocnění, infantilní spasmy, myoklonie, stroke-like ataky, extrapyramidové příznaky, hypotonie, hypertonie, corpus callosum - agenese nebo hypoplasie, makrocefalie, mikrocefalie, atrofie cerebrální, atrofie kortikální, leukodystrofie, demyelinizace, ataxie, cerebellární symptomy, cerebellární atrofie nebo hypoplázie, hyporeflexie, areflexie, hyperreflexie, periferní neuropatie poruchy chování, hyperaktivita, sebepoškozování, psychotické symptomy, autistické rysy porucha zraku aţ slepota, oftalmoplegie, abnormální oční pohyby, strabismus, nystagmus, ptóza víčka, glaukom, korneální zákaly a depozita, opacity čočky aţ katarakta, ektopie čočky, myopie, retinitis pigmentosa, třešňová skvrna na očním ozadí, atrofie optiku postiţení sluchu aţ hluchota, hyperacusis makroglossie, hyperplasie gingiv, gotické patro, neprospívání, ataky zvracení, intolerance některé sloţky potravy, bolesti břicha, chronický průjem, ileus, hepatomegalie, splenomegalie, ikterus, cholestáza, steatosa jater, adenomy jater, cirhóza jater, karcinom jater, ascites, portální hypertenze, jaterní dysfunkce aţ selhání, cholelitiáza, akutní pankreatitida renální kolika, urolitiáza/nefrolitiáza, nefrokalcinóza, tubulopatie, abnormální barva moči, abnormální zápach moči, nefromegalie, renální cysty, akutní selhání ledvin, chronické selhání ledvin myopatie, svalová slabost, intolerance cvičení, svalové křeče, únavnost, bolesti svalů, atrofie svalů, selhání respiračních svalů, ragged-red fibres kardiomyopatie hypertrofická, kardiomyopatie dilatační, endokardiální fibroelastóza, vrozené srdeční vady, získané postiţení chlopní, arytmie, poruchy vedení vzruchu převodním systémem, srdeční selhání intersticiální pneumopatie, respirační insuficience, ataky hyperventilace malý vzrůst, opoţdění růstu, vysoký vzrůst, dysproporcionální kostra, kyfóza, hyperlordóza, křivice, arthritis, dysostosis multiplex, bolesti kostí, osteoporóza, arachnodaktylie, kontraktury, tečkovité kalcifikace, syndaktylie angiokeratomy, hyperkeratóza, fotosenzitivita, zvýšené ochlupení, sníţené ochlupení, světlé vlasy, pili torti, trichorrhexis nodosa kongenitální adrenální hyperplasie, adrenální insuficience, diabetes mellitus, hypotyreóza, hypoglykémie, kalcifikace nadledvin

5.7 Biochemické symptomy u DMP Tabulka 10: Biochemické symptomy u DMP Vyšetření Nálezy Glukóza hypoglykémie, hyperglykémie, glykosurie Amoniak hyperammonémie Acidobazická rovnováha metabolická alkalóza, metabolická acidóza, laktátová acidóza, ketoacidóza, respirační alkalóza Laktát hyperlaktacidémie, hyperlaktacidurie Kyselina močová hyperurikémie, hypourikémie Ketolátky hyperketotické stavy, hypoketonémie nalačno, Strana 15 (celkem 77)

Transaminázy Bilirubin celkový a přímý Cholesterol Triacylglyceroly Kreatinin Myoglobin Oxaláty Sacharidy

ketonurie hepatocelulární dysfunkce hyperbilirubinémie hypercholesterolémie, hypocholesterolémie hypertriacylglycerolémie, pseudo-hypertriacylglycerolémie hypokreatininémie, hyperkreatininémie myoglobinémie, myoglobinurie hyperoxalurie melliturie

5.8 Hematologické symptomy u DMP Tabulka 11: Hematologické symptomy u DMP Vyšetření Nálezy Krevní obraz anémie, anémie megaloblastická, anémie makrocytární leukopenie, neutropenie, trombocytopenie, pancytopenie, retikulocytóza, trombocytóza Hemokoagulace koagulopatie Cytologie vakuoly v lymfocytech, pěnovité buňky v kostní dřeni, AdlerReilyho granula v neutrofilech


6. Laboratorní diagnostika DMP Diagnóza DMP musí být vždy potvrzena i laboratorním vyšetřením. Včasná diagnóza DMP někdy umoţní vyuţití současných terapeutických postupů. Diagnóza u probanda by měla být stanovena na takové úrovni, aby mohla být později provedena prenatální diagnostika (bez ohledu na to, zda si rodina aktuálně přeje další těhotenství nebo ne). Vyšetření DMP probíhá na různých úrovních: na úrovni metabolitu, enzymu/proteinu, DNA nebo tkáně/buňky (vyšetření histologické, histochemické, imunohistochemické a elektronmikroskopické). Vyšetření na vyšší úrovni (enzymy, DNA, tkáně) jsou indikována přísně individuálně. Tabulka 12: Vyšetření pro diagnostiku DMP Vyšetření Obsah vyšetření novorozenecký screening 10 DMP tandemovou hmotnostní Postnatální screening DMP spektrometrií (MS/MS) podle Věstníku MZ ČR vyšetření 2009, Částka 6 selektivní vyšetření osob, které mají symptomy vedoucí screening DMP k podezření na DMP vyšetření ke zjištění, zda je plod postiţen DMP, Prenatální vyšetření která byla prokázána v rodině; je moţné pouze tehdy, pokud byla u probanda stanovena přesná diagnóza vyšetření v případě SIDS, náhlého, neočekávaného Postmortální vyšetření nebo neodvratitelného úmrtí, pokud není dokončena diagnostika DMP


7. Manuál pro odběr primárního vzorku 7.1 Požadavek na vyšetření DMP - žádanka S kaţdým vzorkem biologického materiálu musí být do laboratoře dodána řádně vyplněná ţádanka – Poţadavek na vyšetření dědičných metabolických poruch (moţno stáhnout na www.udmp.cz). Vzorky jsou do laboratoře doručovány obvykle zdravotnickým pracovníkem VFN, svozovou sluţbou nebo sanitou, zásilkovou sluţbou, případně kurýrem. Tabulka 13: Identifikace pacienta a biologického materiálu na žádance Údaj 1 rodné číslo; u pojištěných cizinců číslo pojištěnce, u samoplátců datum narození, u novorozenců dosud bez rodného čísla datum narození (neplatí pro novorozenecký screening) 2 příjmení a jméno 3 kód zdravotní pojišťovny 4 základní diagnóza, event. ostatní diagnózy (kódem MKN-10, podle platné Metodiky pro pořizování a předávání dokladů VZP ČR) 5 identifikace odesílajícího lékaře a pracoviště: jméno, příjmení a podpis, IČP, odbornost; kontaktní údaje (tel., adresa); razítko 6 poţadovaná vyšetření nebo podrobná epikríza včetně stravy, farmakoterapie a transfuze 7 druh primárního vzorku (moč, sérum, krevní papírek, likvor …….) 8 datum a čas odběru 9 identifikace osoby provádějící odběr (jméno, příjmení, podpis) 10 souhlas ţadatele s úpravou a/nebo doplněním indikace lékařemkonzultantem ÚDMP v odůvodněném případě na základě diferenciálně diagnostické expertízy 11 poţadavek na statimové vyšetření Nezbytnou identifikaci biologického materiálu před přidělením laboratorního čísla tvoří vţdy nejméně jméno a příjmení pacienta a rodné číslo (nebo datum narození pacienta), jinak vzorek nemůţe být přijat do laboratoře. Pro molekulárně genetické vyšetření je nezbytný řádně vyplněný a podepsaný Informovaný souhlas vyšetřované/ho (zákonného zástupce) s genetickým laboratorním vyšetřením (moţno stáhnout na www.udmp.cz) . Laboratoř na ţádanku doplní datum a čas přijetí vzorku do laboratoře (eviduje automaticky OpenLIMS po přijetí ţádanky do systému), druh a mnoţství přijatých primárních vzorků a jméno, příjmení a podpis přijímajícího laboranta.

7.2 Dodatečná vyšetření Indikace vyšetření můţe být v odůvodněném případě upravena nebo doplněna lékařemkonzultantem ÚDMP na základě diferenciálně diagnostické expertízy. Ţadatel můţe dodatečně doindikovat další vyšetření v případě, ţe je v laboratoři k dispozici dostatečné mnoţství primárního vzorku. Primární vzorky jsou v laboratoři uchovávány při teplotě -18°C do dokončení všech indikovaných vyšetření, minimálně 1 měsíc. Strana 18 (celkem 77)

7.3 Materiál k laboratornímu vyšetření v ÚDMP Tabulka 14: Materiál k vyšetření Materiál Zkratka Odběr Transport Poznámky Sráţlivá krev k 7 ml ţilní krve při RT neprodleně dopravit do (odběrový vakuový systém laboratoře zkumavka bez úpravy) nemrazit Sérum s 7 ml plné ţilní krve, stočit při 2000 g 0-8oC nejlépe na ledu, při (pro analýzu aminokyselin nejlépe do transportu nad 4 hod 60 min. po odběru), separovat sérum zamrazit a zkumavku označit - sérum Nesráţlivá krev nk 7 ml ţilní krve do EDTA při RT neprodleně dopravit do (fialový, růţový uzávěr) laboratoře nemrazit o Plazma p 7 ml ţilní krve do EDTA, (fialový, 0-8 C nejlépe na ledu, při růţový uzávěr) - stočit při 2000 g transportu nad 4 hod (pro analýzu aminokyselin nejlépe do zamrazit 60 min. po odběru), separovat plazmu a zkumavku označit - plazma Suchá krevní kp filtrační papír typ Whatman 903 při RT před transportem nechat kapka se 4 krevními skvrnami - ø1 cm (plná uschnout při pokojové (novorozenecká krev). teplotě (nesmí schnout screeningová Kruhy vyznačené na testovací nad zdrojem tepla); kartička) kartičce musí být plně prosáknuty vloţit do sáčku aţ po (viditelně z přední a zadní strany dokonalém usušení kartičky). Kartička nesmí být nasáknuta plnou krví opakovaně. Likvor l minimálně 1 ml (ve sterilní zkumavce 0-4oC ihned dopravit do (mozkomíšní bez úpravy) laboratoře nejlépe na mok) ledu, při transportu nad 4 hod zamrazit o Moč m 20 ml, nejlépe ranní moči do 2 0-8 C nejlépe na ledu, při močových zkumavek, nepouţívat transportu nad 4 hod nádobky od léčiv zamrazit Moč ranní celá mc moč ranní celá porce včetně 0-8oC nejlépe na ledu, při porce včetně sedimentu transportu nad 4 hod sedimentu; zamrazit Deproteinát krve ch odběr heparinizované krve do při RT společný odběr pro v kyselině dvojnásobného objemu studené 8% stanovení laktátu, chloristé kys. chloristé, centrifugovat, stáhnout pyruvátu a 3deproteinát hydroxybutyrátu Erytrocyty ery 3-5 ml nesráţlivé krve do EDTA při RT po předchozí telefonické (fialový, růţový uzávěr) dohodě zaslat do 12.00 hod., v pátek do 10,00 hod.; vţdy poslat i kontrolní vzorek od nepříbuzné osoby Leukocyty leu 7 ml nesráţlivé krve do EDTA při RT po předchozí telefonické (fialový, růţový uzávěr) dohodě zaslat do 12.00 Strana 19 (celkem 77)

Materiál

Zkratka

Lymfocyty

lym

Fibroblasty Bioptický a autoptický materiál

fib t

Odběr

Poznámky hod., v pátek do 10,00 hod.; vţdy poslat i kontrolní vzorek od nepříbuzné osoby 7 ml nesráţlivé krve do EDTA RT po předchozí telefonické (fialový, růţový uzávěr) dohodě zaslat do 12.00 hod., v pátek do 10,00 hod.; vţdy poslat i kontrolní vzorek od nepříbuzné osoby kultura fibroblastů při RT po předchozí dohodě vzorky jater, myokardu, kůţe, svalu suchý led zamraţený materiál na nebo histochemické a tekutý elektronmikroskopické dusík vyšetření Transport

RT Genomová DNA RNA na cDNA

2,7 ml nesráţlivé krve do EDTA odebrané za sterilních podmínek cDNA 7 ml nesráţlivé krve do EDTA odebrané za sterilních podmínek RT = pokojová teplota DNA

materiál fixovaný v 10% pufrovaném paraformaldehydu

RT RT

nechladit

7.4 Skladování vzorků Skladování před vyšetřením Poţadavky na skladování biologického materiálu před doručením vzorku do laboratoře jsou popsány v Tabulce 14: Materiál k vyšetření. Skladování po vyšetření Zkumavky s materiálem se uchovávají při teplotě min. -18°C do dokončení všech indikovaných vyšetření, minimálně 1 měsíc. Po odeslání výsledků je biologický materiál určen k likvidaci (není-li určeno jinak). Novorozenecké testovací kartičky jsou skladovány laboratoří po dobu min. 5 let. S biologickým materiálem je třeba vţdy zacházet v souladu se zásadami bezpečnosti práce. Kaţdý biologický vzorek je nutné povaţovat za potenciálně infekční materiál.


8. Preanalytické procesy v Biochemické laboratoři 8.1 Kritéria pro odmítnutí vzorku nebo žádanky Tabulka 15: Které žádanky nebo vzorky může laboratoř odmítnout Odmítnutá žádanka nebo vzorky 1 ţádanka s biologickým materiálem, na které chybí nebo jsou nečitelné základní údaje (rodné číslo, příjmení a jméno, typ zdravotní pojišťovny, IČP a razítko odesílajícího lékaře, základní diagnóza) a není moţné je doplnit 2 ţádanka s poţadavky na vyšetření, které laboratoř neprovádí ani nezajišťuje (viz Seznam vyšetření) 3 ţádanka ambulantního pacienta od subjektu s odborností lůţkového oddělení 4 ţádanka nebo odběrová nádobka znečištěná biologickým materiálem 5 nádoba s biologickým materiálem, kde není způsob identifikace materiálu z hlediska nezaměnitelnosti dostatečný 6 biologický materiál, kde zjevně došlo k porušení doporučení o preanalytické fázi 7 neoznačený biologický materiál 8 biologický materiál bez ţádanky, pokud nelze ţádným způsobem jednoznačně dohledat ţadatele o vyšetření Při nedostatečné identifikaci vzorku nebo ţádanky je ţadatel vţdy kontaktován k doplnění chybějících informací.

8.2 Vyšetřování ve smluvních a spolupracujících laboratořích Biochemická laboratoř vyuţívá sluţeb spolupracujících laboratoří v ČR i v zahraničí, které ověřují diagnózu na úrovni enzymu/proteinu a DNA. Vedení laboratoře odpovídá za volbu a sledování kvality spolupracujících laboratoří a zajišťuje, aby spolupracující laboratoř odpovídala poţadavkům na kompetenci k provádění poţadovaných vyšetření. Tabulka 16: Seznam spolupracujících laboratoří v ČR Název laboratoře Adresa FN Brno Černopolní 9 Interní hematoonkologická klinika, Brno Centrum molekulární biologie a genové terapie 625 00 Sekce vrozených genetických chorob


Telefon 532 234 623

9. Vydávání výsledků a komunikace s Biochemickou laboratoří 9.1 Hlášení výsledků v kritických intervalech Hlášení kritických hodnot u patologických výsledků řeší lékař-konzultant ve spolupráci s analytikem-biochemikem, odpovídajícím za danou metodu. O hlášení těchto výsledků rozhoduje lékař-konzultant vţdy s individuálním přístupem ke konkrétnímu pacientovi. Patologické výsledky v kritických intervalech jsou hlášeny ţadateli lékařem nebo analytikem (pouze v případě pacientů Kliniky dětského a dorostového lékařství VFN a pacientů ambulance ÚDMP). Hlásí se pouze u nově zachycených případů. Výjimkou jsou statimová vyšetření, jehoţ výsledky je oznámeny ihned po ukončení vyšetření, i kdyţ nejsou patologické. Současně s hlášením se provede do OpenLIMS zápis - datum a čas, hlášeno co, komu a zkratka pracovníka, který hlášení provedl. Tabulka 17: Kritické hodnoty v Biochemické laboratoři Vyšetření Kritické hodnoty Aminokyseliny v séru, plazmě, moči, likvoru profil suspektní pro DMP Galaktitol v moči > 200 Galaktóza /Galaktóza-1-fosfát v krvi Homocystein celkový v plazmě, séru Kreatinin v séru, plazmě

> 0,5 / > 0,5 < 7; > 50 > 300 (> 150 u dětí do 15 let) > 600 > 10

Kyselina močová v séru, plazmě Kyselina orotová v moči Laktát v krvi Laktát v likvoru Organické kyseliny v moči Tandemová hmotnostní spektrometrie aminokyseliny a acylkarnitiny

>5 >4 profil suspektní pro DMP profil suspektní pro DMP

Jednotky mmol/mol kreatininu mmol/l umol/l umol/l umol/l mmol/mol kreatininu mmol/l mmol/l

9.2 Informace o vydávání výsledků Písemné vydávání výsledků Výsledkové listy jsou vydávány vţdy písemně. Výsledkové listy jsou tištěny v kompletní podobě a zasílány poštou, zdravotnickým pracovníkem VFN, svozovou sluţbou, sanitou nebo kurýrem na adresu ţadatele. Méně často jsou vydávány nekompletní výsledkové listy, opatřené podpisem lékaře ÚDMP, na kterých je zřejmé, ţe jsou některé metody rozpracované, a tudíţ nehotové. Telefonické sdělování výsledků Výsledky pacientů vyšetřovaných v laboratoři jsou telefonicky sdělovány jen ve výjimečných případech – pouze ošetřujícímu lékaři na základě ověření znalostí o stavu vyšetřovaného pacienta a jeho jednoznačné identifikace. Výdej výsledků pacientovi je moţný pouze na základě přání ošetřujícího lékaře případně pacienta samoplátce. Pacient musí předloţit průkaz totoţnosti (občanský průkaz, pas nebo průkaz pojištěnce).


9.3 Změny výsledků a nálezů Byla-li chyba zjištěna v identifikační části výsledkového listu, jsou identifikační údaje opraveny a je vytištěn nový výsledkový list, který je zaslán ţadateli. Záznam o opravách je uveden v OpenLIMS. Byla-li zjištěna chyba ve výsledku, je chybný výsledek opraven a je vytištěn nový výsledkový list, který je zaslán ţadateli. Ţadatel je poţádán o vrácení původní nesprávné verze výsledkového listu. Pracovník laboratoře se za provedenou chybu laboratoře omluví. O této neshodě je veden v laboratoři Záznam o řízení neshod a nápravném opatření a tyto záznamy jsou pravidelně přezkoumávány a vyhodnocovány vedením laboratoře. V pracovní době vyřizuje tyto záleţitosti vedoucí analytického úseku nebo manaţer kvality nebo osoba pověřená, během pohotovostní sluţby je vyřizuje slouţící analytik-biochemik nebo lékař. Záznam o opravách je uveden v OpenLIMS.

9.4 Interval od dodání vzorku k vydání výsledku Dostupnost výsledků jednotlivých vyšetření selektivního screeningu je uvedena v kapitole 14. Abecední seznam laboratorních vyšetření metabolitů prováděných v ÚDMP. Maximální doba odezvy laboratoře pro vydání kompletních výsledkových listů z laboratoře je 1 měsíc. Výsledky vyšetření novorozeneckého screeningu jsou známy max. do 3 pracovních dní od dodání novorozenecké screeningové kartičky do laboratoře. Do této doby jsou všechny patologické výsledky po opakování telefonicky nahlášeny a řešeny. Statim/Vitální indikace: ordinace laboratorního vyšetření v situaci spojené s ohroţením ţivota, kdy výsledek vyšetření můţe mít vliv na přeţití pacienta. Vzorky na vyšetření mají absolutní přednost, je moţné zastavit analýzy jiných vyšetření. Transport vzorku je předem ohlášen. Výsledky jsou hlášeny telefonicky ihned po dokončení statim vyšetření. Přednost/Akutní vyšetření: ordinace laboratorního vyšetření v situaci, kdy výsledek vyšetření můţe zásadním způsobem ovlivnit rozhodování o další péči o nemocného. Vzorky na vyšetření mají přednost před ostatními vzorky a zpracovávají se v nejbliţším dohodnutém termínu, závislém na moţnostech laboratoře.


9.5 Statimové vyšetření Statimové metabolické vyšetření provádíme u pacientů, u nichţ vzniklo podezření na akutně probíhající DMP. Můţe jít o první nebo opakovanou ataku dekompenzace. Tabulka 18: Přehled statim vyšetření Metoda Materiál Aminokyseliny sérum nebo plazma separované nejlépe do 60 min. po odběru krev nesráţlivá příp. sráţlivá likvor moč Organické kyseliny moč plazma krev nesráţlivá Tandemová hmotnostní suchá krevní kapka na papíře spektrometrie pouze typu Whatmann 903, (aminokyseliny, acylkarnitiny) screeningová novorozenecká kartička (krevní papírek, KP) Kyselina orotová moč Galaktitol moč suchá krevní kapka na papíře Galaktóza/galaktóza-1-fosfát pouze typu Whatmann typ 903, screeningová novorozenecká kartička (krevní papírek, KP) moč -Ketokyseliny Kreatinin moč

Minimální množství 1 ml 2 ml 1 ml 4 ml 4 ml 1 ml 2 ml min. 2 krevní skvrny Ø 1 cm 4 ml 2 ml min. 2 krevní skvrny Ø 1 cm

2 ml 2 ml

Pokud ponecháváte indikaci vyšetření na našem lékaři, posílejte ke statim metabolickému vyšetření vždy minimálně 5 ml krve, 20 ml moči a krevní papírek se 4 krevními skvrnami Ø 1 cm. Je vhodné konzultovat zvaţované statimové vyšetření s lékařem-konzultantem. Telefonické kontakty jsou uvedeny v Tabulce 19. Tabulka 19: Telefonické kontakty pro statimové vyšetření TF Kontakt 224 967 710 lékařská konzultace pro vyšetření metabolitů v běţnou pracovní dobu 725 739 992 lékařská konzultace pro vyšetření metabolitů mimo běţnou pracovní dobu 224 911 453 lékařská konzultace pro transport a statimové metabolické vyšetření dítěte vyţadujícího intenzivní péči - Jednotka intenzivní a resuscitační péče (JIRP) Kliniky dětského a dorostového lékařství VFN, Praha 2, Ke Karlovu 2


Během konzultace budete dotazováni na následující informace: Tabulka 20: Přehled informací, potřebných pro statim vyšetření Nynější onemocnění Jde o 1. nebo opakovanou ataku akutní dekompenzace? Jaké jsou klinické symptomy - neurologické, gastrointestinální, kardiální, svalové, hematologické, jiné? Jde o progresivní onemocnění? Je postiţen 1 orgán (systém) nebo jde o systémové postiţení ? Okolnosti, které mohou ovlivnit interpretaci výsledků metabolického vyšetření: klinický stav pacienta – hypoxie, křeče, svalová aktivita, hepatopatie, nefropatie, multiorgánové selhání výţiva – příjem bílkovin/kg/den, MCT olej, hladovění, obezita, postprandiální odběr, veganská strava, kojené dítě, odmítání některé sloţky stravy, parenterální výţiva – aminokyseliny/kg/den, tukové emulze/kg/den medikace – uveďte veškerou medikaci během posledního týdne, zvl. valproát, vitamíny aj. technika odběru a zpracování vzorku – kontaminace, hemolýza Osobní anamnéza perinatální anamnesa, prodělaná onemocnění, stavy akutní dekompenzace Laboratorní nálezy a moč – atypický zápach, barva, ketolátky, redukující látky výsledky zobrazovacích krev – krevní obraz, anion gap, glykémie, Astrup, hemokoagulační vyšetření, vyšetření bilirubin, transaminázy, amoniak, laktát, CK sonografická vyšetření, rtg, CT, MR Rodinná anamnéza stejné či podobné projevy onemocnění u sourozenců či jiných příbuzných, kosanguinita, nejasná úmrtí zvl. v dětském věku Identifikace pacienta jméno a příjmení, rodné číslo, pojišťovna Identifikace ošetřujícího jméno a příjmení, název a adresa pracoviště, telefon, IČZ, odbornost, číslo lékaře diagnosy Poté bude domluven poţadovaný materiál na vyšetření, doporučená metabolická vyšetření, transport materiálu do laboratoře a sdělení výsledků. Informace o pacientovi i ošetřujícím lékaři uveďte téţ do ţádanky (moţno stáhnout na www.udmp.cz).

9.6 Standardní vyšetření a konzultační činnost 1. Sami chcete indikovat potřebná vyšetření Pokud jste dobře orientováni v diagnostice DMP, indikujte přímo konkrétní vyšetření metabolitů. Enzymatická vyšetření a molekulárně genetická vyšetření jsou prováděna pouze po předchozí telefonické dohodě (Tabulka 21). Potřebný materiál uvádí Tabulka 14. Tabulka 21 : Kontakty pro enzymatické a molekulárně genetické vyšetření Vyšetření Laboratoř Telefon Kontaktní osoba Biochemická 224 967 710 Lékař-konzultant Enzymatické vyšetření laboratoř Enzymologická 224 967 032 Ing. Helena Poupětová, laboratoř 224 967 034 Ing. Jitka Honzíková Molekulárně genetické Laboratoř 224 967 701 RNDr. Lenka Dvořáková, CSc. vyšetření DNA 224 967 680 Mgr. Hana Vlášková diagnostiky Strana 25 (celkem 77)

Nesráţlivou krev na enzymatické a molekulárně genetické vyšetření doručte do 12.00 hod. (v pátek do 10.00 hod.). Při enzymatickém vyšetření posílejte vţdy současně s krví pacienta i krev kontrolní, ne od příbuzného, odebíranou a transportovanou za stejných podmínek jako krev pacienta. 2. Žádáte indikaci vyšetření od lékaře-konzultanta Vyšetření můţe na Vaše přání indikovat lékař našeho pracoviště. Tento lékař má roli konziliárního lékaře, který pacienta nevyšetřoval, a má tedy jen omezené informace. Vyšetření je zaměřeno pouze na problematiku dědičných metabolických poruch. Metabolické vyšetření je jen součástí komplexního vyšetření pacienta, které provádí ošetřující lékař. Pro diagnostiku DMP navrhujeme níţe uvedený diagnostický algoritmus. Pokud poţadujete statim vyšetření v případě akutní dekompenzace – viz Statimové metabolické vyšetření. Tabulka 22: Fáze diagnostiky DMP Pořadí Fáze diagnostiky 1. Vyslovení podezření na DMP na základě symptomu (symptomů) klinického, laboratorního nebo zjištěného zobrazovacími metodami 2. Zhodnocení nynějšího onemocnění jde o progresivní onemocnění ? jde o regres psychomotorického vývoje nebo demenci ? je postiţen 1 orgán (systém) nebo jde o systémové postiţení ? okolnosti, které mohou ovlivnit interpretaci výsledků metabolického vyšetření: klinický stav pacienta – hypoxie, křeče, svalová aktivita, hepatopatie, nefropatie, multiorgánové selhání, výţiva – příjem bílkovin event. aminokyselin/kg/den, parenterální výţiva, MCT oleje, hladovění, obezita, postprandiální odběr, veganská strava, kojené dítě, odmítání některé sloţky stravy, medikace – uveďte veškerou medikaci během posledního týdne, zvl. valproát, vitamíny aj. technika odběru a zpracování vzorku – kontaminace, hemolýza, speciální poţadavky na odběr má stanovení laktátu a homocysteinu 3. Zhodnocení osobní anamnézy - perinatální anamnéza, prodělaná onemocnění, stavy akutní dekompenzace, hospitalizace, ambulantní vyšetření, progrese onemocnění 4. Zhodnocení rodinné anamnézy - stejné či podobné projevy onemocnění u sourozenců či jiných příbuzných, kosanguinita, nejasná úmrtí zvl. v dětském věku 5. Komplexní zhodnocení fenotypu pacienta = cílené hledání symptomů klinických, laboratorních, zobrazovacích aj. viz přehled symptomů DMP 6. Epikríza = souhrnné lékařské zhodnocení pacienta 7. Zaslání materiálu na metabolické vyšetření: materiál: 3 ml sráţlivé krve nebo 2 ml séra (separovaného nejlépe do 60 min. po odběru); pro analýzu aminokyselin je nejvhodnější 1 ml plazmy separované do 60 min. po odběru) Suchá krevní kapka na papíře Whatmann typ 903 - 4 krevní skvrny Ø 1 cm 20 ml moče (ranní nebo ze sběru) min.1 ml likvoru řádně vyplněná žádanka: údaje o pacientovi – jméno a příjmení pacienta, rodné číslo kód pojišťovny, číslo diagnoóz, výstiţná epikríza údaje o ošetřujícím lékaři – jméno a příjmení lékaře název, adresa a telefon pracoviště, IČP Strana 26 (celkem 77)

8.

9.

10.

Můţete téţ ţádat: telefonickou konzultaci s lékařem-konzultantem v Biochemické laboratoři TF 224 967 710 konziliární ambulantní vyšetření – pouze po předchozím objednání TF 224 967 670, s sebou přinést moč (ranní moč nebo sběr moči, minimálně 15 ml) a dokumentaci s epikrízou Indikace vyšetření Při 1. vyšetření vzorků provádíme tzv. screeningová vyšetření: moč - kreatinin, -ketokyseliny, disulfidy, kyselina fenylpyrohroznová, mukopolysacharidy semikvantitativně, redukující látky sérum - biotinidáza suchá krevní kapka – MS/MS aminokyseliny a acylkarnitiny. Další vyšetření indikuje lékař-konzultand. Interpretace vyšetření – viz jednotlivé metody konzultace s lékařem konzultandem je moţná na tel. 224 967 710

Konzultační činnost laboratoře je prováděna denně lékařem-konzultandem většinou telefonicky, a to během celé fáze vyšetřování vzorku pacienta s podezřením na DMP. Lékař-konzultand indikuje laboratorní metody, zjišťuje telefonicky doplňující informace o vyšetřovaném pacientovi, sděluje případné patologie ošetřujícímu lékaři a navrhuje léčbu. Lékařkonzultand můţe také doporučit ambulantní vyšetření pacienta v ÚDMP nebo hospitalizaci dítěte na Klinice dětského a dorostového lékařství VFN nebo dospělého na lůţkovém odd. VFN. Pracovníci laboratoře pořádají semináře o DMP a jejich diagnostice s cílem zlepšit jejich diagnostiku v ČR.

9.7 Řešení stížností a reklamací Stíţnost klinických pracovníků, klientů a jiných stran je podnětem pro zlepšení práce naší laboratoře. Z tohoto důvodu řešení stíţností věnuje laboratoř velkou pozornost. Součástí komunikace jsou rovněţ kladné i záporné informace od uţivatelů laboratorních sluţeb, podněty od pracovníků, pacientů nebo ostatních uţivatelů. Způsob podání stíţností a připomínek: písemně (dopis, e-mail), ústně (telefonicky nebo osobně). Stíţnosti adresujte manaţerovi kvality. Jakýkoliv z výše uvedených způsobů je podnětem pro řešení stíţností a jsou přijatá nápravná opatření, která mají zabránit opakování stíţnosti. Termíny pro vyřízení stíţností: Pokud stíţnost není řešena ihned, je termín na vyřízení stíţnosti 30 kalendářních dnů. V tomto termínu oznámí odpovědný pracovník ţadateli výsledek šetření. V případě, ţe nelze v tomto termínu stíţnost dořešit, informuje stěţovatele o dosavadním postupu (např. znalecký posudek).


10. Přehled laboratorních vyšetření 10.1 Metabolické vyšetření na úrovni metabolitů Vyšetření na úrovni metabolitů zahrnuje vyšetření intermediátů metabolismu lipidů, aminokyselin, sacharidů, oligosacharidů, glykosaminoglykanů, purinů, pyrimidinů a dalších látek. Součástí vyšetření je i biochemická interpretace nálezů, coţ vyţaduje informace o pacientově věku, rodinné a osobní anamnéze, aktuální symptomatologii klinické, laboratorní aj., stravě aj. výţivě, medikaci a předpokládané diagnóze. Metody lze rozdělit na kvalitativní, semikvantitativní, kvantitativní a profilové. Tabulka 23: Seznam vyšetření – Metabolity Vyšetření (metabolit) Aminokyseliny kvantitativně Disulfidy Fenylalanin a tyrosin Galaktitol Galaktóza/galaktóza-1-fosfát Globotriaosylceramid Glykogen Guanidinoacetát, kreatin a kreatinin Homocitrulin Homocystein celkový 3-Hydroxybutyrát Karnitin volný, celkový, acylovaný -Ketokyseliny Kreatinin Kyselina fenylpyrohroznová Kyselina metylmalonová Kyselina močová Kyselina orotová Kyselina sialová Laktát Mukopolysacharidy orientačně Mukopolysacharidy kvantitativně Mukopolysacharidy kvalitativně - elektroforéza Oligosacharidy, sialyloligosacharidy Organické kyseliny Pteriny Puriny a pyrimidiny Pyruvát Redukující látky Sacharidy Sfingolipidy Siřičitany

Materiál p, s, l, m m nk m kp mc ery m m p, s ch s, p, m m s, p, m m p s, p, m m m ch, l, m m m m m m, s, p m m, p, l ch m m tkáně m


Laboratoř Str. Biochemická laboratoř 42 Biochemická laboratoř 47 Biochemická laboratoř 48 Biochemická laboratoř 48 Biochemická laboratoř 49 Enzymologická laboratoř 49 Biochemická laboratoř 50 Biochemická laboratoř 50 Biochemická laboratoř 51 Biochemická laboratoř 52 Biochemická laboratoř 53 Biochemická laboratoř 54 Biochemická laboratoř 56 Biochemická laboratoř 56 Biochemická laboratoř 58 Biochemická laboratoř 58 Biochemická laboratoř 58 Biochemická laboratoř 61 Enzymologická laboratoř 62 Biochemická laboratoř 63 Biochemická laboratoř 64 Biochemická laboratoř 64 Biochemická laboratoř 65 Biochemická laboratoř 66 Biochemická laboratoř 67 Biochemická laboratoř 68 Biochemická laboratoř 68 Biochemická laboratoř 63 Biochemická laboratoř 69 Biochemická laboratoř 70 Enzymatická laboratoř 70 Biochemická laboratoř 70

Sukcinylaceton Sukcinylaminoimidazolkarboxamidribosid (SAICAr) Sulfatidy Tandemová hmotnostní spektrometrie (aminokyseliny a acylkarnitiny) Thiosírany kvalitativně Thiosírany kvantitativně Velmi dlouhé mastné kyseliny a kyselina fytanová a pristanová

m m

Biochemická laboratoř Biochemická laboratoř

71 71

mc kp

Enzymologická laboratoř Biochemická laboratoř

72 72

m m s

Biochemická laboratoř Biochemická laboratoř Biochemická laboratoř

73 73 74

Tabulka 24: Seznam vyšetření – Metabolity - Výpočtové metody Metoda Strana Poměr glycin v likvoru/v séru 46 Poměr acylovaný/volný karnitin 54 (AC/FC) Poměr laktát/pyruvát (L/P) 63 Index podle Kaufmana (IK) 60 Index podle Stapletona (IS) 60 Exkreční frakce kyseliny močové 61 (EFKM)

10.2 Metabolické vyšetření na úrovni enzymů Všechna enzymatická vyšetření jsou indikována přísně individuálně a jsou prováděna pouze po předchozí telefonické dohodě. U enzymatického vyšetření v erytrocytech, leukocytech nebo lymfocytech je nutno poslat i materiál od zdravé nepříbuzné kontroly – odebraný a transportovaný za stejných podmínek jako vyšetřovaný vzorek. Tabulka 25 : Kontakty pro enzymatické vyšetření Laboratoř Telefon Kontaktní osoba Enzymologická laboratoř 22496 7032 Ing. Helena Poupětová, 22496 7034 Ing. Jitka Honzíková Biochemická laboratoř 22496 7710 Lékař-konzultant Tabulka 26: Seznam vyšetření - Enzymy Vyšetření (enzym) Acetyl-CoA: -glukosaminid N-acetyltransferáza -N-Acetyl-D-galaktosaminidáza N-Acetylgalaktosamin-6-sulfát sulfatáza -N-Acetyl-D-glukosaminidáza N-Acetylglukosamin-6-sulfát sulfatáza

Materiál leu, fib leu, fib leu, fib leu, fib leu, fib


Laboratoř Enzymologická laboratoř Enzymologická laboratoř Enzymologická laboratoř Enzymologická laboratoř Enzymologická laboratoř

Adeninfosforibosyltransferáza (APRT) Adenosindeamináza (ADA) Amylo-1,4-1,6-transglukosidáza Arylsulfatáza A Arylsulfatáza B Arylsulfatáza C Biotinidáza Cystathionin -syntáza (CBS) Dihydropteridinreduktáza (DHPR) Fosforibosylpyrofosfátsyntetáza (PRPPs) Fosforyláza-b-kináza -L-Fukosidáza Galaktocerebrosidáza -Galaktosidáza -Galaktosidáza Galaktóza-1-fosfát uridyltransferáza (GALT) -Glukuronidáza -Hexosaminidáza -Hexosaminidáza A Heparinsulfamidáza Hypoxanthinfosforibosyltransferáza (HPRT) Chitotriosidáza -L-Iduronidáza Iduronosulfátsulfatáza Jaterní fosforyláza Kyselá -1,4-glukosidáza Kyselá -glukosidáza, glukocerebrosidáza Kyselá lipáza Kyselá sfingomyelináza -Mannosidáza -Mannosidáza Methylmalonyl-CoA mutáza -Neuraminidáza Purinnukleosidfosforyláza (PNP) Steroidsulfatáza Tripeptidylpeptidáza I Palmitoyl-protein thioesteráza

ery ery ery leu, fib leu, fib leu, fib s fib kp (3 terčíky) ery ery leu, fib leu, fib leu, fib, kp leu, fib ery leu, fib leu, fib leu, fib leu, fib ery p, s leu, fib leu, fib leu leu, fib, kp leu, fib leu, fib leu, fib leu, fib leu, fib lym, fib fib ery leu, fib leu, fib leu, fib


Biochemická laboratoř Biochemická laboratoř Biochemická laboratoř Enzymologická laboratoř Enzymologická laboratoř Enzymologická laboratoř Biochemická laboratoř Enzymologická laboratoř Biochemická laboratoř Biochemická laboratoř Biochemická laboratoř Enzymologická laboratoř Enzymologická laboratoř Enzymologická laboratoř Enzymologická laboratoř Biochemická laboratoř Enzymologická laboratoř Enzymologická laboratoř Enzymologická laboratoř Enzymologická laboratoř Biochemická laboratoř Enzymologická laboratoř Enzymologická laboratoř Enzymologická laboratoř Biochemická laboratoř Enzymologická laboratoř Enzymologická laboratoř Enzymologická laboratoř Enzymologická laboratoř Enzymologická laboratoř Enzymologická laboratoř Biochemická laboratoř Enzymologická laboratoř Biochemická laboratoř Enzymologická laboratoř Enzymologická laboratoř Enzymologická laboratoř

Tabulka 27: Seznam vyšetření – Enzymy/Proteiny – rozdělení podle metabolických oblastí Metabolická oblast Onemocnění Enzym / nekatalytický protein Aminoacidopatie homocystinurie cystathionin -syntáza Biosyntéza deficit DHPR dihydropteridinreduktáza (DHPR) tetrahydrobiopterinu Glykogenózy glykogenóza II, Pompe kyselá -1,4-glukosidáza glykogenóza IV amylo-1,4-1,6-transglukosidáza glykogenóza VI jaterní fosforyláza glykogenóza IX fosforyláza-b-kináza Organické acidémie methylmalonová metylmalonyl-CoA mutáza acidémie Puriny Lesch-Nyhanův syndrom hypoxantinfosforibosyltransferáza (HPRT) Kelley-Seegmillerův syndrom deficit APRT adeninfosforibosyltransferáza (APRT) deficit ADA adenosindeamináza (ADA) deficit PRPPs fosforibosylpyrofosfátsyntetáza (PRPPs) deficit PNP purinnukleosidfosforyláza (PNP) onemocnění asociovaná s uromodulin uromodulinem Sacharidy klasická galaktosémie galaktóza-1-fosfát uridyltransferáza (GALT) Jiné deficit BTD biotinidáza (BTD) Lysosomální střádavá onemocnění mukopolysacharidóza I -L-iduronidáza (Hurler/Scheie) mukopolysacharidóza II iduronosulfátsulfatáza (Hunter) mukopolysacharidóza IIIA heparinsulfamidáza (Sanfilippo A) mukopolysacharidóza IIIB -N-acetyl-D-glukosaminidáza (Sanfilippo B) mukopolysacharidóza IIIC acetyl-CoA: -glukosaminid N(Sanfilippo C) acetyltransferáza Mukopolysacharidózy mukopolysacharidóza IIID N-acetylglukosamin-6-sulfátsulfatáza (Sanfilippo D) mukopolysacharidóza IVA N-acetylgalaktosamin-6-sulfátsulfatáza (Morquio A) mukopolysacharidóza IVB -galaktosidáza (Morquio B) mukopolysacharidóza VI arylsulfatáza B (Maroteaux-Lamy) mukopolysacharidóza VII -glukuronidáza (Sly) GM1-gangliosidóza -galaktosidáza Sfingolipidózy


Glykoproteinózy

NCL

Jiné

metachromatická arylsulfatáza A leukodystrofie Gaucherova choroba glukocerebrosidáza, kyselá -glukosidáza Fabryho choroba -galaktosidáza Krabbeho choroba galaktocerebrosidáza Niemann-Pickova choroba kyselá sfingomyelináza typ A/B GM2-gangliosidóza, -hexosaminidáza Sandhoff GM2-gangliosidóza, Tay-hexosaminidáza A Sachs choroba ze střádání esterů kyselá lipáza cholesterolu Wolmanova choroba Niemann-Pickova choroba porucha intracelulárního transportu typ C cholesterolu (NPC 1, HE1 protein) prosaposinový deficit deficit proteinových aktivátorů A,B,C,D skupiny lysosomálních glykosidáz -mannosidóza -mannosidáza -mannosidóza -mannosidáza fukosidóza -L-fukosidáza Schindlerova choroba -N-acetyl-D-galaktosaminidáza glykogenóza II, Pompe kyselá -1,4-glukosidáza sialidóza, mukolipidóza I -neuraminidáza mukolipidóza II, III (I-cell N-acetylglukosaminfosfotransferáza disease) mukolipidóza IV porucha endosomálního transportu lipidů (mukolipin 1) choroba ze střádání porucha lysosomálního membránového kyseliny sialové (ISSD) transportu kyseliny sialové neuronální palmitoylproteinthioesteráza ceroidlipofuscinóza typ 1 (NCL) neuronální tripeptidylpeptidáza I ceroidlipofuscinóza typ 2 (NCL) neuronální defekt funkční nedefinovaného ceroidlipofuscinóza typ 3- nekatalytického proteinu 7 (NCL) X-vázaná ichtyóza steroidsulfatáza


10.3. Metabolické vyšetření na úrovni DNA Zdrojem DNA mohou být leukocyty nebo lymfocyty periferní krve, kultivované fibroblasty, buňky ústní sliznice, sliny, močový sediment, novorozenecký krevní papírek a bioptický nebo nekroptický materiál, pro prenatální vyšetření téţ nativní a kultivované choriové klky a kultivované amniocyty. Nejčastěji pouţívaným materiálem pro isolaci DNA je nesráţlivá krev odebraná za sterilních podmínek (NK EDTA, 3–4 ml). Pro izolaci RNA se pouţívá nesráţlivá krev odebraná za sterilních podmínek (NK EDTA, 7–9 ml). Zkumavky musí být doručeny do laboratoře v co nejkratším čase při laboratorní teplotě (nechladit!). U některých genů (viz seznam) je moţné z buněk periferní krve vyšetřit i transkript (komplementární DNA, cDNA). Vyšetření transkriptu probíhá aţ následně po získání výsledků z vyšetření genomové DNA a ve většině případů není nutné. Proto dáváme přednost vyšetření transkriptu z nového náběru. V případě rizika, ţe pacient bude pro nový náběr nedostupný, je vhodné odebrat dalších 7,5 ml krve jiţ při prvním náběru. S výjimkou genu HADHA, u kterého je vyšetřována pouze prevalentní mutace, je analyzována celá kódující sekvence genu spolu s přiléhajícími intronovými oblastmi. Pokud byly v rodině mutace jiţ identifikovány, obvykle se vyšetřují pouze tyto známé mutace. Všechna molekulárně genetická vyšetření jsou indikována přísně individuálně a jsou prováděna pouze po předchozí telefonické dohodě. K ţádance je nutné přiloţit řádně vyplněný a podepsaný informovaný souhlas vyšetřované/ho (zákonného zástupce) s genetickým laboratorním vyšetřením (moţno stáhnout na www.udmp.cz). U podezření na diagnózu CADASIL poţadujeme i osobní a rodinnou anamnézu pacienta. Tabulka 28 : Kontakty pro molekulárně genetické vyšetření Vyšetření Laboratoř Telefon Kontaktní osoba Molekulárně Laboratoř 224 967 701 RNDr. Lenka Dvořáková, CSc. genetické DNA 224 967 680 Mgr. Hana Vlášková vyšetření diagnostiky Tabulka 29: Seznam vyšetření – Geny Onemocnění Vyšetření Adrenoleukodystrofie, X-vázaná gDNA, cDNA Alexanderova choroba gDNA, cDNA Amyloidóza z depozice Apo AI gDNA Amyloidóza z depozice SAA1 gDNA Amyloidóza z depozice TTR gDNA CADASIL gDNA Canavanové choroba gDNA Creutzfeldt-Jakobova choroba gDNA Danonova choroba gDNA, cDNA Deafness Dystonia Syndrome gDNA, cDNA (Mohr-Tranebjaerg syndrome) Deficit acyl-CoA dehydrogenázy gDNA mastných kyselin se

Gen ABCD1 GFAP ApoA1 SAA1 TTR NOTCH3 ASPA PRNP LAMP2 TIMM8A (DDP1) ACADM


MIM 300100 203450 105200 104750 105210 125310 271900 123400 300257 300356 201450

středně dlouhým řetězcem (deficit MCAD) Deficit adenylosukcinátlyázy (deficit ADSL) Deficit mitochondriální acetoacetyl-CoA thiolázy ( ketothiolázy) Deficit biotinidázy Deficit cystathionin -syntázy Deficit hypoxantinfosforibosyltransferázy (deficit HPRT, Lesch-Nyhanův syndrom, Kelley-Seegmillerův syndrom) Deficit 3-hydroxyacyl-CoA dehydrogenázy mastných kyselin s dlouhým řetězcem (deficit LCHAD) Deficit syntázy reduktázy (deficit MTRR) Deficit metylentetrahydrofolátreduktázy (deficit MTHFR) Deficit ornithintranskarbamoylázy (deficit OTC) Deficit prosaposinu a saposinů A, B, C a D Fabryho choroba Familiární juvenilní hyperurikemické nefropatie (FJHN) atypické Gaucherova choroba

gDNA, cDNA

ADSL

103050

jen cDNA

ACAT1, T2

203750

gDNA gDNA gDNA, cDNA

BTD CBS HPRT1

253260 603174 300322

gDNA (pouze prevalentní mutace) gDNA

HADHA

609016

MTRR

236270

gDNA

MTHFR

236250

gDNA

OTC

311250

gDNA, cDNA

PSAP

611721

gDNA, cDNA gDNA

GLA REN HNF1B

301500 613092 137920

gDNA

GBA

Glutarová acidurie typ I GM2 gangliosidóza typ II (Sandhoffova choroba) 3-Hydroxy-3-metylglutarová acidurie Kardiomyopatie z dysfunkce AMP-aktivované proteinkinázy

gDNA jen cDNA

GCDH HEXB

230800 230900 608013 231000 231005 231670 268800

gDNA, cDNA

HMGCL

246450

gDNA, cDNA

PRKAG2

Krabbeho choroba Metachromatická leukodystrofie Metylmalonová acidurie z deficitu cblA

gDNA gDNA, cDNA gDNA, cDNA

GALC ARSA MMAA

600858 261740 194200 245200 250100 251100


Metylmalonová acidurie z deficitu cblB Metylmalonová acidurie z deficitu metylmalonyl-CoA mutázy Mukopolysacharidóza typ I

gDNA, cDNA

MMAB

251110

gDNA, cDNA

MUT

251000

gDNA, cDNA

IDUA

Mukopolysacharidóza typ II Mukopolysacharidóza typ IIIC Myofibrilární myopatie z dysfunkce desminu Myofibrilární myopatie z dysfunkce -B-krystalinu Neuronální ceroidlipofuscinóza typ 2 Neuronální ceroidlipofuscinóza typ 3 Neuronální ceroidlipofuscinóza typ 5 Neuronální ceroidlipofuscinóza typ 6 Neuronální ceroidlipofuscinóza typ 7 Neuronální ceroidlipofuscinóza typ 8 Niemann-Pickova choroba typ A/B Niemann-Pickova choroba typ C1 Niemann-Pickova choroba typ C2 Onemocnění asociované s uromodulinem

gDNA, cDNA gDNA, cDNA gDNA

IDS HSGNAT DES

607014 607015 607016 309900 252930 601419

gDNA

CRYAB

123590

gDNA, cDNA

TPP1 (CLN2)

204500

gDNA

CLN3

204200

gDNA, cDNA

CLN5

256731

gDNA, cDNA

CLN6

601780

gDNA, cDNA

610951

gDNA, cDNA

MFSD8 (CLN7) CLN8

gDNA

SMPD1

gDNA, cDNA gDNA, cDNA gDNA

NPC1 NPC2 UMOD

Renální hypourikémie Renální hypourikémie Xantinurie typ I (deficit xantindehydrogenázy)

gDNA gDNA gDNA

SLC2A9 SLC22A12 XDH

257200 607616 257220 607625 162000 603860 609886 612076 220150 278300


600143

10.4 Metabolické vyšetření na úrovni tkání Všechna vyšetření tkání jsou indikována přísně individuálně a jsou prováděna pouze po předchozí dohodě. Tabulka 30: Kontakty pro vyšetření tkání Vyšetření Laboratoř E-mail Histologické, Laboratoř [email protected] histochemické, patologie DMP biochemické a elektronmikroskopické vyšetření Biochemické Biochemická 22496 7710 vyšetření laboratoř Enzymatické Enzymologická 22496 7032 vyšetření laboratoř 22496 7034 Molekulárně Laboratoř DNA 22496 7701 genetické diagnostiky 22496 7232 vyšetření

Kontaktní osoba prof. MUDr. Milan Elleder, DrSc.

Lékař-konzultant Ing. Helena Poupětová Ing. Jitka Honzíková RNDr. Lenka Dvořáková, CSc. Mgr. Hana Vlášková

Indikací k biopsii je: 1. koţní biopsie pro kultivaci fibroblastů (odběr a transport v kultivačním médiu nebo v nouzi ve sterilním fyziologickém roztoku); 2. získání materiálu pro enzymatické vyšetření (není-li moţné či spolehlivé vyšetření z buněk periferní krve); 3. histologické, histochemické a elektronmikroskopické vyšetření (je-li nutné pro diagnostiku); 4. molekulárně genetické vyšetření (mitochondriální poruchy, jaderné geny, není-li moţné či spolehlivé vyšetření z buněk periferní krve). Pro diagnostiku DMP jsou nejčastěji odebírány vzorky kůţe (i pro kultivaci fibroblastů), jater nebo svalu, vzácněji i myokardu, spojivky nebo jiných tkání. Biopsie jako invazívní výkon by měla být provedena aţ po důkladném diferenciálně diagnostickém rozboru, vyčerpání neinvazívních vyšetření a po konzultaci s laboratoří, kde bude bioptický vzorek vyšetřován. Jen tak je moţné se vyvarovat opakovaným biopsiím. Biopsie choria a odběr plodové vody jsou indikované pro prenatální diagnostiku DMP. Postmortální odběr vzorků tkání (nekropsie) je nezbytné při podezření na DMP u náhlého, neočekávaného nebo neodvratitelného úmrtí, viz téţ Kapitola 6. Základní podmínkou pro kvalitní vyšetření zaslaného vzorku tkání je správné zpracování vzorku po odběru a jeho správný transport do laboratoře. Viz Tabulka 31. Tabulka 31: Zpracování vzorku po odběru Vzorek Zpracování vzorku po odběru 1. část Fixace cca ½ vzorku při „pokojové“ teplotě: vloţit vzorek do 4-10% paraformaldehydu nebo 3% glutaraldehydu Strana 36 (celkem 77)

Vhodné na vyšetření: histologické elektronmikroskopické

2. část

Zmraţení cca ½ vzorku: zmraţení nefixované tkáně

na vyšetření: histochemické, biochemické a molekulárně genetické

Fixovaný vzorek transportujte do laboratoře při „pokojové“ teplotě pouze po předchozí dohodě. Zmražení má být rychlé, promptní, vloţením vzorku do tekutého dusíku, zkapalněného uhlovodíku, petroeteru zchlazeného suchým ledem nebo vloţením vzorku mezi částky suchého ledu. Zmraţený vzorek skladujte nejlépe při 80 °C (minimalizují se degradační procesy). Zmraţený vzorek transportujte do laboratoře na suchém ledu pouze po předchozí dohodě. Tabulka 32: Příklady indikací k biopsii Tkáň Vyšetření kůţe lysosomální střádání v potních ţlázkách játra aktivita glycin cleavage komplexu játra

analýza cDNA genů, u nichţ neprobíhá transkripce v periferních tkáních sval histologická a histochemická analýza morfologie mitochondrií ragged-red fibers spotřeba kyslíku, produkce ATP studie oxidativní fosforylace analýza proteinů mutace mitochondriální DNA sval lysosomální střádání glykogenu myokard lysosomální střádání glykogenu enzymatické vyšetření spojivka krystaly cystinu choriové enzymatické vyšetření klky molekulárně genetické vyšetření

Diagnóza lysosomální poruchy neketotická hyperglycinémie deficit OTC deficit OTC mitochondriální poruchy (poruchy pyruvát dehydrogenázového komplexu, Krebsova cyklu, komplexů oxidativní fosforylace) heteroplasmie prevalentní mutace glykogenóza typu II myokardiální podtyp glykogenózy typu IX cystinóza prenatální diagnostika řady DMP


10.5 Novorozenecký screening DMP Novorozenecký screening DMP se provádí u kaţdého novorozence v ČR vyšetřením suché krevní kapky z novorozenecké screeningové kartičky metodou tandemové hmotnostní spektrometrie. Odběr krve u novorozence se provádí 48-72 hodin po narození. Pravidla pro odběr krve, povinnosti laboratoří a zajištění péče o diagnostikované děti určuje Metodický návod k zajištění celoplošného novorozeneckého laboratorního screeningu a následné péče, který byl uveřejněn ve Věstníku MZ ČR 2009, Částka 6. Novorozenecký screening DMP zahrnuje 10 DMP, viz Tabulka 33. Tabulka 33: Seznam DMP vyšetřovaných v rámci novorozeneckého screeningu

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Seznam DMP vyšetřovaných v rámci novorozeneckého screeningu Fenylketonurie (PKU) a hyperfenylalaninémie (HPA) Leucinóza (choroba javorového sirupu, MSUD) Glutarová acidémie typ I (GA I) Izovalerová acidémie (IVA) Deficit acyl-CoA dehydrogenázy mastných kyselin se středně dlouhým řetězcem (deficit MCAD) Deficit 3-hydroxyacyl-CoA dehydrogenázy mastných kyselin s dlouhým řetězcem (deficit LCHAD) Deficit acyl-CoA dehydrogenázy mastných kyselin s velmi dlouhým řetězcem (deficit VLCAD) Deficit karnitinpalmitoyltransferázy I (deficit CPT I) Deficit karnitinpalmitoyltransferázy II (deficit CPT II) Deficit karnitinacylkarnitintranslokázy (deficit CACT)

Bliţší informace viz www.novorozeneckyscreening.cz.

10.6 Postmortální vyšetření DMP Postmortální vyšetření se zaměřením na DMP probíhá v případě SIDS, náhlého, neočekávaného nebo neodvratitelného úmrtí, pokud není dokončena diagnostika z hlediska DMP. Potřebné biologické vzorky a informace uvádí Tabulka 34. Tabulka 34: Biologické vzorky a informace potřebné pro postmortální vyšetření DMP Biologické vzorky a informace potřebné pro postmortální vyšetření DMP 1 Zamrazit 5 ml krevní plazmy, 5 ml plné krve, 20 ml moči, 1,5 ml likvoru 2 Suchá krevní kapka na novorozenecké screeningové kartičce (krevním papírku) 3 Odběr tkání (játra, sval, myokard), zajistit vzorky fixované i zamraţené, viz Kapitola 10.4 Metabolické vyšetření na úrovni tkání 4 Zaloţit tkáňovou kulturu fibroblastů, lze i 2-3 dny po smrti 5 Přiloţit epikrízu, zprávy, pitevní protokol


11. Léčba DMP Cílem léčby DMP je zlepšení kvality ţivota, t.j. zmírnění důsledků metabolické dysfunkce, prevence komplikací a zajištění přiměřeného somatického a psychosociálního vývoje. Předpokladem správné léčby DMP je přesná a včasná diagnóza a znalost přirozeného průběhu a patogeneze choroby. Léčba je vţdy komplexní a multidisciplinární. Tabulka 35: Principy léčby DMP Úroveň léčby Léčba Na úrovni symptomatická a podpůrná fenotypu např. symptomatická medikamentosní aj. léčba, chirurgická léčba, edukace, reţimová opatření, psychologická péče; neřeší metabolickou podstatu onemocnění; můţe zmírnit klinické symptomy a zlepšit kvalitu ţivota omezení příjmu nebo vzniku toxických substrátů a patologických metabolitů např. prevence katabolismu u aminoacidopatií a organických acidurií, bezlaktózová dieta u galaktosémie, sanace střevní flory metronidazolem u propionové acidémie eliminace toxických substrátů a patologických metabolitů např. výměnná transfuze, hemofiltrace, vyuţití alternativních Na úrovni metabolických cest, např. podávání benzoátu a fenylacetátu při metabolitu hyperammonémii nebo penicillaminu u Wilsonovy choroby (nutriční, metabolické inhibitory farmakologická) např. podávání allopurinolu při hyperurikémii (inhibice xantinoxidázy), podávání NTBC u tyrosinémie I (inhibice hydroxyfenylpyruvátdioxygenázy) náhrada deficitních produktů např. podávání tyrosinu u fenylketonurie nebo argininu u poruch cyklu močoviny aktivace a stabilizace enzymů farmakologickými dávkami koenzymů Na úrovni (např. vitamíny) dysfunkčního např. podávání pyridoxinu u deficitu cystathionin -syntázy nebo proteinu thiaminu u leucinózy náhrada deficitních enzymů např. enzymoterapie u Gaucherovy choroby, Fabryho choroby Na buněčné transplantace orgánů a tkání (jater, ledvin, kostní dřeně) úrovní např. transplantace ledvin u cystinózy, transplantace kostní dřeně u adrenoleukodystrofie


12. Genetické poradenství a prenatální diagnostika u DMP Rodinám, v nichţ byla diagnostikována DMP, by mělo být poskytnuto genetické poradenství. V rámci genetického poradenství ověřujeme diagnózu DMP stanovenou u probanda, případně doporučíme její potvrzení na další úrovni; stanovujeme riziko heterozygotie nebo homozygotie konzultandů a pokud to lze, zajistíme jejich vyšetření; stanovujeme riziko postiţení plodu a zajišťujeme prenatální vyšetření. První porada by měla být prekoncepční, aby byl dostatek času k zajištění potřebných vyšetření. Není-li DMP kauzálně léčitelná a prenatální diagnostika je moţná, je prenatální vyšetření indikováno při riziku postiţení plodu DMP vyšším neţ je riziko prenatálního vyšetření. Cílem prenatální diagnostiky je zjistit, zda je plod postiţen DMP, která se v geneticky rizikové rodině vyskytuje. Podmínkou je stanovení správné diagnózy na příslušné úrovni u probanda, moţnost prenatálního laboratorního vyšetření a ţádost rodičů plodu o vyšetření. Prenatální diagnostika DMP se provádí standardními genetickými metodami (koncentrace metabolitů v plodové vodě, aktivita enzymu v amniocytech nebo choriových klcích, metody molekulárně genetické nebo histologické, histochemické nebo elektronmikroskopické). Výběr optimální metody závisí na konkrétní DMP a na úrovních, na nichţ byla diagnóza u probanda potvrzena. Odběr materiálu se provádí v 1. nebo 2. trimestru gravidity. Je-li to diagnosticky moţné, dává se při vyšším riziku postiţení plodu přednost odběru na konci 1. trimestru. Specifická je problematika prenatální diagnostiky u mitochondriálních onemocnění.


13. Zdroje odborných informací Tabulka 36: Internetové odkazy Zdroj Adresa webová stránka Ústavu www.udmp.cz dědičných metabolických poruch VFN novorozenecký screening www.novorozeneckyscreening.cz databáze Metagene www.metagene.de databáze OMIM www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=omim/ databáze Medline http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?DB=pubmed Tabulka 37: Knižní publikace Autor Název knihy J. Fernandes Diagnostika a léčba dědičných metabolických poruch (česky) Triton Praha G.F. Hoffmann Dědičné metabolické poruchy (česky) Grada Praha G.F. Hoffmann Inherited Metabolic Diseases: A Clinical Approach N. Blau Laboratory Guide to the Methods in Biochemical Genetics J. Fernandes Inborn Metabolic Diseases: Diagnosis and Treatment S. Hannigan Inherited Metabolic Diseases: A Guide to 100 Conditions N. Blau Physicians´s Guide to the Treatment and Follow-Up of Metabolic Diseases J.T.R. Clarke A Clinical Guide to Inherited Metabolic Diseases W. Nyhan Atlas of Metabolic Diseases N. Blau Physicians´s Guide to the Laboratory Diagnosis of Metabolic Diseases Ch.R. Scriver The Metabolic and Molecular Bases of Inherited Disease


Rok vydání 2008 2006 2009 2008 2007 2007 2006 2005 2005 2003 2001

14. Abecední seznam laboratorních vyšetření metabolitů prováděných v ÚDMP Název: Typ metody: Princip stanovení: Materiál:

Statim: Dostupnost: Provádí: Poznámky:

Jednotky: Referenční meze: Kritické hodnoty: Indikace:

Interpretace:

Aminokyseliny (AMK) kvantitativně v séru/plazmě kvantitativní, profilová automatický analyzátor aminokyselin, ionexová chromatografie, ninhydrinová detekce sérum nebo plazma oddělit nejlépe do 60 min. po odběru vzorky určené pro diagnostiku DPM nutno odebrat v době, kdy nejsou podávány i.v. aminokyseliny ano 2 týdny Biochemická laboratoř glutamin a glutamát jsou hodnoceny dohromady kromě běţných AMK lze stanovit i AMK obvykle v séru /plazmě nepřítomné - alloisoleucin, kys. argininojantarovou a její anhydridy, cystathionin, fosfoetanolamin, homocystin, karnosin, metylhistidiny, sarkosin aj. interference - léky sekundární a nespecifické odchylky - postprandiální odběr, parenterální výţiva, hepatopatie, kontaminace, hemolýza, pozdní oddělení séra/plazmy aj. mol/l podle interních norem profil suspektní pro DMP klinické symptomy – intolerance stravy, neobvyklé dietní zvyky, zvracení, neprospívání, hypotonie, letargie, křeče, koma, mentální retardace, mikrocefalie, ataxie, choreoatetóza, spastická paraparéza nebo diplegie, poruchy chůze, problémy s učením, poruchy chování, neuropsychiatrické symptomy, atrofie optiku, retinitis pigmentosa, dysmorfie, atypický zápach, hepatomegalie, pankreatitis, tubulopatie, tachypnoe, systémové kostní změny, atypické vlasy, koţní léze, akutní dekompenzace; laboratorní symptomy – metabolická acidóza, hyperammonémie, hypoglykémie, ketonurie, vyšší anion gap, neutropenie, megaloblastická anémie, deficit vitaminu B12 nebo folátů, hepatopatie, hypokreatininémie; aminoacidopatie viz Interpretace aminokyselina dědičné metabolické poruchy se zvýšenou koncentrací aminokyseliny alanin DMP s laktátovou acidózou DMP s hyperammonémií alloisoleucin leucinóza deficit E3 podjednotky arginin argininémie argininojantarová argininojantarová acidurie kyselina (argininosukcinát) Strana 42 (celkem 77)

citrulin cystathionin fenylalanin

fosfoetanolamin -aminomáselná kyselina (GABA, -aminobutyrát) glutamová kyselina (glutamát) glutamin glycin

Garant: Název: Typ metody: Princip stanovení: Materiál:

citrulinémie argininojantarová acidurie deficit -cystathionázy hyperfenylalaninémie fenylketonurie poruchy metabolismu biopterinu hypofosfatázie deficit GABA transaminázy

DMP s hyperammonémií glutamová acidémie

DMP s hyperammonémií neketotická hyperglycinémie ketotická hyperglycinémie u organických acidurií histidin histidinémie homocystin deficit cblC, cblD a cblE deficit cystathionin -syntázy deficit metylentetrahydrofolátreduktázy (MTHFR) hydroxyprolin hydroxyprolinémie isoleucin leucinóza deficit E3 podjednotky karnosin karnosinémie leucin leucinóza (choroba javorového sirupu, MSUD) deficit E3 podjednotky lysin hyperlysinémie I saccharopinurie methionin deficit methioninadenosyltransferázy deficit cystathionin -syntázy ornithin gyrátová atrofie HHH syndrom (hyperammonémie, hyperornithinémie, homocitrulinurie) prolin hyperprolinémie I, II sarkosin sarkosinémie tyrosin tyrosinémie (I), II, III tranzitorní neonatální hypertyrosinémie valin leucinóza deficit E3 podjednotky Zdeněk Čánský, Sylvie Šťastná

Aminokyseliny (AMK) kvantitativně v moči kvantitativní, profilová automatický analyzátor aminokyselin, ionexová chromatografie, ninhydrinová detekce moč


Statim: Dostupnost: Provádí: Poznámky:

Jednotky: Referenční meze: Indikace: Interpretace:

ano 2 týdny Biochemická laboratoř kromě běţných AMK lze stanovit i AMK obvykle v moči nepřítomné a další ninhydrin-positivní látky ( -aminoadipovou kyselinu, argininojantarovou kyselinu a její anhydridy, aspartylglukosamin, citrulin, -aminolevulovou kyselinu, fosfoethanolamin, homocystin, hydroxyprolin, iminodipeptidy, ornithin, prolin, saccharopin, aj.); interference – metabolity některých léků (2-merkaptoethansulfonát, ampicilin, vigabatrin aj.) mmol/mol kreatininu podle interních norem viz aminokyseliny kvantitativně v séru/plasmě aminokyselina dědičné metabolické poruchy se zvýšeným vylučováním aminokyseliny většina Fanconiho syndrom aminokyselin klasická galaktosémie tyrosinémie I Loweho syndrom hereditární intolerance fruktózy vitamin D dependentní rachitida neutrální Hartnupova choroba aminokyseliny alanin DMP s laktátovou acidózou DMP s hyperammonémií alloisoleucin leucinóza deficit E3 podjednotky -aminoadipová -aminoadipová acidurie kyselina ( -aminoadipát) arginin argininémie cystinurie intolerance bílkovin s lysinurií (LPI) argininojantarová argininojantarová acidurie kyselina (argininosukcinát) asparágová kyselina dikarboxylová aminoacidurie (aspartát) aspartylglukosamin aspartylglukosaminurie citrulin citrulinémie argininojantarová acidurie cystathionin deficit -cystathionázy cystin cystinurie tyrosinémie I -aminolevulová porfyrie kyselina ( -aminolevulát) fenylalanin hyperfenylalaninémie fenylketonurie poruchy metabolismu biopterinu Strana 44 (celkem 77)

fosfoethanolamin kyselina aminomáselná (GABA, aminobutyrát) glutamin glutamová kyselina (glutamát) glycin

Garant:

hypofosfatázie deficit GABA transaminázy

hyperammonémie hyperammonémie dikarboxylová aminoacidurie neketotická hyperglycinémie ketotická hyperglycinémie u organických acidurií iminoglycinurie histidin histidinémie homocitrulin HHH syndrom (hyperammonémie, hyperornithinémie, homocitrulinurie) citrulinémie argininémie homocystin deficit cblC, cblD a cblE deficit cystathionin -syntázy deficit metylentetrahydrofolátreduktázy (MTHFR) hydroxyprolin hydroxyprolinémie hyperprolinémie I, II iminoglycinurie iminodipeptidy deficit prolidázy isoleucin leucinóza deficit E3 podjednotky leucin leucinóza deficit E3 podjednotky lysin hyperlysinémie cystinurie intolerance bílkovin s lysinurií (LPI) saccharopinurie methionin deficit methioninadenosyltransferázy deficit cystathionin -syntázy ornithin hyperornithinémie cystinurie intolerance bílkovin s lysinurií (LPI) prolin hyperprolinémie I, II iminoglycinurie saccharopin saccharopinurie tryptofan tryptofanurie tyrosin tyrosinémie I, II, III tranzitorní neonatální hypertyrosinémie valin leucinóza deficit E3 podjednotky Zdeněk Čánský, Sylvie Šťastná


Název: Typ metody: Princip stanovení: Materiál: Statim: Dostupnost: Provádí: Poznámky: Jednotky: Referenční meze: Indikace:

Interpretace:

Garant: Název: Typ metody: Princip stanovení: Materiál: Statim: Dostupnost: Provádí: Poznámky: Jednotky: Referenční meze: Indikace: Interference: Interpretace:

Aminokyseliny (AMK) kvantitativně v likvoru kvantitativní, profilová automatický analyzátor aminokyselin, ionexová chromatografie, ninhydrinová detekce likvor ano 2 týdny Biochemická laboratoř mol/l podle interních norem susp. neketotická hyperglycinémie: psychomotorická retardace, hypotonie, křeče; susp. porucha biosyntézy serinu: kongenitální mikrocefalie, psychomotorická retardace, křeče aminokyselina dědičné metabolické poruchy se zvýšenou koncentrací aminokyseliny alanin DMP s laktátovou acidózou argininojantarová argininojantarová acidurie kyselina (argininosukcinát) deficit GABA transaminázy -aminomáselná kyselina (GABA, -aminobutyrát) glycin neketotická hyperglycinémie aminokyselina dědičné metabolické poruchy se sníženou koncentrací aminokyseliny serin poruchy biosyntézy serinu Zdeněk Čánský, Sylvie Šťastná

Biotinidáza kvalitativně kvalitativní inkubace se substrátem n-biotynyl-PABA, naftolové činidlo, vizuální hodnocení suchá krevní kapka nebo sérový papírek ne 3 pracovní dny Biochemická laboratoř nelze z plazmy a nesráţlivé krve fyziologická aktivita provádí se u kaţdého poprvé vyšetřovaného pacienta susp. deficit biotinidázy – viz Biotinidáza v séru kvantitativně sulfonamidy sníţenou aktivitu je nutno ověřit kvantitativní metodou; riziko falešně pozitivního výsledku po transfuzi krve, erymasy a plazmy Strana 46 (celkem 77)

Garant: Název: Typ metody: Princip stanovení: Materiál: Statim: Dostupnost: Provádí: Poznámky: Jednotky: Referenční meze: Indikace:

Interference: Interpretace:

Garant: Název: Typ metody: Princip stanovení: Materiál: Statim: Dostupnost: Provádí: Poznámky:

Jednotky: Referenční meze: Indikace: Interpretace:

nebo preanalytickými vlivy - labilní enzym, moţnost poklesu aktivity v čase Petr Chrastina, Eva Košťálová

Biotinidáza kvantitativně kvantitativní inkubace se substrátem n-biotynyl-PABA, naftolové činidlo, fotometrické stanovení, 546 nm sérum ne 5 pracovních dnů Biochemická laboratoř nelze z plazmy a nesráţlivé krve nmol/min/ml > 5,4, heterozygoti 5,4 - 2,2, homozygoti < 2,2 susp. deficit biotinidázy - v různé kombinaci symptomy laboratorní (intermitentní ataky ketoacidózy) a/nebo klinické: neurologické (psychomotorická retardace, křeče, hypotonie, ataxie), koţní (seborrhoická dermatitida, raš, alopecie), oční (atrofie optiku, keratokonjunktivitida), respirační (tachypnoe, apnoe, stridor), gastrointestinální (neprospívání, zvracení, průjem), imunologické (recidivující infekty); ověření deficitu biotinidázy zjištěného screeningovým vyšetřením sulfonamidy sníţená aktivita - primární dědičný deficit biotinidázy, nedonošení riziko falešně pozitivního výsledku po transfuzi krve, erymasy a plazmy nebo preanalytickými vlivy - labilní enzym, moţnost poklesu aktivity v čase Petr Chrastina, Eva Košťálová

Disulfidy semikvantitativní Brandův orientační test s kyanidem sodným a nitroprussidem sodným moč ne 2 pracovní dny Biochemická laboratoř cystin je relativně nerozpustný a po vymočení krystalizuje na dně nádoby; před odlitím vzorku moči je nutné celý objem moči v nádobě důkladně promíchat, aby v odlitém vzorku i ve zbylé moči v nádobě byla stejná koncentrace cystinu !! arb. j. 0 urolitiáza, zvl. familiární, susp. cystinurie; provádí se u kaţdého poprvé vyšetřovaného pacienta screeningové vyšetření cystinurie;



Interpretace: Garant: Název: Typ metody: Princip stanovení: Materiál: Statim: Dostupnost:

zachytí zvýšené vylučování cystinu u cystinurie i v rámci nespecifické hyperaminoacidurie; pozitivní nález nutno ověřit kvantitativním stanovením aminokyselin v moči; riziko falešně negativního výsledku: - není-li moč dostatečně zamíchaná a jako vzorek je odlit pouze supernatant riziko falešně pozitivního výsledku: - ve výrazně koncentrované moči - nespecifická reakce s jinými disulfidy v moči (homocystin u homocystinurie, kobalaminových deficitů a cystathioninurie; glutathion u poruch -glutamylového cyklu, při léčbě N-acetylcysteinem, penicilaminem, 2-merkaptoetansulfonátem a captoprilem aj.) - při výrazné ketonurii - není-li moč dostatečně zamíchaná a je vyšetřován zbytek moči na dně nádoby s krystaly cystinu Zdeněk Čánský, Sylvie Šťastná

Fenylalanin a tyrosin kvantitativní automatický analyzátor aminokyselin, ionexová chromatografie, ninhydrinová detekce, tzv. krátký program nesráţlivá krev ano 5 pracovních dnů Biochemická laboratoř mol/l fenylalanin < 120 μmol/l; tyrosin < 180 μmol/l monitorování koncentrací fenylalaninu a tyrosinu u pacientů s hyperfenylalaninémií/fenylketonurií (HPA/PKU); stanovení koncentrace fenylalaninu a tyrosinu u novorozenců zachycených novorozeneckým screeningem HPA/PKU; stanovení koncentrace fenylalaninu a tyrosinu u ţen zachycených screeningem HPA gravidních hodnocení dietní kompenzace podle věku pacienta; potvrzení či vyloučení HPA u novorozenců a gravidních Zdeněk Čánský, Sylvie Šťastná

Galaktitol kvantitativní GC, trimethylsilyl-deriváty, vnitřní standard manoheptulóza, extrakce do hexanu moč ano 5 pracovních dnů


Provádí: Poznámky: Jednotky: Referenční meze:

Kritické hodnoty: Indikace:

Interpretace:

Garant: Název: Typ metody: Princip stanovení: Materiál: Statim: Dostupnost: Provádí: Poznámky: Jednotky: Referenční meze: Kritické hodnoty: Indikace:

Interpretace:

Garant: Název: Typ metody: Princip stanovení:

Biochemická laboratoř mmol/mol kreatininu Věk Vylučování 0 – 1 měsíc < 90 1 měsíc – 1 rok < 80 1 – 2 roky < 22 2 – 15 let < 20 > 15 let < 10 > 200 mmol/mol kreatininu susp. galaktosémie - u novorozence po expozici laktózou stav připomínající sepsi s hepatopatií a hypoglykémií s rozvojem akutního jaterního selhání, v pozdějším věku katarakta, hepatopatie, neprospívání, mentální retardace masivně zvýšené vylučování – galaktosémie, zvl. klasická galaktosémie; diagnózu typu galaktosémie je nutno ověřit enzymatickým vyšetřením mírně aţ středně zvýšené vylučování – hepatopatie riziko falešně negativního výsledku při nedostatečné expozici laktózou Petr Hornik, Sylvie Šťastná

Galaktóza/galaktóza-1-fosfát semikvantitativní extrakce isopropanolem, TLC, detekce kys. p-aminobenzoovou (PABA) suchá krevní kapka ano 5 pracovních dnů Biochemická laboratoř falešně negativní nálezy při vyšetření do 3 měsíců od krevní transfuze mmol/l galaktóza < 0,5 mmol/l galaktóza-1-fosfát < 0,5 mmol/l galaktóza > 0,5 mmol/l galaktóza-1-fosfát > 0,5 mmol/l susp. galaktosémie - u novorozence po expozici laktózou stav připomínající sepsi s hepatopatií a hypoglykémií s rozvojem akutního jaterního selhání, v pozdějším věku katarakta, hepatopatie, neprospívání, mentální retardace zvýšená koncentrace - galaktosémie hraniční aţ mírně zvýšená koncentrace - hepatopatie diagnózu typu galaktosémie je nutno ověřit enzymatickým vyšetřením riziko falešně negativního výsledku při nedostatečné expozici laktózou Zdeněk Čánský, Sylvie Šťastná

Globotriaosylceramid kvalitativní (HPTLC); kvantitativní (MS/MS) HPTLC: extrakce směsí chloroformu a metanolu, detekce orcinolem;


Materiál:

Statim: Dostupnost: Provádí: Poznámky: Jednotky: Referenční meze: Indikace:

Interpretace:

Garant: Název: Typ metody: Princip stanovení: Materiál: Statim: Dostupnost: Provádí: Poznámky: Jednotky: Referenční meze: Indikace: Interpretace:

Garant: Název: Typ metody: Princip stanovení:

MS/MS: přímý nástřik naředěné moči moč ranní celá porce včetně sedimentu; při přelévání moči do jiné nádoby je nutné celý objem moči v původní nádobě důkladně promíchat a teprve poté přelít do nádoby, ve které bude moč transportována ne 3 týdny Enzymatická laboratoř (HPTLC), Biochemická laboratoř (MS/MS) susp. Fabryho choroba – bolesti nebo parestesie v končetinách, angiokeratomy, hypohidróza, korneální zákaly, postiţení srdce, ledvin, CMP specifický nález pro klasický fenotyp Fabryho choroby; muţi s kardiální formou mají fyziologický nález; ţeny-heterozygotky mohou mít fyziologický nález; při současném zvýšení exkrece sulfatidů se můţe jednat o deficit saposinu B (dříve SAP1) nebo deficit prosaposinu (prekursor saposinů A,B,C,D) viz Sulfatidy Jana Ledvinová, Sylvie Šťastná

Glykogen kvantitativní enzymatické spektrofotometrické stanovení, amyloglukosidáza, hexokináza/glukosa-6-fosfát dehydrogenáza, 340 nm nesráţlivá krev v EDTA, vyšetření se provádí z izolovaných erytrocytů ne 2 týdny Biochemická laboratoř mg/l norma < 100, hraniční 100-150, patologie > 150 susp. jaterní glykogenóza (GSD) zvýšená aţ výrazně zvýšená koncentrace - u GSD III mírně zvýšená koncentrace - můţe být u GSD VI a jaterní formy GSD IX fyziologická koncentrace - u ostatních GSD riziko falešně negativního nálezu – po transfuzi krve nebo erymasy riziko falešně pozitivního nálezu – u pacientů na protrahované parenterální výţivě Petr Chrastina, Sylvie Šťastná

Guanidinoacetát (GAA), kreatin (CR) a kreatinin (kreat.) kvantitativní MS/MS s vyuţitím derivatizace (butylace) a pouţitím značených standardů


Materiál: Statim: Dostupnost: Provádí: Poznámky: Jednotky: Referenční meze:

Indikace:

Interpretace:

Garant: Název: Typ metody: Princip stanovení: Materiál: Statim: Dostupnost: Provádí: Poznámky: Jednotky: Referenční meze: Kritická hodnota: Indikace: Interpretace:

moč ne 2 týdny Biochemická laboratoř nejlépe 12 nebo 24 hodinový sběr kvantifikace všech tří analytů současně mmol/mol kreatininu věk GAA CR GAA/CR CR/kreatinin 0-15 let 5-200 4-1200 do 10 do 2,1 nad 15 let 3-120 3-800 do 10 do 2,1 při klinické nebo laboratorní symptomatologii vedoucí k podezření na poruchu biosyntézy nebo transportu kreatinu: klinické symptomy – mentální/psychomotorická retardace/regres, porucha vývoje řeči, hypotonie, extrapyramidové příznaky, epilepsie; laboratorní symptomy – sníţená koncentrace kreatininu v séru, nízká koncentrace kreatinu při vyšetření MRS mozku vyšetření slouţí k diagnostice poruch biosyntézy a transportu kreatinu: deficit guanidinoacetátmetyltransferázy (GAMT): ↑ GAA, ↓ (n) CR, ↑ GAA/CR deficit argininglycinamidinotransferázy (AGAT): ↓ GAA, ↓ (n) CR deficit přenašeče kreatinu (CRTR): (n) GAA, ↑ CR, ↑ CR/kreatinin; nespecifické nálezy: sekundární deficit kreatinu, nadměrný přísun kreatinu ve stravě, renální dysfunkce; mírná nadprodukce GAA můţe být u deficitu Sadenosylhomocysteinhydrolázy; heterozygotky pro deficit CRTR mohou mít fyziologický nález Josef Bártl, Eva Košťálová

Homocitrulin kvantitativní automatický analyzátor aminokyselin, ionexová chromatografie, ninhydrinová detekce, zkrácený program moč ne 2 týdny Biochemická laboratoř mmol/mol kreatininu 0-5 susp. HHH syndrom (hyperammonémie, hyperornithinémie a homocitrulinurie) zvýšené vylučování - HHH syndrom; mírně zvýšené vylučování moţné u citrulinémie, argininjantarové acidurie a argininémie; hraniční aţ mírně zvýšené vylučování alimentárního původu zvl. u


Garant: Název: Typ metody: Princip stanovení: Materiál: Statim:

Dostupnost: Provádí: Poznámky:

Jednotky: Referenční meze:


kojenců Zdeněk Čánský, Sylvie Šťastná

Homocystein celkový kvantitativní fotometricky: enzymatická metoda, pro rutinní diagnostiku; HPLC: redukce TCEP, derivatizace SBD-F, fluorimetrická detekce, pro monitorování pacientů s definovanou hyperhomocysteinémií; EDTA plazma; sérum je méně vhodné, lze ho pouţít pro orientační vyloučení střední a těţké hyperhomocysteinémie; fotometricky: ne; HPLC: moţnost rychlého vyšetření po předchozí dohodě u monitorovaných pacientů v rámci kolemoperační péče; fotometricky: 3 pracovní dny; HPLC: 2 týdny; Biochemická laboratoř nesráţlivou krev odebranou do EDTA dopravit do 1 hodiny do laboratoře k separaci plazmy (zkumavka částečně ponořená do vody s ledem); při předpokládaném transportu krve po odběru delším neţ 1 hodina je nutné krev zcentrifugovat, plazmu odsát ihned po centrifugaci a zamrazit, k vyšetření poslat zamraţenou plazmu; nelze vyšetřovat hemolytické a silně lipemické vzorky: hemoglobin nad 3 g/l, TG nad 10 g/l, bilirubin nad 0,2 g/l; mol/l věk koncentrace < 15 let 7 – 10 15 - 65 let 7 – 15 > 65 let 7 – 20 gravidita 7 – 10 po menopauze 7 – 20 < 3,5 mol/l; ≥ 50 mol/l A) marfanoidní habitus, včetně subluxace či luxace čočky (k dif.dg. Marfanova syndromu a homocystinurie); B) tromboembolické příhody nejasné etiologie (k dif.dg. střední či těţké hyperhomocystinemie jako příčiny ţilních trombóz); C) neurologické poruchy s postiţením bílé hmoty (k dif.dg. remetylačních forem homocystinurie); D) makrocytární a megaloblastová anémie nejasné etiologie (k dif.dg. remetylačních forem homocystinurie); E) metylmalonová acidurie; F) psychomotorická retardace a encefalopatie nejasné etiologie; G) veganská strava; H) indikace k vyšetřování mírně zvýšených koncentrací celkového homocysteinu u kardiovaskulárních onemocnění je kontroverzní a je podrobněji uvedena v publikaci: Refsum H et al.: Facts and recommendations about total homocysteine determinations: an expert opinion; Clin Chem 2004 Jan;50(1):3-32;


Interpretace:


Jednotky: Referenční meze: Kritická hodnota: Indikace: Interpretace:

Garant:

I) chronické selhání ledvin a metabolický syndrom těţká hyperhomocysteinémie (nad 100 mol/l): klasická homocystinurie z homozygotního deficitu cystathionin -syntázy (CBS); homozygotní deficit enzymů remetylační cesty metylentetrahydrofolát reduktáza (MTHFR), methioninsyntáza, poruchy syntézy metylkobalaminu); sekundárně při deficitu vitaminů (folátů, vitaminu B12), při renální insuficienci; střední hyperhomocysteinémie (nad 30 mol/l): mírnější varianty homozygotních genetických deficitů zmíněných výše; deficit cystathioninázy; deficit SAH hydrolázy; získané příčiny: renální insuficience, deficit folátu, B6, B12, podávání metotrexátu, fibrátů a jiné; mírná hyperhomocysteinémie (od hranice referenčního rozmezí do 30 mol/l): běţné polymorfismy jako např. MTHFR A222V, deficit vitaminů, lékové interference; hypohomocysteinémie (< 3,5 mol/l): deficit sulfitoxidázy; Václava Mašková, Josef Bártl, Viktor Koţich

3-Hydroxybutyrát kvantitativní enzymatické spektrofotometrické stanovení, 340 nm, 3-hydroxybutyrát dehydrogenáza, NAD krev ne 5 pracovních dnů Biochemická laboratoř odběr heparinizované krve bez ischemizace končetiny do dvojnásobného objemu studené 8% kys. chloristé, důkladně protřepat, transport zkumavky v malém mnoţství vody s ledem, centrifugovat, odsát deproteinát; společný odběr pro stanovení laktátu, pyruvátu a 3-hydroxybutyrátu mmol/l < 1,5 (na lačno) < 0,2 (po jídle) ≥ 3,0 ketonurie, ketóza, ketoacidóza fyziologická ketóza - hladovění (i fyziologické hladovění přes noc), mizí po najedení patologická ketóza - primární poruchy ketolýzy nepřítomnost ketózy event. jen mírná ketóza po prolongovaném hladovění - primární poruchy ketogeneze, bývá u některých poruch oxidace mastných kyselin Václava Mašková, Sylvie Šťastná


Název: Typ metody: Princip stanovení: Materiál: Statim: Dostupnost: Provádí: Poznámky:


Karnitin volný, celkový, acylovaný, poměr acylovaný/volný karnitin v séru kvantitativní radiometrické enzymatické stanovení, C14-acetylkarnitin, karnitinacetyltransferáza stanovení celkového karnitinu po alkalické hydrolýze sérum, plazma ne 2 týdny Biochemická laboratoř FC volný karnitin TC celkový karnitin AC acylovaný karnitin acylovaný karnitin = rozdíl celkového a volného karnitinu poměr AC/FC = poměr acylovaný karnitin/volný karnitin mol/l Volný karnitin v séru věk koncentrace 0 – 1 den 11,5 –36,0 1 den – 1 týden 10,1 – 21,0 1 – 4 týdny 12,3 – 46,2 4 týdny – 1 rok 26,9 – 49,0 1 – 6 let 24,3 – 62,5 6 – 10 let 21,7 – 66,4 10 – 17 let 21,7 – 64,5 > 17 let 25,4 – 54,1 Celkový karnitin v séru věk koncentrace 0 – 1 den 23,3 – 67,9 1 den – 1 týden 17,4 – 40,6 1 – 4 týdny 18,5 – 58,7 4 týdny – 1 rok 38,1 – 68,0 1 – 6 let 34,6 – 83,6 6 – 10 let 27,8 – 82,9 10 – 17 let 33,7 – 77,0 > 17 let 33,7 – 77,5

Karnitin acylovaný v séru věk 0 – 1 den 1 den – 1 týden 1 – 4 týdny 4 týdny – 1 rok 1 – 6 let 6 – 10 let 10 – 17 let nad 17 let

koncentrace 7,0 – 36,6 2,9 – 23,8 4,1 – 14,5 7,4 – 19,0 4,0 – 28,3 3,1 – 32,1 3,7 – 29,2 5,4 - 30,1

Poměr acylovaný/volný karnitin v séru


Indikace:

Interpretace:



věk hodnota < 1 týden 0,1 – 1,44 > 1 týden 0,1 – 0,9 susp. porucha transportu karnitinu nebo -oxidace mastných kyselin ataky hypoglykémie při hladovění nebo zvýšené zátěţi organismu, s hepatomegalií a hepatopatií, hypertrofická nebo dilatační kardiomyopatie, myopatický syndrom, svalová slabost, ataky rhabdomyolýzy při fyzické zátěţi, SIDS, Reye-like ataky, maternální HELLP syndrom (hypertension, elevated liver enzymes, low platelets) a AFLP syndrom (acute fatty liver pregnancy syndrome); susp. sekundární karnitinový deficit - u organických acidurií, u pacientů na nízkobílkovinné dietě, u pacientů na léčbě valproátem, u pacientů na dlouhodobé parenterální výţivě, při poruchách příjmu potravy, při ketose a ketoacidóze; monitorování u pacientů na suplementaci karnitinem, výrazně sníţená koncentrace volného a celkového karnitinu - u primárního karnitinového deficitu; zvýšená koncentrace volného a celkového karnitinu se sníţeným podílem acylovaného karnitinu – u deficitu CPT I (karnitinpalmitoyltransferázy I); sekundární karnitinový deficit s normálním nebo zvýšeným podílem acylovaných karnitinů - u všech ostatních poruch transportu karnitinu a oxidace mastných kyselin, u organických acidurií, u poruch respiračního řetězce, u pacientů na nízkobílkovinné dietě, u pacientů na léčbě valproátem, u pacientů na dlouhodobé parenterální léčbě, při poruchách příjmu potravy, při ketóze a ketoacidóze; nálezy mohou být intermitentní; vyšetření je nutné opakovat v atace dekompenzace Petr Chrastina, Sylvie Šťastná

Karnitin volný, celkový, acylovaný, poměr acylovaný/volný karnitin v moči kvantitativní radiometrické enzymatické stanovení, 14C-acetylkarnitin, karnitinacetyltransferáza stanovení celkového karnitinu po alkalické hydrolýze moč ne 2 týdny Biochemická laboratoř FC volný karnitin TC celkový karnitin AC acylovaný karnitin acylovaný karnitin = rozdíl celkového a volného karnitinu poměr AC/FC = poměr acylovaný karnitin/volný karnitin mmol/mol kreatininu

Karnitin volný, celkový a acylovaný v moči 100 – 1000


Poměr acylovaný karnitin/volný karnitin v moči Indikace: Interpretace:


Jednotky: Referenční meze: Indikace:

Interpretace:


< 3,5 při odchylkách ve vyšetření karnitinu v séru normální aţ zvýšený podíl acylovaných karnitinů - u poruch transportu karnitinu a poruch -oxidace mastných kyselin, u některých organických acidurií, u pacientů na terapii valproátem, při ketonurii Petr Chrastina, Sylvie Šťastná

-Ketokyseliny semikvantitativní orientační test s 2,4-dinitrofenylhydrazinem moč ano 2 pracovní dny Biochemická laboratoř zkouška je pozitivní v přítomnosti -ketokyselin v moči, je nespecifická; přítomnost ketolátek se odstraňuje zahřátím; falešně pozitivní nález - při glykosurii a ve výrazně koncentrované moči falešně negativní nález – v málo koncentrované moči, mimo ataku obtíţí u intermitentní formy leucinózy arb. j. 0 susp. leucinóza – těţká forma: u novorozence po krátkém bezpříznakovém období progredující encefalopatie (porucha vědomí, problémy s krmením, tonusové změny, křeče, edém mozku), existují i mírnější a intermitní formy v pozdějším věku s atakami dekompenzace, typický zápach moči; susp. deficit E3 podjednotky - výrazný hypotonický syndrom a ataky laktátové acidózy, psychomotorická retardace, mozečkové příznaky; provádí se u kaţdého poprvé vyšetřovaného pacienta, u všech pacientů v atace dekompenzace pozitivní nález je doplněn kvantitativním vyšetřením (aminokyseliny v séru/plasmě, laktát v krvi a organické kyseliny v moči, event. poté cílené enzymatické vyšetření) Zdeněk Čánský, Eva Košťálová

Kreatinin v séru, plazmě kvantitativní enzymatická fotometrická metoda sérum, EDTA plazma ano 3 pracovní dny Biochemická laboratoř vliv materiálu: bilirubin do 440 μmol/l nemá vliv na falešné sníţení výsledku; hemoglobin do 7 g/l nemá vliv na falešné zvýšení výsledků;




Interpretace:


Jednotky: Referenční meze: Indikace: Interpretace: Garant:

triacylglyceroly do 17 mmol/l a kyselina askorbová do 9 mmol/l neinterferují mol/l věk koncentrace 0 – 5 týdnů 12 – 48 5 týdnů - 1 rok 18 – 55 1 rok – 15 let 26 – 80 15 let – 18 let 26 – 90 muţi nad 18 let 63 – 104 ţeny nad 18 let 46 – 90 0 – 15 let > 150 mol/l nad 18 let > 300 mol/l doplňuje vyšetření kyseliny močové pro výpočet indexů (index dle Stapletona, exkreční frakce); susp. porucha syntézy kreatinu (mentální/psychomotorická retardace/regres, porucha vývoje řeči, hypotonie, extrapyramidové příznaky, epilepsie, autistické příznaky) sníţená koncentrace - primární porucha syntézy kreatinu; sekundárně sníţená koncentrace - úbytek svalové hmoty, postiţení jater; zvýšená koncentrace - nefropatie, rhabdomyolýza, zmnoţení svalové hmoty Václava Mašková, Eva Košťálová

Kreatinin v moči kvantitativní Jaffé reakce bez deproteinace - kinetické, fotometrické stanovení moč ano 1 pracovní den Biochemická laboratoř vliv materiálu - stanovení v moči mohou ovlivnit Jaffé pozitivní chromogeny - např. acetoacetát, 2-oxoglutarát, pyruvát, hippurát a askorbát ve vysokých koncentracích; koncentrace kreatininu v moči je ovlivněna pitným reţimem, mnoţstvím svalové hmoty, funkcí ledvin; koncentrace kreatininu < 1 mmol/l - sniţuje přesnost kvantifikace látek vylučovaných močí, výsledky některých semikvantitativních metod mohou být falešně negativní; koncentrace kreatininu > 10-15 mmol/l - výsledky některých semikvantitativních metod mohou být falešně pozitivní mmol/l 0,6 – 15,0 provádí se v kaţdém vzorku moče pro standardizaci vylučování vyšetřovaných analytů do moči Václava Mašková, Eva Košťálová




Interpretace:

Garant: Název: Typ metody: Princip stanovení: Materiál: Statim: Dostupnost: Provádí: Poznámky: Jednotky: Referenční meze: Indikace: Interpretace: Garant: Název: Typ metody: Princip stanovení: Materiál: Statim: Dostupnost: Provádí: Poznámky:

Kyselina fenylpyrohroznová semikvantitativní Føllingův orientační test s chloridem ţelezitým moč ne 2 pracovní dny Biochemická laboratoř nespecifická zkouška - k nespecifickým barevným reakcím dochází i s metabolity léků (salicylát, p-aminosalicylát, antipyrin atd.) a s dalšími látkami (4-hydroxyfenylpyruvát, větvené -ketokyseliny, imidazoylpyruvát, homogentisát aj.) arb. j. 0 susp. fenylketonurie; provádí se u kaţdého poprvé vyšetřovaného pacienta (jako součást screeningu při dodání dostatečného mnoţství moče) pozitivní nález při vysoké koncentraci fenylalaninu v krvi (cca nad 1200 mol/l) u klasické fenylketonurie; pozitivní nález je doplněn kvantitativním vyšetřením fenylalaninu v aminokyselinách v séru Zdeněk Čánský, Eva Košťálová

Kyselina metylmalonová kvantitativní hmotnostní spektrometrie s izotopovým zřeďováním, extrakce do ethylacetátu, trimethylsilylace, vnitřní standard deuterovaná kyselina metylmalonová plazma ano 2 týdny Biochemická laboratoř mol/l 0 monitorování pacientů s metylmalonovou acidémií monitorování pacientů s metylmalonovou acidémií Lucia Krouská, Eva Košťálová

Kyselina močová kvantitativní enzymatické fotometrické stanovení, 546 nm, urikáza, peroxidáza sérum, EDTA plazma, moč ne 3 pracovní dny Biochemická laboratoř standardizované vyšetření kyseliny močové a purinového metabolismu se Strana 58 (celkem 77)


Kritické hodnoty: Referenční meze:

Indikace:

Interpretace:

provádí po 3 denní bezpurinové dietě před odlitím vzorku moči je nutné celý objem moči v nádobě důkladně promíchat, aby v odlitém vzorku i ve zbylé moči v nádobě byla shodná koncentrace kyseliny močové !! vliv materiálu: výsledky stanovení nejsou ovlivněny přítomností hemoglobinu do 5 g/l, bilirubinu do 513 µmol/l, triacylglycerolu do 23 mmol/l, kys. askorbové do 0,3 g/ l mol/l (sérum), mmol/l (moč) Sérum, plazma věk koncentrace v mol/l < 6 týdnů 140 – 340 6 týdnů – 15 let 120 –340 muţi > 15 let 120 – 416 ţeny > 15 let 120 – 340 v séru/plazmě > 600 mol/l Moč koncentrace v mmol/l věk 0 – 110 let 0,4 – 4,6 susp. hyperurikémie 1. familiární dna, zejména u ţen v mladém věku, akutní dnavá arthritis, urolitiáza, zvl. familiární, familiární intersticiální nefritida 2. susp.deficit hypoxanthinfosforibosyltransferázy (HPRT) kompletní deficit (Lesch-Nyhanův syndrom) - psychomotorická retardace, křeče, automutilace, extrapyramidové symptomy, dna, urolitiáza, dnavá nefropatie parciální deficit (Kelley-Seegmillerův syndrom) - bez neurologických symptomů 3. susp. zvýšená aktivita fosforibosylpyrofosfátsyntetázy (PRPPs) ataxie, psychomotorická retardace, dysmorfie, hluchota, dna, urolitiáza, dnavá nefropatie 4. susp. familiární juvenilní hyperurikemická nefropatie (FJHN) - dna, progresivní nefropatie s chronickým renálním selháním, autosomálně dominantní dědičnost 5. glykogenózy jaterní i svalové aj. sekundární hyperurikémie 6. monitorování pacientů s hyperurikémií susp. hypourikémie 1. susp. xanthinurie (deficit xanthinoxidázy) – xanthinová urolitiáza 2. susp. kombinovaný deficit xanthinoxidázy a sulfitoxidázy - xanthinová urolitiáza, symptomatologie deficitu sulfitoxidázy (psychomotorická retardace, křeče, ataxie, dislokace oční čočky) 3. susp. deficit purinnukleosidfosforylázy – SCID, imunodeficit s postiţením buněčné imunity 4. susp. deficit fosforibosylpyrofosfátsyntetázy (PRPPs) – mentální retardace, křeče, megaloblastická anémie 5. susp. dědičná renální hypourikémie – izolovaná hypourikémie zvýšení či sníţení koncentrace v krvi ukazuje na moţnou poruchu metabolismu purinů; opakovaně zjištěné abnormální hodnoty jsou indikací k vyšetření kyseliny močové v moči a purinového metabolismu a po vyloučení sekundárních


Garant: Název: Typ metody: Princip stanovení: Materiál: Statim: Dostupnost: Provádí: Poznámky: Jednotky: Referenční meze:

Indikace: Interpretace:


příčin indikací k cílenému enzymatickému vyšetření nespecifické odchylky - při nestandardní stravě Václava Mašková, Sylvie Šťastná

Kyselina močová - Index podle Kaufmana (IK) výpočtová IK = kyselina močová v moči / kreatinin v moči udává vylučování kyseliny močové močí moč ne 3 pracovní dny Biochemická laboratoř 1 věk hodnota < 2 měsíce 0,10 – 1,80 2 měsíce – 2 roky 0,10 – 1,60 2 – 8 let 0,10 – 1,30 8 – 15 let 0,10 – 1,00 > 15 let 0,10 – 0,80 určen k dynamickému vyšetření kyseliny močové a metabolismu purinů zvýšené vylučování – hyperurikurie při endogenní nadprodukci kyseliny močové, např. z deficitu HPRT či při zvýšené aktivitě PRPPs; sníţené vylučování - dědičná xanthinurie z deficitu xanthinoxidázy nebo z kombinovaného deficitu xanthinoxidázy i sulfitoxidázy viz téţ Kyselina močová v séru a moči; nespecifické sekundární zvýšené vylučování - při nestandardní stravě, metabolickém rozvratu, rozpadu krvinek (po ozařování, onkohematologická onemocnění aj.) Václava Mašková, Sylvie Šťastná

Kyselina močová - Index podle Stapletona (IS) výpočtová IS = (kyselina močová v moči : kreatinin v moči) x kreatinin v séru; hodnotí vylučování kyseliny močové ve vztahu ke kreatininu v séru sérum, moč ne 3 pracovní dny Biochemická laboratoř mol/l < 100 určen k dynamickému vyšetření kyseliny močové a metabolismu purinů zvýšené hodnoty – hyperurikurie při endogenní nadprodukci kyseliny močové, např. z deficitu HPRT či při zvýšené aktivitě PRPPs viz téţ Kyselina močová v séru a moči;



Indikace:

Interpretace:



nespecifické odchylky - při nestandardní stravě Václava Mašková, Sylvie Šťastná

Kyselina močová - Exkreční frakce kyseliny močové EFKM

výpočtová EFKM = (kys. močová v moči : kreatinin v moči) x (kreatinin v séru : kys. močová v séru) x 100 sérum, moč ne 3 pracovní dny Biochemická laboratoř % věk hodnota < 13 roky 5,0 – 20,0 muţi > 13 let 5,0 -12,0 ţeny > 13 let 5,0 – 15,0 k dynamickému vyšetření kyseliny močové a metabolismu purinů susp. familiární dna, hyperurikémie, hyperurikemická nefropatie susp. dědičná renální hypourikémie sníţení EFKM – familiární juvenilní hyperurikemická nefropatie (FJHN), výrazné zvýšení EFKM - dědičná renální hypourikémie viz téţ Kyselina močová v séru a moči; nespecifické odchylky - při nestandardní stravě Václava Mašková, Sylvie Šťastná

Kyselina orotová kvantitativní stanovení fotometrické stanovení, 480 nm, s p-dimethylaminobenzaldehydem po odsolení moči na ionexu, bromaci a redukci kys. askorbovou moč ano 5 pracovních dnů Biochemická laboratoř nutné uvést léky (allopurinol) u intermitentní symptomatologie je nutné vyšetřit také moč z akutní ataky mmol/mol kreatininu věk vylučování < 1 rok < 6,6 1 – 10 let < 3,5 > 10 let < 2,4 > 10 mmol/mol kreat. hyperamonémie susp. poruchy cyklu močoviny susp. HHH syndrom (hyperammonémie, hyperornithinémie, homocitrulinurie)


Interpretace:

Garant: Název: Typ metody: Princip stanovení: Materiál: Statim: Dostupnost: Provádí: Poznámky: Jednotky: Referenční meze*:

Indikace:

Interpretace:

Garant:

susp. intolerance bílkovin s lysinurií (LPI) zátěţový test s allopurinolem k detekci heterozygotek pro deficit ornithintranskarbamoylázy (OTC) susp. dědičná orotová acidurie z deficitu uridinmonofosfátsyntetázy (UMPS) - megaloblastická anémie rezistentní na léčbu, urolitiáza zvýšené vylučování – dědičné metabolické poruchy se zvýšenou produkcí karbamoylfosfátu (deficit OTC, citrulinémie, argininjantarová acidurie, argininémie, HHH syndrom, LPI), dědičná orotová acidurie z deficitu UMPS; sekundárně zvýšené vylučování – hepatopatie; pozitivní nález je doplněn kvantitativním vyšetřením (aminokyseliny v séru/plasmě, moči, puriny a pyrimidiny v moči - uracil, event. cílené enzymatické nebo molekulárně-genetické vyšetření) Josef Bártl, Eva Košťálová

Kyselina sialová kvantitativní fotometrická metoda, 549 nm, s kyselinou 2-thiobarbiturovou moč ne 3 týdny Biochemická laboratoř mmol/g kreatininu Volná Celková Věk kyselina sialová kyselina sialová 0 – 6 měsíců 1,06 0,64 1,97 1,05 7 měsíců – 1 rok 0,79 0,50 1,49 0,82 1 – 2 roky 0,55 0,24 1,01 0,46 2 roky – 5 let 0,44 0,20 0,84 0,30 5 – 10 let 0,24 0,14 0,41 0,23 > 10 let 0,21 0,11 0,35 0,21 susp. zvýšené vylučování kyseliny sialové u poruchy jejího transportu přes lysosomální membránu: infantilní forma (ISSD – infantile free sialic acid storage disease) - časné neprospívání, hepatosplenomegalie, těţká psychomotorická retardace, faciální dysmorfie s hrubšími rysy obličeje, dysostosis multiplex; pozdější forma (Salla disease) - po bezpříznakovém období opoţďování psychomotorického vývoje aţ regres, ataxie pozitivní nález je specifický pro obě formy poruchy transportu kyseliny sialové přes lysosomální membránu; současně bývá zvýšené vylučování sialyloligosacharidů v moči - viz Oligosacharidy Karolína Pešková, Sylvie Šťastná



Jednotky: Referenční meze: Kritické hodnoty: Referenční meze:

Interpretace:

Garant:

Laktát a pyruvát kvantitativní enzymatické spektrofotometrické stanovení, 340 nm, laktátdehydrogenáza, NAD/NADH krev (laktát, pyruvát), likvor (laktát), moč (laktát) ne 5 pracovních dnů Biochemická laboratoř odběr heparinizované krve bez ischemizace končetiny do dvojnásobného objemu studené 8% kyseliny chloristé, důkladně protřepat, transport zkumavky v malém mnoţství vody s ledem, centrifugovat, odsát deproteinát; stanovuje se pouze L-laktát (nikoliv D-laktát); metabolická acidóza se objevuje aţ při koncentraci laktátu v krvi > 5 mmol/l; společný odběr pro stanovení laktátu, pyruvátu a 3-hydroxybutyrátu v krvi; poměr L/P v krvi = koncentrace laktátu/koncentrace pyruvátu; poměr L/P se vypočte pouze v případě zvýšené koncentrace laktátu mmol/l (krev, likvor), mmol/molKr (moč) Laktát v krvi: 0,5 – 2,2 Laktát v likvoru: 1,2 – 2,1 Laktát v krvi: ≥ 5,0 mmol/l Laktát v likvoru: ≥ 4,0 mmol/l Laktát v moči věk vylučování < 1 měsíc < 150 1 – 6 měsíců < 100 6 měsíců – 2 roky < 70 2 – 10 let < 40 > 10 let < 30 Pyruvát v krvi: 0,035 – 0,140 Poměr laktát/pyruvát v krvi: 10 – 20 příčiny laktátové acidózy (L-laktát): 1. glykogenózy, poruchy glukoneogeneze, Krebsova cyklu, -oxidace mastných kyselin, deficit pyruvátkarboxylázy, deficit pyruvátdehydrogenázy, poruchy respiračního řetězce, organické acidurie (metylmalonová, propionová, isovalerová), citrulinémie 2. po námaze (k vzestupu koncentrace v krvi nedochází u poruch glykogenolýzy a glykolýzy ve svalech), při křiku dětí při odběru, hypoxémie, porucha cirkulace, jedy poškozující buněčnou respiraci 3. infekce, průjmy, hepatopatie, poruchy výţivy u intermitentní laktátové acidózy nemusí být současně hyperlaktacidémie a hyperlaktacidurie v likvoru můţe být zvýšená koncentrace laktátu u mitochondriálních encefalopatií i bez hyperlaktacidémie zvýšený poměr laktát/pyruvát: deficit pyruvát karboxylázy a poruchy respiračního řetězce Václava Mašková, Sylvie Šťastná Strana 63 (celkem 77)



Interpretace:



Mukopolysacharidy semikvantitativně (glykosaminoglykany) semikvantitativní screeningový test s azurovou modří moč ne 2 pracovní dny Biochemická laboratoř vylučování mukopolysacharidů kolísá během dne a klesá s věkem, k vyšetření je proto vhodný vzorek z 12 hodinového sběru; před odlitím vzorku moči je nutné celý objem moči v nádobě důkladně promíchat, aby v odlitém vzorku i ve zbylé moči v nádobě byla stejná koncentrace mukopolysacharidů !! arb.j. 0 susp. střádavé onemocnění ze skupiny mukopolysacharidóz (MPS) kostní deformity, faciální dysmorfie s hrubšími rysy, retardace/regres psychomotorického vývoje, hepatosplenomegalie, zákaly rohovek, hernie; provádí se u kaţdého poprvé vyšetřovaného pacienta (součást screeningu při dodání dostatečného mnoţství moče) specificky zvýšené vylučování - mukopolysacharidóza nespecificky zvýšené vylučování - rachitida, revmatické choroby, myokarditida, pacienti v těţkém stavu na intenzivní terapii, kortikoterapie, heparinová terapie falešně negativní nález - v málo koncentrované moči fyziologický nález nevylučuje diagnózu MPS Josef Bártl, Eva Košťálová

Mukopolysacharidy kvantitativně (glykosaminoglykany) kvantitativní fotometrické stanovení, 520 nm, dimethylmethylenová modř, modifikovaná metoda s TRIS moč ne 5 pracovních dnů Biochemická laboratoř vylučování mukopolysacharidů kolísá během dne a klesá s věkem, k vyšetření je proto vhodný vzorek z 12 hodinového sběru; před odlitím vzorku moči je nutné celý objem moči v nádobě důkladně promíchat, aby v odlitém vzorku i ve zbylé moči v nádobě byla stejná koncentrace mukopolysacharidů !! g/mol kreatininu Věk Vylučování < 6 měsíců < 50,0 6 měsíců – 1 rok < 30,3 1 – 2 roky < 26,4


Indikace:

Interpretace:



Indikace:

Interpretace:

2 – 4 roky < 18,4 4 – 6 let < 15,5 6 – 8 let < 12,8 8 – 10 let < 10,0 10 – 18 let < 7,7 > 18 let < 4,6 susp. střádavé onemocnění ze skupiny mukopolysacharidóz (MPS) kostní deformity, faciální dysmorfie s hrubšími rysy, retardace/regres psychomotorického vývoje, hepatosplenomegalie, zákaly rohovek, hernie; ověření zvýšeného vylučování zjištěného orientačním vyšetřením specificky zvýšené vylučování – MPS nespecificky zvýšené vylučování - rachitida, revmatické choroby, myokarditida, pacienti v těţkém stavu na intenzivní terapii, kortikoterapie, heparinová terapie, terapie topiramátem falešně negativní nález – v málo koncentrované moči zvýšené vylučování mukopolysacharidů bude doplněno elektroforetickým vyšetřením mukopolysacharidů a vyšetřením oligosacharidů v moči fyziologický nález nevylučuje diagnózu MPS, zvláště u větších dětí a dospělých a u MPS III a IV při přetrvávajícím podezření na. MPS je nutné provést cílené enzymatické vyšetření i při fyziologickém vylučování mukopolysacharidů Josef Bártl, Eva Košťálová

Mukopolysacharidy kvalitativně – elektroforéza (glykosaminoglykany) kvalitativní, profilová izolace s cetylpyridinium chloridem, 1-D-elektroforéza, barvení alciánovou modří moč ne 2 týdny Biochemická laboratoř vylučování mukopolysacharidů kolísá během dne a klesá s věkem, k vyšetření je proto vhodný vzorek z 12 hodinového sběru; před odlitím vzorku moči je nutné celý objem moči v nádobě důkladně promíchat, aby v odlitém vzorku i ve zbylé moči v nádobě byla stejná koncentrace mukopolysacharidů !! vţdy jsou přítomny chondroitinsulfáty (CS); heparansulfát (HS) a dermatansulfát (DS) můţe být ve stopách vzhledem k intenzitě CS susp. střádavé onemocnění ze skupiny mukopolysacharidóz (MPS) kostní deformity, faciální dysmorfie s hrubšími rysy, retardace/regres psychomotorického vývoje, hepatosplenomegalie, zákaly rohovek, hernie; doplňující vyšetření po zjištění zvýšeného vylučování mukopolysacharidů zjištěného kvantitativním vyšetřením hodnocení profilu mukopolysacharidů analytikem-biochemikem vyšetření stanovuje jednotlivé frakce mukopolysacharidů a slouţí k předběţné typizaci MPS: Strana 65 (celkem 77)



Interpretace:

HS, ( DS); HS > DS – nález susp. pro MPS III DS, ( HS); DS > HS – nález susp. pro MPS I, II nebo VI KS – nález susp. pro MPS IV CS, ( DS, HS) – nález susp. pro MPS VII; typ MPS musí být stanoven enzymatickým vyšetřením; fyziologický nález nevylučuje diagnózu MPS, při trvajícím podezření na konkrétní typ MPS je třeba provést cílené enzymatické vyšetření Josef Bártl, Eva Košťálová

Oligosacharidy, sialyloligosacharidy kvalitativní, profilová TLC, detekce orcinolem nebo resorcinolem nebo ninhydrinem moč ne 2 týdny Biochemická laboratoř k vyšetření je vhodný vzorek z 12 hodinového sběru, protoţe vylučování oligosacharidů kolísá během dne před odlitím vzorku moči je nutné celý objem moči v nádobě důkladně promíchat, aby v odlitém vzorku i ve zbylé moči v nádobě byla stejná koncentrace oligosacharidů !! vysoká koncentrace solí a barviv (orcinolpozitivní látky) v moči způsobuje sníţenou transparenci chromatogramu a znemoţňuje správnou interpretaci nálezu vysoká koncentrace solí způsobuje zdeformování frakcí a znemoţňuje správnou interpretaci nálezu vylučování oligosacharidů klesá s věkem susp. střádavé onemocnění ze skupiny glykoproteinóz a lipidóz; enzymatické poruchy v odbourávání oligosacharidů a lipidů v lysosomech, které mají za následek střádání inkompletně odbouraných substrátů) hodnocení profilu oligosacharidů a sialyloligosacharidů analytikembiochemikem specifické nálezy - -mannosidóza, mannosidóza, -fukosidóza, GM1 gangliosidóza, Schindlerova choroba, sialidóza, galaktosialidóza, aspartylglykosaminurie, glykogenóza II zvýšené vylučování sialyloligosacharidů by mělo být doplněno vyšetřením kyseliny sialové v moči – viz Kyselina sialová málo specifické nálezy - mukolipidóza II, Gaucherova choroba, GM2 gangliosidóza, mukopolysacharidóza I všechny případy (nejčastěji adultní formy) nemusí být zachyceny nález u kojenců na mateřském mléce můţe připomínat -mannosidózu positivní nález je vţdy nutné ověřit enzymatickým vyšetřením při přetrvávajícím podezření na. konkrétní střádavé onemocnění ze skupiny glykoproteinóz a lipidóz je nutné provést cílené enzymatické vyšetření i při fyziologickém profilu oligosacharidů a sialyloligosacharidů Strana 66 (celkem 77)


Jednotky: Referenční meze: Kritické hodnoty: Indikace:

Interpretace:


Zdeněk Čánský, Eva Košťálová

Organické kyseliny v moči profilová, semikvantitativní GC/MS, ethoximace, extrakce do ethylacetátu, trimethylsilylace, vnitřní standard kys. fenylmáselná moč, sběr moči (nejlépe 12 hodinový), případně moč z akutní ataky ano 2 týdny Biochemická laboratoř nutno uvést výţivu, dietu, léky u intermitentní symptomatologie je nutné vyšetření moče také v akutní atace mg/g kreatininu podle interních norem profil suspektní pro DMP susp. organická acidurie, aminoacidopatie, porucha -oxidace mastných kyselin nebo jiná porucha energetického metabolismu; susp. hyper IgD syndrom, tyrosinémie typ I, choroba Cannavanové, alkaptonurie; nejasné akutní, recidivující nebo chronické stavy s metabolickou acidózou nebo alkalózou, hyperamonémií, hyperlaktacidémií, hypoglykémií, ketonurií, epileptická encefalopatie, progredující neurologické nebo multisystémové onemocnění, neprospívání hodnocení profilu organických kyselin analytikem-biochemikem; stanovuje sumu L-laktát + D-laktát (bakteriální původ); vybrané specifické nálezy: mevalonát - hyper IgD syndrom, mevalonová acidurie sukcinylaceton - tyrosinémie typ I N-acetylaspartát - choroba Cannavanové homogentisát – alkaptonurie; riziko falešně negativního nálezu – u intermitentních forem některých DMP Lucia Krouská, Eva Košťálová

Organické kyseliny v séru/plazmě profilová, semikvantitativní GC/MS, deproteinace, ethoximace, extrakce do ethylacetátu, trimethylsilylace, vnitřní standard kys. fenylmáselná sérum, plasma ano 2 týdny Biochemická laboratoř nutné uvést výţivu, dietu, léky u intermitentní symptomatologie je nutné vyšetření séra/plasmy také v akutní atace



Interpretace:

Garant:

Název: Typ metody: Princip stanovení: Materiál: Statim: Dostupnost: Provádí: Poznámky: Jednotky: Referenční meze: Indikace:

Interpretace: Garant: Název: Typ metody: Princip stanovení: Materiál: Statim: Dostupnost: Provádí: Poznámky:


mol/l podle interních norem doplňující vyšetření k vyšetření organických kyselin v moči; event. nelzeli získat moč susp. porucha -oxidace mastných kyselin (deficit MCAD, VLCAD, LCHAD, glutarová acidurie typu II) hodnocení profilu organických kyselin analytikem-biochemikem riziko falešně negativního nálezu – u intermitentních forem některých uvedených DMP Lucia Krouská, Eva Košťálová

Pteriny kvantitativní, profilová HPLC, oxidace oxidem manganičitým, fluorimetrická detekce moč chráněná před světlem (zkumavku zabalit do alobalu), zamrazit ne 2 týdny Biochemická laboratoř – mmol/mol kreatininu podle interních norem 1. odlišení hyperfenylalaninémie/fenylketonurie z deficitu fenylalaninhydroxylázy od hyperfenylalaninémie s poruchou metabolismu pterinů 2. při klinickém podezření na poruchu metabolismu pterinů hodnocení profilu pterinů analytikem-biochemikem Lucia Krouská, Sylvie Šťastná

Puriny a pyrimidiny kvantitativní, profilová HPLC, UV detekce moč, plazma, likvor ne 2 týdny Biochemická laboratoř nejlépe 24 hodinový sběr nebo ranní moč interference některých běţně uţívaných léků (ibuprofen, acetaminophen, acycloguanosin aj.) den před sběrem a v den sběru moče je vhodné vyloučit ze stravy nápoje a jídla obsahující metylxantiny (káva, černý čaj, kakao, lékořice) mmol/mol kreatininu (moč), µmol/l (plazma, likvor) podle interních norem moč – mentální/psychomotorická retardace, tonusové poruchy (hypo/hyper/dystonie), ataxie, automutilace, křeče, poruchy chování, urolitiáza/nefrolitiáza, nejasná hyperurikémie s hyperurikurií, zejména v mladém věku nebo familiární, renální selhání, SCID, nejasný


Interpretace:



Interpretace: Garant:

imunodeficit s postiţením buněčné imunity, susp. deficit ornithintranskarbamoylázy (OTC), anémie megaloblastická/hemolytická, monitorování pacientů léčených allopurinolem plazma - monitorování léčby allopurinolem - k vyloučení rizik neţádoucích účinků likvor – pouze u susp. deficitu adenylosukcinátlyázy (ADSL) hodnocení profilu purinů a pyrimidinů analytikem-biochemikem pozitivní nálezy u: def. HPRT (hypoxanthinguanosinfosforibosyltransferáza) nadprodukce PRPPs (fosforybosylpyrofosfátsyntetáza) def. XO (xanthinoxidáza) def. ADSL (adenylosukcinátlyáza) def. PNP (purinnukleosylfosforyláza) def. APRT (adeninfosforibosyltransferáza) def. ADA (adenosindeamináza) def. OTC (ornithintranskarbamoyláza) def. DPD (dihydropyrimidindehydrogenáza) def. TP (thymidinfosforyláza) def. UMPS (uridinmonofosfáttransferáza) falešně negativní nález - infekce močových cest (bakterie významně sniţují mnoţství purinů a pyrimidinů v moči) Josef Bártl, Eva Košťálová

Redukující látky semikvantitativní Benedictova zkouška se síranem měďnatým moč ne 2 pracovní dny Biochemická laboratoř prokazuje zvýšenou koncentraci sacharidů v moči; pozitivní reakce - glukóza, fruktóza, galaktóza, maltóza, laktóza, xylóza a dextróza; negativní reakce - sacharóza; falešně pozitivní nález - vysoká koncentrovanost moče, vitamin C a jiné redukující látky (4-hydroxyfenylpyruvát, kyselina homogentisová, kyselina močová, oxalát, salicyláty, hippurát) arb. j. 0 susp. melliturie; susp. galaktosémie, susp. hereditární intolerance fruktózy; provádí se u kaţdého poprvé vyšetřovaného pacienta pozitivní nález doplní kvantitativní vyšetření sacharidů, kyseliny homogentisové a kyseliny močové a oxalátu v moči Zdeněk Čánský, Sylvie Šťastná


Název: Typ metody: Princip stanovení: Materiál: Statim: Dostupnost: Provádí: Poznámky: Jednotky: Referenční meze: Indikace: Interpretace:

Garant: Název: Typ metody: Princip stanovení: Materiál: Statim: Dostupnost: Provádí: Poznámky: Jednotky: Referenční meze: Indikace: Interpretace: Garant: Název: Typ metody: Princip stanovení: Materiál: Statim: Dostupnost: Provádí: Poznámky: Jednotky:

Sacharidy kvalitativní, profilová 2-D-TLC, detekce naftolresorcinolem moč ne 2 týdny Biochemická laboratoř hodnotí semikvantitativně zvýšenou koncentraci sacharidů proti standardům susp. melliturie (viz redukující látky) zvýšená koncentrace galaktózy – galaktosémie, sekundární galaktosurie u hepatopatie a postiţení střevní sliznice, častý nález u kojenců zvýšená koncentrace fruktózy - heteditární intolerance fruktózy, deficit fruktóza-1,6-bifosfatázy, esenciální fruktosurie, sekundární fruktosurie u hepatopatie a postiţení střevní sliznice, deficit disacharidáz; nález jiných sacharidů je z hlediska DMP nevýznamný Zdeněk Čánský, Sylvie Šťastná

Sfingolipidy kvalitativní extrakce lipidů směsí chloroformu a metanolu, HPTLC, detekce orcinolem, resorcinolem tkáně ne 3 týdny Enzymologická laboratoř autoptický materiál (játra, slezina, ledviny, mozek atd.) susp. lysosomální střádavé onemocnění, zejména pro post mortem vyšetření, kdy není k dispozici materiál ke stanovení enzymatické aktivity pozitivní nález svědčí pro lysosomální střádavé onemocnění Jana Ledvinová, Sylvie Šťastná

Siřičitany semikvantitativní diagnostický prouţek Sulfitest Merck moč ne 2 pracovní dny Biochemická laboratoř siřičitany jsou nestabilní, test je nutno provést v čerstvé moči; přítomnost kys. askorbové ruší stanovení mg/l Strana 70 (celkem 77)

Referenční meze: Indikace: Interpretace:


Interpretace:


0 susp. deficit sulfitoxidázy a deficit molybdenového kofaktoru; provádí se u kaţdého poprvé vyšetřovaného pacienta pozitivní - deficit sulfitoxidázy a deficit molybdenového kofaktoru; falešně pozitivní - interakce s léky (podání 2-merkaptoethansulfonátu); negativní výsledek nevylučuje deficit sulfitoxidázy; viz téţ Thiosulfáty kvantitativně Zdeněk Čánský, Eva Košťálová

Sukcinylaceton kvantitativní enzymatické fotometrické stanovení, 555 nm, inhibiční metoda, aminolevulináthydratáza, Ehrlichovo činidlo moč ne 2 týdny Biochemická laboratoř se stanovením můţe interferovat řada Ehrlich-pozitivních látek, ale vzhledem ke značnému zředění moči je jejich vliv omezen mol/l < 2,0 susp. tyrosinémie I. typu; monitorování pacientů s tyrosinémií I. typu léčených NTBC; ověření nálezu zvýšeného vylučování sukcinylacetonu v rámci vyšetření organických kyselin v moči zvýšenou koncentraci je nutno ověřit vyšetřením sukcinylacetonu v rámci vyšetření organických kyselin v moči; specifický nález pro tyrosinémii I. typu Zdeněk Čánský, Eva Košťálová

Sukcinylaminoimidazolkarboxamidribosid (SAICAr) kvalitativní TLC, detekce Paulyho činidlem moč ne 2 týdny Biochemická laboratoř nedetekován susp. deficit adenylosukcinátlyázy (ADSL) - psychomotorická retardace, autistické rysy, křeče, hypotonie, ataxie pozitivní nález – specifický nález u deficitu ADSL; riziko falešně negativního nálezu - v alkalické moči, při nízké koncentrovanosti moče, metabolit je nestabilní při pokojové teplotě; při pozitivním nálezu se indikuje profilové vyšetření purinů a pyrimidinů


Garant: Název: Typ metody: Princip stanovení: Materiál:

Statim: Dostupnost: Provádí: Poznámky: Jednotky: Referenční meze: Indikace: Interpretace:

Garant: Název: Typ metody: Princip stanovení: Materiál: Statim: Dostupnost: Provádí: Poznámky: Jednotky: Referenční meze: Kritické hodnoty: Indikace:

v moči, případně v likvoru Josef Bártl, Eva Košťálová

Sulfatidy kvalitativní (HPTLC), kvantitativní (MS/MS) HPTLC: extrakce směsí chloroformu a metanolu, detekce orcinolem; MS/MS: extrakce směsí chloroformu a metanolu moč ranní celá porce včetně sedimentu; při přelévání moči do jiné nádoby je nutné celý objem moči v původní nádobě důkladně promíchat a teprve poté přelít do nádoby, ve které bude moč transportována ne 3 týdny Enzymologická laboratoř susp. metachromatická leukodystrofie (MLD) susp. mnohočetný sulfatázový deficit (MSD) positivní nález 1. MLD s deficitem arylsulfatázy A; 2. MSD - v moči téţ zvýšené vylučování mukopolysacharidů; 3. deficit proteinového aktivátoru saposinu B (dříve SAP1) nebo deficit prosaposinu (prekursor saposinů A,B,C,D) – normální aktivita arylsulfatasy A v leukocytech, v moči kromě sulfatidů téţ zvýšené vylučování globotriaosylceramidu; viz téţ Globotriaosylceramid Jana Ledvinová, Eva Košťálová

Tandemová hmotnostní spektrometrie (MS/MS) aminokyseliny a acylkarnitiny screeningová MS/MS, extrakce do metanolu, butylace, kvantifikace pomocí deuterovaných vnitřních standardů suchá krevní kapka ano 5 pracovních dnů Biochemická laboratoř u intermitentní symptomatologie je nutné vyšetření také v akutní atace podle interních norem profil suspektní pro DMP 1. susp. poruchy metabolismu aminokyselin - hyperfenylalaninémie, hypertyrosinémie, leucinóza, citrulinémie I 2. susp. organické acidurie a poruchy oxidace mastných kyselin se zvýšeným vylučováním specifických acylkarnitinů - glutarová acidurie


Interpretace:



typu I, metylmalonová acidémie, propionová acidémie, isovalerová acidémie, deficit -ketothiolázy, deficit 3-metylkrotonyl-CoA karboxylázy, 3-hydroxy-3-metylglutarová acidurie, deficit karnitinacylkarnitintranslokázy, deficit SCAD, MCAD, LCHAD, VLCAD, glutarová acidurie II. typu, deficit CPT I a CPT II hodnocení profilu aminokyselin a acylkarnitinů analytikem-biochemikem; riziko falešně negativního nálezu – u intermitentních forem některých uvedených DMP a po transfuzi krve nebo erymasy; pokud pacient dostal transfuzi plné krve nebo erymasy, doporučujeme kontrolní vyšetření z nového vzorku odebraného tři měsíce po poslední transfuzi; při opakovaných transfuzích doporučujeme kontrolní vyšetření před další transfuzí Petr Hornik, Sylvie Šťastná

Thiosírany kvalitativně kvalitativní orientační test s azidem sodným a jodem moč ne 2 pracovní dny Biochemická laboratoř nadbytek kyseliny askorbové ruší stanovení arb. j. 0 susp. deficit sulfitoxidázy a deficit molybdenového kofaktoru; provádí se u kaţdého poprvé vyšetřovaného pacienta pozitivní - deficit sulfitoxidázy a deficit molybdenového kofaktoru falešně pozitivní - interakce s léky (po podání 2-merkaptoethansulfonátu) v případě pozitivního výsledku nutno provést kvantitativní stanovení thiosíranů viz téţ Siřičitany; Thiosírany kvantitativně Josef Bártl, Eva Košťálová

Thiosírany kvantitativně kvantitativní fotometrické stanovení, thiosírany tvoří s kyanidem a ţelezitými ionty barevný rhodanid moč ne 5 pracovních dnů Biochemická laboratoř ampicilin a salicyláty (vč. paracetamolu) ruší stanovení mmol/mol kreatininu 0 - 90 susp. deficit sulfitoxidázy a deficit molybdenového kofaktoru


Interpretace:



Indikace:

Interpretace:

Garant:

pozitivní - deficit sulfitoxidázy a deficit molybdenového kofaktoru falešně pozitivní – lékové interference (např. ampicilin, salicyláty vč. paracetamolu atd.) viz téţ Siřičitany; Thiosírany Josef Bártl, Eva Košťálová

Velmi dlouhé mastné kyseliny (VLCFA) kvantitativní, profilová GC-FID, extrakce do hexanu, methylesterifikace, vnitřní standard C15 a C27 sérum, plazma ne 2 týdny Biochemická laboratoř stanovuje velmi dlouhé mastné kyseliny: nevětvené (kyselina behenová C22:0, lignocerová C24:0, cerotová C26:0) a s rozvětveným řetězcem (kyselina pristanová, kyselina fytanová) stanovuje kyseliny volné i vázané ve formě lipidů vyšetření nelze provést z hemolytického séra µg/ml kys. fytanová < 3,5 kys. pristanová < 0,65 C26 < 0,50 C26/C22 < 0,021 C24/C22 < 1,000 susp. peroxisomální onemocnění – v různé kombinaci příznaky neurologické (encefalopatie, hypotonie, křeče, periferní neuropatie, poruchy chůze), oční (retinopatie, slepota, katarakta), hepatální dysfunkce (hepatomegalie, hepatopatie, cholestáza), kraniofaciální dysmorfie a kostní abnormality patologické nálezy u poruch peroxisomální biogeneze a u poruch v odbourávání VLCFA, kyseliny pristanové a kyseliny fytanové; heterozygotky X-ALD - mohou mít normální koncentrace VLCFA; kyselina fytanová a kyselina pristanová jsou exogenního původu, jejich koncentrace je ovlivněna stravou a věkem (proto např. u některých novorozenců a kojenců s peroxisomální poruchou mohou být koncentrace kyseliny fytanové a kyseliny pristanové v normě) Lucia Krouská, Eva Košťálová


15. Metabolické vyšetření pro samoplátce Vyšetření pro samoplátce se provádí za přímou úhradu. Současnou cenu 1 bodu uvádí Tabulka 38. Tabulka 38: Cena bodu pro cizince Výkony Cena 1 bodu Akutní výkony 1,12 Kč Neakutní výkony 3 Kč Bodové ohodnocení kódů i cena bodu se můţe měnit. Konzultace o vyšetření pro samoplátce je moţná na TF 224 967 710 (MUDr. Šťastná). V Tabulkách 32, 33 a 34 je uveden seznam nabízených vyšetření a jejich bodové ohodnocení dle Seznamu zdravotních výkonů s bodovými hodnotami v roce 2010. Tabulka 39: Seznam klinických vyšetření s bodovým ohodnocením Kód Klinická vyšetření 28021 Komplexní klinicko-genetické vyšetření se stanovením diagnózy 28022 Klinicko-genetické vyšetření při dosud neuzavřené diagnóze 28023 Kontrolní klinicko-genetické vyšetření 29001 Komplexní vyšetření dětským neurologem 29002 Cíleně zaměřené vyšetření dětským neurologem 29003 Kontrolní vyšetření dětským neurologem 31021 Komplexní vyšetření pediatrem 31022 Cílené vyšetření pediatrem 31023 Kontrolní vyšetření pediatrem 81021 Komplexní vyšetření klinickým biochemikem 81022 Cílené vyšetření klinickým biochemikem 81023 Kontrolní vyšetření klinickým biochemikem

Body 2472 1600 321 638 324 161 640 326 162 632 318 158

Tabulka 40: Seznam vyšetření metabolitů s bodovým ohodnocením Kód 81647 81655 81265 81665 81667 81339 81669 81645 81751 81413 81651 81659

Vyšetření metabolitů Aktivita biotinidázy screening Aktivita biotinidázy kvantitativně Aktivita enzymů HPLC Aktivita lyzosomálních enzymů s neradioaktivním substrátem Aktivita lyzosomálních enzymů s radioaktivním substrátem Aminokyseliny kvantitativně Aminokyseliny screening papírovou chromatografií Disulfidy Expertíza pro laboratorní diagnostiku DMP Fenylalanin Galaktosa + galaktosa-1-fosfát Galaktitol Strana 75 (celkem 77)

Body 34 568 1087 1635 2656 642 232 13 316 213 105 286

Kód 81651 81655 81651 91427 91433 81461 81655 81487 81645 81499 81645 81463 81661 81661 81523 81655 81525 81521 81645 81549 81651 81747 81651 81661 81567 81663 81663 81587 81645 81377 81749 97111 81651 81651 81645 81263 81649 81651 81645 81655 81657

Vyšetření metabolitů Globotriaosylceramid Glykogen v erytrocytech Guanidinoacetát Izolace lymfocytů Izolace leukocytů sedimentací (buffy coat) Homocystein celkový 3-hydroxybutyrát Karnitin (2x - celkový a volný karnitin) -Ketokyseliny Kreatinin Kyselina fenylpyrohroznová (fenylpyruvát) Kyselina homogentisová screening Kyselina homogentisová kvantitativně Kyselina metylmalonová Kyselina močová Kyselina orotová Kyselina sialová Laktát Mukopolysacharidy orientačně Mukopolysacharidy kvantitativně Mukopolysacharidy elektroforésa Novorozenecký screening DMP tandemovou hmotnostní spektrometrií Oligosacharidy Organické kyseliny Oxaláty ZRUŠIT Pteriny Puriny a pyrimidiny Pyruvát Redukující látky screening Sacharidy Selektivní screening DMP tandemovou hmotnostní spektrometrií Separace séra nebo plazmy Sfingolipidy Sialyloligosacharidy Siřičitany Sukcinylaceton fotometricky Sukcinylaminoimidazolkarboxamidribosid (SAICAr) Sulfatidy Thiosírany orientačně Thiosírany kvantitativně Velmi dlouhé mastné kyseliny a kyselina fytanová (VLCFA)


Body 105 568 105 215 165 473 568 340 13 17 13 12 451 451 22 568 59 53 13 112 105 184 105 451 151 552 552 81 13 266 184 16 105 105 13 147 76 105 13 568 271

Tabulka 41: Seznam molekulárně genetických vyšetření s bodovým ohodnocením Kód Molekulárně genetické vyšetření Body 94119 Izolace a uchování lidské DNA (RNA) 1223 94123 PCR analýza lidské DNA 2204 94127 Elektroforéza nukleových kyselin v polyakrylamidu 888 94183 Štěpení DNA restrikčními enzymy 380 94191 Fotografie gelu 23 94193 Elektroforéza nukleových kyselin 418 94195 Syntéza cDNA reverzní transkripcí 362 94199 Amplifikace metodou PCR 997 94211 Dlouhodobá kultivace buněk 6232 94213 Zmrazení buněčných linií 7659


Metabolická příručka 2011

Recommend Documents