48
LAMPIRAN
49 Lampiran 1. Penentuan Kadar Air (Apriyantono et al. 1989) Cawan aluminium dikeringkan dalam oven pada suhu 100 oC selama 15 menit, lalu didinginkan dalam desikator selama 10 menit. Ditimbang cawan dengan neraca analitik (a gram). Ditimbang sampel dengan neraca analitik sebanyak 5 gram (b gram). Dikeringkan dalam oven pada suhu 100 oC selama kurang lebih 6 jam, didinginkan dalam desikator kemudian ditimbang (c gram). Dikeringkan kembali dalam oven selama 15-30 menit, lalu ditimbang kembali. Pengeringan diulangi hingga diperoleh berat sampel yang relatif konstan (berat dianggap konstan jika selish berat sampel kering yang ditimbang ≤0.0003 gram). Kadar air (basis kering) =
Keterangan
b – (c-a) x 100 % c-a
:
b= bobot sampel (g) c= bobot sampel dan cawan sesudah dikeringkan (g) a= bobot cawan kosong (g)
Lampiran 2. Analisa Protein Metode Semi Mikro Kjeldahl (Sulaeman et al 1994) Bahan yang ditimbang kira-kira 0,5 – 1 g. Bahan tersebut dimasukkan ke dalam labu Kjeldahl, ditambahkan 0,5 g selenium mix dan 7 ml H2SO4 pekat. Sampel kemudian didestruksi sampai larutan yang berwarna jernih kehijauan dan uap SO2 hilang. Kemudian hasil destruksi ditambah akuades dan dimasukkan ke dalam labu destilasi. NaOH 33% ditambahkan ke dalam labu destilasi dan kemudian dilakukan destilasi. Destilat ditampung dalam 20 ml larutan asam borat 3% lalu dititrasi dengan HCl standar (indikator metil merah). % Kadar Protein = (ml titrasi x 14 x N HCl x fk x 100)/ mg sampel
50 Lampiran 3. Perhitungan Analisis Kadar Air Crackers Jenis crackers
Ulang an 1
Kontrol 2 Dengan tepung kepala ikan lele dumbo
1 2 1
Komersial 2
Berat sampel (g)
Berat cawan (g)
Cawan + sampel Sebelum dioven (a)
Cawan + sampel Setelah dioven (b)
Kadar air (%)
3,1710
5,8168
8,9878
8,9013
2,73
3,0007
5,5625
8,5632
8,4953
2,26
3,0794
5,6558
8,7352
8,6566
2,55
3,1620
5,8815
9,0435
8,9567
2,75
3,0285
5,6030
8,6315
8,5315
3,30
3,0118
6,6413
9,6531
9,5546
3,27
3,0155
7,1911
10,2066
10,1288
2,58
3,0948
5,4179
8,5127
8,4321
2,60
3,0731
5,7503
8,8234
8,7804
1,40
3,0422
5,7214
8,7636
8,7253
1,26
3,0672
6,0059
9,0731
9,0176
1,81
3,0522
5,8776
8,9298
8,8772
1,72
ratarata (%)
2,57
2,94
1,55
Contoh Perhitungan: % kadar air
= ((a – b)/ berat sampel) x 100% = ((8,9878 – 8,9013)/3,1710 x 100% = 2,73%
Lampiran 4. Perhitungan Analisis Kadar Protein Crackers Jenis crackers
Ulang an 1
Kontrol 2 Dengan tepung kepala ikan lele dumbo
1 2 1
Komersial 2
Berat sampel (g)
ml titrasi blanko
ml titrasi sampel
kadar protein (%)
0,1814
1,20
13,00
8.99
0,1489
1,20
11,00
9,09
0,1926
1,20
13,60
8,89
0,1867
1,20
13,35
8,99
0,1711
1,20
14,40
10,66
0,1579
1,20
14,00
11,20
0,1515
1,20
13,70
11,40
0,1462
1,20
13,00
11,15
0,1681
1,20
7,45
5,14
0,1215
1,20
7,50
7,16
0,1176
1,20
6,85
6,64
0,1833
1,20
10,35
6,90
ratarata (%)
8,99
11,10
6,46
Contoh perhitungan : Kadar Protein = ((ml titrasi sampel – ml titrasi blanko) x NA x 100 x fk x N HCl) sampel (g) = ((13 – 1,2) x 14 x 100 x 6,25 x 0,015789)/(0,1814 x 1000) = 8,99%
51 Ket : N HCl = 0,015789, faktor konversi (fk) = 6,25, dan MR nitrogen = 14
Lampiran 5. Perhitungan Analisis Kadar Fosfor Crackers Standar Fosfor Konsentrasi P2O5 (mg)
Absorbansi
0,000 0,025 0,050 0,100 0,125 0,150 0,200
0,000 0,067 0,119 0,209 0,262 0,319 0,422
n = 1 ulangan Jenis Crackers
Ulangan
Berat sampel
Absorban sampel
Kadar P2O5
Kadar P
1
0,2494 0,2446
0,54 0,51
206,90 199,06
84,39 81,20
0,2380
0,46
184,21
75,14
0,2456
0,47
182,46
74,42
0,2332
0,69
283,66
115,70
0,2129
0,56
251,48
102,58
0,2706
0,66
233,70
95,33
0,2499
0,66
253,06
103,22
Kontrol 2
Dengan tepung kepala ikan lele dumbo
1 2 1
Komersial
2
0,2149
0,75
334,90
136,60
0,2133
0,81
364,69
148,76
0,2123
0,91
412,10
168,09
0,2169
0,86
381,00
155,41
Contoh perhitungan kadar fosfor sampel: Berdasarkan kurva standar P2O5 di atas, maka persamaan linear yang dapat digunakan untuk mencari kadar fosfor sampel adalah Y = aX + b
dimana
= 2.062X + 0.008
Y = absorbansi X = konsentrasi P2O5 (mg) a = slope b = intercept
Jika absorbansi sampel dengan berat 0.2494 g dalam 100 ml aliquot adalah 0,54, maka kadar P2O5 adalah: Jawab :
Y = 2.062X + 0.008
52 X = Y – 0,008 = 0,5004 – 0,008 a 2,062
= 0,2580 mg
Karena X (mg) merupakan konsentrasi P2O5 sampel per 50 ml aliquot maka kadar P2O5 sampel (mg/100g) dalam 0.2494 g sampel, dan faktor pengenceran 2 adalah: Kadar P2O5
= X x fp = 0,2580 mg x 2 = 2,0689 mg/g = 206,90 mg/100g g sampel 0,2494 g
karena dalam molekul P2O5 terdapat 2 atom P, maka : Kadar P
= berat atom P x 2 x kadar P2O5 berat molekul P2O5 = 31 x 2 x 206,90 mg/100g = 84,39 mg/100g 152
Lampiran 6. Perhitungan Analisis Total Kalsium Crackers Standar Kalsium Konsentrasi kalsium satandar (ppm)
Tinggi puncak (kotak)
0,0000 2,0000 4,0000 6,0000 8,0000 10,0000
0,0 11.5 21,0 31.5 43.5 53,0
Ket: tinggi kotak dihitung berdasarkan jumlah kotak pada kertas milimeter blok yang dilewati garis merah pada saat pembacaan menggunakan AAS (n = 1 ulangan). Berdasarkan data standar kalsium tersebut maka persamaan linier yang dapat digunakan untuk perhitungan kadar kalsium crackers seperti pada gambar berikut
53
Jenis Crackers
Ulangan
Berat sampel
Tinggi puncak (kotak)
Kadar Ca (mg/100g)
1
3,0102 3,1931
55,5 57,0
89,56 89,13
3,1374
55,0
84,34
2,0051
45,0
82,09
3,0910
20,0
554,71
3,1931
20,0
536,97
3,0628
20,5
576,14
3,1556
20,0
543,35
Kontrol 2
Dengan tepung kepala ikan lele dumbo
1 2 1
Komersial
2
3,2038
1198,22
3,0989
1212,85
3,1723
1301,40
3,0066
1127,68
Blanko
rata-rata (mg/100g)
86,28
552,79
1210,04
28,5
Contoh perhitungan kadar kalsium sampel: Berdasarkan kurva standar kalsium di atas, maka persamaan linear yang dapat digunakan untuk mencari kadar Ca sampel adalah Y = aX + b = 5.307X + 0.214
dimana
Y = Peak standar atau sampel X = konsentrasi kalsium (ppm) a = slope b = intercept
Jika tinggi puncak sampel dengan berat 3.1020 g dalam 100 ml aliquot adalah 55.5 kotak, faktor pengenceran 1 dan tinggi puncak blanko 28.5 kotak, maka kadar kalsium adalah: Jawab : Y = (tinggi puncak sampel dalam aliquot x fp) – tinggi puncak blanko Y = aX + b aX + b
= (tinggi puncak sampel dalam aliquot x fp) - blanko
X (ppm)
= ((tinggi puncak sampel dalam aliquot x fp) - blanko) – b a X (ppm) = ((55.5 x 1) – 28,5) – 5,307 = 26,96 ppm 0,214 Karena X (ppm) merupakan konsentrasi kalsium sampel dari volume aliquot maka kadar kalsium sampel (mg/100g) dengan berat 3,1020 g adalah: Kadar Ca
= X (ppm) x ml aliquot Berat sampel (g) = 26,96 ppm x 100 ml 3,1020 g = 26,96 mg/1000 g x 100 ml = 0,89 mg/g = 89,56 mg/100g 3,1020 g
55
Lampiran 7. Perhitungan Analisis Bioavailabilitas Kalsium Jenis Crackers
Kontrol
kadar protein rata-rata
Berat setara 2 g protein
penimban gan sampel Bio
Kadar Ca sampel
Total Ca sampel bio
berat Dialisat
pembacaa n AAS
Aliquot
(%)
(g)
(g)
(ppm)
(mg)
(g)
Abs
ml
8.99
22.2469
3.5524
895.6108
3.1816
30.4422
0.1604
50
8.99
22.2469
3.5578
891.2867
3.1710
34.8528
0.1646
8.99
22.2469
3.5552
843.3632
2.9983
40.1458
8.99
22.2469
3.5532
820.8905
2.9168
36.2623
kadar Ca dialisat
Ca dialisat
Bioavailab ilitas
ppm
mg
%
1
17.7368
0.5399
16.97
50
1
15.9234
0.5550
17.50
0.1950
50
1
16.5334
0.6637
22.14
0.1153
50
1
10.4399
0.3786
12.98
a
b
FP
11.1
18.0180
3.0032
5547.062
16.6589
39.7364
0.6978
50
11.1
18.0180
3.0025
5369.693
16.1225
38.6161
0.6808
50
11.1
18.0180
3.0016
5761.384
17.2934
37.7725
0.6496
50
11.1
18.0180
3.0015
5433.505
16.3087
28.4232
0.7015
50
0.008
Dengan tepung kepala ikan lele dumbo
0.013974
rata-rata
17.40
1
61.9785
2.4628
14.78
1
62.2014
2.4020
14.90
1
60.6351
2.2903
13.24
1
87.1134
2.4760
15.18
rata-rata
Komersial
14.53
6.46
30.9598
4.5862
11982.22
54.9529
33.6728
0.1221
50
10
128.7770
4.3363
7.89
6.46
30.9598
4.5865
12128.46
55.6272
45.4676
0.1198
50
10
93.5530
4.2536
7.65
6.46
30.9598
4.5867
13014.04
59.6915
39.9455
0.1394
50
10
124.0244
4.9542
8.30
6.46
30.9598
4.5864
11276.81
51.7200
38.9486
0.1189
50
10
108.3386
4.2196
8.16
blanko
0.0013
rata-rata
8,00
55 Contoh perhitungan : 1. Berat setara 2 gram protein
= (2/kadar protein sampel) x100 = (2 g/8,99) x 100 = 22,2469 g
2. Perkiraan berat suspensi T1atau T2 = 22,2469 g + 100 ml H2O bebas ion + 2,7531 ml HCl = 125 g (asumsi, sampel membutuhkan ± 2,7531 ml HCl untuk membuat pHnya menjadi 2) Penimbangan sampel bio setara 20 g suspensi sampel = (20 g/125 g) x 22,2469 g= 3,5595 g 3. Total Ca sampel bio
= penimbangan sampel bio x kadar Ca (ppm) = 3,5524 g x 827,852 mg/1000 g= 3.1290 mg
Standar kalsium Konsentrasi Ca (ppm)
Absorbansi
2.0000 4.0000 8.0000 16.0000
0.0365 0.0632 0.1207 0.2316
4. Berdasarkan kurva standar kalsium di atas, maka persamaan linear yang dapat digunakan untuk mencari kadar Ca sampel adalah Y = aX + b = 0,013974X + 0.0081957
56 Dimana
:
Y = absorbansi X = konsentrasi kalsium (ppm) a = slope b = intercept
Jika absorbansi sampel dengan berat dialisat 30.4422 g dalam 50 ml aliquot adalah 0,1604 faktor pengenceran 1 dan absorbansi blanko 0.0013, maka kadar kalsium adalah: Y = (abs sampel dalam aliquot x fp) - abs blanko Y = aX + b aX + b = (abs sampel dalam aliquot x fp) - abs blanko X (ppm) X (ppm)
= ((abs sampel dalam aliquot x fp) - abs blanko) – b a = ((0.1604 x 1) – 0.0013) – 0.0081957= 10,7989 ppm 0.013974
Karena X (ppm) merupakan konsentrasi kalsium sampel dalam volume aliquot, maka kadar kalsium sampel (mg/100g) dengan berat 3,1020 g adalah: Kadar Ca dialisat
= X (ppm) x ml aliquot Berat dialisat (g) = 10,7989 ppm x 50 ml 30.4422 g = 10,7989 ppm x 50 ml 30.4422 g = 17,7368 ppm
5. Jika dalam 1000 g terdapat 17,7368 ppm, maka dalam 30,4422 g dialisat terdapat mg Ca dialisat
= (berat dialisat /1000) x kadar Ca dialisat (ppm) = (30.4422/1000) x 17.7368 = 0,5399 mg
6. Bioavaiabilitas Ca (%)
= Ca Dialisat/Total Ca sampel bio x 100% = 0,5399 / 3.1290 x 100% = 16.9711 %
57 Lampiran 8. Hasil Sidik Ragam (One Way ANOVA) Kadar Air, Protein, Fosfor, Kalsium, Bioavailabilitas Kalsium, dan Total Kalsium Tersedia.
Air
Kalsium
Fosfor
Protein
Jumlah Kuadrat
df
Kuadrat tengah
F hitung
Sig.
Perlakuan
2.198
2
1.099
8.961
.054
Galat
.368
3
.123
Total
2.566
5
Perlakuan
22.849
2
11.425
127.265
.001
Galat
.269
3
.090
Total
23.118
5
Perlakuan
5877.870
2
2938.935
31.764
.010
Galat
277.575
3
92.525
Total
6155.446
5
1347473.254
2
673736.627
1.225E4
.000
164.954
3
54.985
1347638.208
5
92.787
2
46.394
392.213
.000
Galat
.355
3
.118
Total
93.142
5
7482.137
2
3741.068
3.911E3
.000
.956
3.912E3
.000
Antar kelompok Dalam kelompok Total
Bioavailabilitas Perlakuan kalsium
Kalsium
Perlakuan
tersedia per
Galat
2.869
3
Total
7485.006
5
kalsium
Perlakuan
1448.537
2
724.269
tersedia per
Galat
.555
3
.185
Total
1449.093
5
100g
takaran saji
* Signifikansi lebih kecil dari p=0,05, berbeda nyata
58 Lampiran 9. Hasil Uji Lanjut Duncan terhadap kadar Air, Protein, fosfor, Kalsium dan Bioavailabilitas kalsium a. Kadar protein Jenis Crackers
N
Komersial Kontrol Dengan tepung kepala ikan lele dumbo Sig.
2 2 2
Subset for alpha = 0.05 1 2 3 6.639600E0 9.243400E0 1.141310E1 1.000 1.000 1.000
Nilai rata-rata pada kolom berbeda, berbeda nyata
b. Kadar Fosfor Jenis Crackers
2
Subset for alpha = 0.05 1 2 8.099645E1
2
1.071293E2
N
Kontrol Dengan tepung kepala ikan lele dumbo Komersial Sig.
2 .073
1.564825E2 1.000
Nilai rata-rata pada kolom berbeda, berbeda nyata
c. Total Kalsium Jenis Crackers Kontrol Dengan tepung kepala ikan lele dumbo Komersial Sig.
N 2 2 2
Subset for alpha = 0.05 1 2 3 8.869835E1 5.682932E2 1.243972E3 1.000 1.000 1.000
Nilai rata-rata pada kolom berbeda, berbeda nyata
d. Bioavailabilitas Kalsium Jenis Crackers
N
Komersial Dengan tepung kepala ikan lele dumbo Kontrol Sig.
2 2 2
Nilai rata-rata pada kolom berbeda, berbeda nyata
Subset for alpha = 0.05 1 2 3 7.999000E0 1.452710E1 1.739725E1 1.000 1.000 1.000
59 e. Total kalsium tersedia per 100 g crackers Jenis Crackers Kontrol Dengan tepung kepala ikan lele dumbo Komersial Sig.
N 2 2 2
Subset for alpha = 0.05 1 2 3 1.501015E1 8.030450E1 9.679070E1 1.000 1.000 1.000
Nilai rata-rata pada kolom berbeda, berbeda nyata
f.
Total kalsium tersedia pertakaran saji crackers (44 g) Jenis Crackers
N
kontrol dengan tepung kepala ikan lele dumbo komersial Sig.
2 2 2
Subset for alpha = 0.05 1 2 3 6.604500E0 3.533395E1 4.258790E1 1.000 1.000 1.000
Nilai rata-rata pada kolom berbeda, berbeda nyata
Lampiran 10. Hasil Uji Korelasi Pearson
Fosfor Fosfor
Kalsium
Protein
Bioavailabilitas kalsium
Korelasi Pearson Sig. (2-tailed) N Korelasi Pearson Sig. (2-tailed) N Korelasi Pearson Sig. (2-tailed) N Korelasi Pearson Sig. (2-tailed) N
Kalsium 1
6 .975** .001 6 -.651 .162 6 -.966** .002 6
.975** .001 6 1 6 -.619 .190 6 -.991** .000 6
Bioavailabilitas kalsium -.651 -.966** .162 .002 6 6 -.619 -.991** .190 .000 6 6 1 .710 .114 6 6 .710 1 .114 6 6
Protein
60
Lampiran 11. Hasil Pembacaan Standar Kalsium dan Total Kalsium Crackers dengan menggunakan AAS
