■ SERTÉS
A nátrium-n-butirát hatásának in vivo és in vitro vizsgálata oxidatív stressz okozta bélgyulladásokban
134. 726–732.
2012/12
E. Pásztiné Gere – O. Palócz – H. Fébel – Cs. Jakab – P. Gálfi: In vivo and in vitro examination of the effect of sodium-nbutyrate on oxidative stressinduced bowel inflammations
Pásztiné Gere Erzsébet1*, Palócz Orsolya1, Fébel Hedvig2, Jakab Csaba3, Gálfi Péter1 1] SZIE-ÁOTK, Gyógyszertani és Méregtani Tanszék. István u 2. H-1078 Budapest. *E-mail: Gere.Erzsebet@ aotk.szie.hu 2] Állattenyésztési és Takarmányozási Kutatóintézet 3] SZIE-ÁOTK, Kórbonctani és Igazságügyi Állatorvostani Tanszék
Összefoglalás. Az oxidatív stressz által elôidézett gyulladásokban a sejtek közötti kapcsolatok épségének károsodása, a sejtréteg áteresztôképességének növekedése következhet be attól függôen, hogy milyen mértékû és idôtartamú az oxidatív hatás. A szerzôk a túlzott mértékû oxidatív stressz által okozott, bélrendszert érintô gyulladásos folyamatokat in vitro újszülött sertés jejunumából izolált, nem tumoros eredetû membráninzerten tenyésztett IPEC-J2 sejtvonalon és in vivo sertéshizlalási kísérletben tanulmányozták. A kapott eredmények szerint a védôhatású n-butirát terápiás értékéhez a bélhám barrierfunkciójának javítása, az egészséges bélflóra megtartása és a bélhámsejtek regenerációjának elôsegítése is hozzájárul. Az akut oxidatív stressz által elôidézett sejtréteg-ellenállás csökkenése már kisadagú butirátkezelés hatására mérséklôdött, ami alátámasztotta azt, hogy a butirát adása mellett a bélhámsejtek mechanikai gát szerepe erôsödik oxidatív túlsúly esetén. Kísérleti eredmények alapján a Na-n-butirátot tartalmazó táppal etetett sertésekben a bélflóra összetétele kedvezô irányban változott, megnôtt a jótékony hatású tejsavbaktériumok száma és az általuk termelt L-tejsav mennyisége is a vékonybélben. A butirát, a coliform baktériumok szaporodásának visszaszorításán keresztül, a bélrendszert érintô fertôzéses állapotok kialakulásának megelôzésében és legyôzésében is hatékonyan alkalmazható. Summary. In oxidative stress-induced inflammatory processes damage to integrity of junctional assembly and increase in permeability of cell monolayer can happen dependently on ROS concentration and exposure time. The aim of the experimental work was to study the beneficial effect of therapeutically applied growth promoter, n-butyrate on bowel inflammation and oxidative tissue injury in vitro in non-transformed porcine intestinal epithelial cell line, IPEC-J2 cells grown on membrane inserts and in vivo fattening trial with growing pigs. Based on the results, the strengthening of epithelial barrier function and the maintenance of healthy microbiota in addition to promotion of regeneration of epithelium contribute greatly to therapeutic value of protective n-butyrate. The decrease in cell monolayer resistance induced by acute oxidative stress could be compensated by low dose butyrate treatment, which further supported that the mechanical barrier role of intestinal epithelium can be improved by butyrate supplementation in case of excessive oxidative stimuli. The findings confirm that the tipped balance of porcine intestinal milieu can be restored via enrichment of gut ecosystem with beneficial lactobacilli and consequently, their metabolites, L-lactic acids in small intestine when pigs are fed with sodium-n-butyrate. In addition, butyrate, via suppression of coliform bacteria proliferation, can act as an efficient agent in the prevention or treatment of bowel specific infectious diseases.
A probiotikumok a legígéretesebb antimikrobás szerek közé tartoznak, amelyeket azért fejlesztettek ki, hogy megóvják az állatok egészségét és megnöveljék a táplálékhasznosítás mértékét. Az emésztôcsô egészségi állapotának védelme a takarmányiparnak fontos kutatási területe, a probiotikumok takarmánykiegészítôként 122 726
Magyar Állatorvosok Lapja 2012. december
A probiotikumoknak, sok más tulajdonságuk mellett, gyulladáscsökkentõ hatásuk is van
Az n-butirát több állatfajban segíti az egészséges bélflóra fenntartását
való alkalmazása az állatok egészségmegôrzése céljából kiemelkedô jelentôségû: különösen az emésztési zavarok, a bélcsatorna egyes betegségei és tartós per os antibiotikum-terápia esetén gyakori a használatuk. Az állattenyésztést érintô további lényeges szerepük, hogy hozamfokozóként is használhatók, ami különösen a hasonló célra használt kisadagú antibiotikumoknak az EU-ban 2006-tól érvényben lévô betiltása óta került elôtérbe (5, 10, 23). A probiotikumok és anyagcseretermékeik hatása a gastrointestinalis betegségek megelôzésében figyelemre méltó. A probiotikumok a bélcsatornát kolonizálva kiszorítják a patogén mikroorganizmusokat, bakteriocineket termelnek (7), az immunrendszer mûködését befolyásolják (13), erôsítik a bélhámsejtek közötti tight junction (TJ) sejtkapcsoló struktúrákat, stabilizálva ezzel a hámréteg integritását (12). Az általuk termelt bioaktív molekulák szabályozzák a sejtek anyagcseréjét és válaszát a sejtkárosító hatásokra, így az oxidatív stressz okozta gyulladásos folyamatok visszaszorításában is jelentôségük van. E gyulladáscsökkentô hatás mechanizmusa részleteiben még nem tisztázott, de az egyik fô támadáspont lehet a citokinek bélbeli termelôdésének befolyásolása (6). Korábbi kísérleti eredményeink szerint egy ismert probiotikum, a Lactobacillus plantarum 2142 anyagcseretermékei jelentôsen csökkentették az egy órán át tartó 1 mM hidrogén-peroxid hozzáadásának hatására kialakult gyulladásos reakciókat az IPEC-J2 sejtekben (17, 18). Az általunk vizsgált, fermentációval keletkezô, hiszton-deacetiláz-gátló hatású n-butirát egyike azon rövid szénláncú zsírsavaknak, amelyek a vastagbélben termelôdnek az emésztetlen rost, ill. keményítô és a fehérjék anaerob lebontásának eredményeképpen (4, 8, 15, 16, 24). A törvényi szabályozást követôen az n-butirátot széles körben alkalmazzák per os hozamfokozóként kisadagú antibiotikum-kiegészítés helyett vékonybélbôl való erôteljes felszívódása és kedvezôbb biohasznosulása miatt. A vajsav nátriumsóját tartalmazó takarmány etetése számos állatfajban az egészséges baktériumflóra fenntartását segítette elô, és jelentôs mértében csökkentette a gyulladás mértékét, ami feltételezhetôen egyes gyulladásos citokinek expresszióját és aktivitását is befolyásoló tulajdonságának köszönhetô (9, 11, 14, 20, 22). Caco-2 egyrétegû sejttenyészetben a butirát a bél barrierfunkcióját már 2 mM koncentrációban növelte a TJ-szervezôdés elôsegítésével (19). Sertésekben a nátrium-n-butirát kedvezô hatású volt a napi testtömeg-gyarapodásra, a takarmányfelvétel mértéke szignifikánsan növekedett (9). Az immunreaktív inzulin szintje a plazmában butirát alkalmazását követôen megnôtt. A butirát takarmánykiegészítôként való használatának további elônye, hogy jótékony hatását akár egy nagyságrenddel kisebb koncentrációban is képes kifejteni, mint más rövid szénláncú szerves sav (11).
Saját vizsgálat Anyag és módszer
1
1. ábra. Kollagénnel borított, poliésztermembránon növesztett IPEC-J2 egyrétegû sejt fénymikroszkópos képe Bar: 10 µm Figure 1. Immunohistochemistry of claudin-4 in IPEC-J2 cells grown on collagen-coated polyester membrane insert
In vitro vizsgálatainkban IPEC-J2 sejtvonalat használtunk, amely megfelelôen modellezi az élô állatok bélnyálkahártyájának hámrétegét, sejtjei polarizáltak, apicalisan mikrobolyhos kefeszegélyt növesztenek, míg basalis és lateralis részen rövidebb citoplazmanyúlványokat bocsátanak az intercelluláris térbe. Ez a nem transzformált bélhámsejtvonal (1. ábra) újszülött, kolosztrumot még nem fogyasztott malac jejunumából származik, és folyamatos in vitro tenyészetben fenntartható. A sejteket Dulbecco’s modified Eagle medium és Ham’s F-12 Nutrient tápfolyadékok 1:1 arányú keverékében (DMEM/F12; Sigma-Aldrich) tenyésztettük, melyet 5% foetalis borjúsavó (FBS), 5 µg/ ml inzulin, 5 µg/ml transzferrin, 5 ng/ml szelén, 5 ng/ml epidermális növekedési faktor (EGF) és 1%
Oxidatív stressz okozta bélgyulladás kezelése sertésben
727 122
In vitro kísérletben újszülött malac jejunumából származó sejttenyészeten vizsgálták a nátrium-n-butirát oxidatív stresszt kivédô hatását és in vivo kísérletben az antimikrobiális hatást sertésekben
penicillin-sztreptomicin keverékével egészítettünk ki. A sejtek membráninzerten egy rétegben nônek. Az érett sejtkultúrában nagyobb szögletes és közöttük kisebb lapos bélhámsejtek láthatók, kehelysejtekkel nem lehet találkozni. Sejtkapcsoló struktúrákkal összekapcsoltak: apicalisan TJ, alatta zonula adherens kapcsolatok alakulnak ki, így az egy réteg integritása megfelelô, ami az apicalis és a basolateralis folyadéktér közötti transepithelialis elektromos rezisztencia (TER) mérésével igazolható. A mikrobolyhok felületén glikokalixréteg (mukopoliszacharid) figyelhetô meg (1, 21). In vitro kísérleti munkánk során egyrészt a kollagénnel bevont poliésztermembránon tenyésztett IPEC-J2-sejtek polarizáltságának mértékét az apicalis és a basolateralis kompartment között TER-méréssel ellenôriztük oxidatív stressz hatására nátrium-n-butirát nélkül, valamint 2 mM koncentrációban hidrogén-peroxid-kezeléssel egyidejûleg alkalmazott nátrium-n-butirát jelenlétében is. Másrészt, vizsgáltuk a nátrium-n-butirát (0 mM–100 mM) antimikrobás hatását Lactobacillus plantarum 2142 (Lp. 2142) és E. coli 30037 esetében. Az Lp. 2142 tenyésztéséhez DeMan Rogosa Sharpe (MRS), míg az E. coli 30037 esetében Müller–Hinton-tápoldatot használtunk. Mindkét tápoldat pH-értéke 6,5 volt. Kontrollként a baktériumszuszpenziót nátrium-n-butirát hozzáadása nélkül adtuk a tenyésztôközeghez. Az inkubációt aerob körülmények között, 37 ºC-on végeztük folyamatos 200 rpm kevertetés mellett. Az optikai denzitást 630 nm hullámhosszon határoztuk meg a beoltást követôen 0–24 óráig. Az in vivo kísérletek során magyar nagy fehér és magyar lapály keresztezett hízósertéseket használtunk. Az állatok testtömege a kísérlet kezdetekor 30 kg volt. Az állatokat egyedileg helyeztük el, a napi gyarapodást és a takarmányfelvételt folyamatosan mértük. A hômérséklet a kísérlet idején átlag 20 oC, a páratartalom 80% volt. A kísérletbe kezelésenként 8–8 süldôt használtunk, fele-fele ivararányban. A kísérlet során etetett takarmány összetételét az 1. táblázat tartalmazza. Mindegyik kezeléshez ezt a takarmányt használtuk, a kontroll- és kísérleti kezelések közötti különbség az volt, hogy a kísérleti kezelés során a takarmányt 0,15%-ban (13,6 mM) nátrium-n-butiráttal egészítettük ki. A nátrium-n-butirátot tartalmazó tápot 28 napig etettük. Az állatokat 115 napos korban vágtuk le. A vágás során az ileum tartalmának pH-értékét meghatároztuk, majd az ileum falából, a további szövettani vizsgálatra, mintát vettünk. A sertés ileumában (2. ábra) szaporodó tejsavbaktériumok számát MRS-táptalajon (deMan Rogosa és Sharpe) vizuális telepszámlálással (20–150 telep Petri-csészénként) határoztuk meg. Az inkubáció 37 oC-on, 72 óráig tartott. Az ileumtartalomból a tejsav-enantiomerek 1. táblázat. A hízó I. táp összetétele (%) Table 1. Composition of swine feeding (%) Összetevôk Kísérleti adalékanyag (Na-n-butirát)
Hízó I. táp kísérleti
kontroll
0,15
Zeolit univerzal
0,15
Kukoricadara
57,91
57,91
Extrahált szójadara (46%)
16,97
16,97
Extrahált napraforgódara (37%)
10,00
10,00
Búzakorpa
11,37
11,17
Takarmánymész
1,30
1,30
MCP
1,10
1,10
NaCl
0,50
0,50
L-lizin-HCl
0,20
0,40
Hízó 0,5%-os premix*
0,50
0,50
* Premix összetétele: Fe 22 400 mg/kg; Mn 16 880 mg/kg; Cu 2800 mg/kg; Zn 20 000 mg/kg; Se 84 mg/kg; Co 103 mg/kg; I 120 mg/kg; A-vitamin (E672) 2 055 863 NE/kg; D3-vitamin (E671) 400 000 NE/kg; E-vitamin (α-tokoferol) 4263 mg/kg; K 3-vitamin 102 mg/kg; B1-vitamin 72 mg/kg; B2-vitamin 269 mg/kg; B6 -vitamin 168 mg/kg; B12-vitamin 1,88 mg/kg; pantoténsav 794 mg/kg; folsav 46 mg/kg; biotin 4,8 mg/kg; niacin 4409 mg/kg; kolinklorid 72 100 mg/kg; C-vitamin 1140 mg/kg
122 728
Magyar Állatorvosok Lapja 2012. december
(D- és L-laktát) laktát-dehidrogenáz-alapú UVteszttel határoztuk meg. Az elemzés alapja a laktát piruváttá történô oxidációja a megfelelô enantiomerszelektív laktát-dehidrogenáz jelenlétében. A NADH sztöchiometrikus arányban képzôdik a kiindulási tejsav-enantiomerek mennyiségével. A NADH mennyiségének megfelelôen az abszorbancia növekedése 340 nm-en mérhetô. Immunhisztokémiai vizsgálatokhoz az ileumból nyert és 8%-os PBS-sel pufferolt formaldehidoldatban rögzített szövetmintákat elôkészítettük (dehidrálás, paraffinba ágyazás, metszés). Az osztódó sejtek számát proliferációsmarker-festéssel határoztuk meg.
2
2. ábra. Újszülött, még nem szoptatott malac ileumának klaudin-4-pozitivitása A barna elszínezôdés a klaudin-4-molekulák eloszlását mutatja a bélhámsejtek közötti TJ-ben Bar: 50 µm Figure 2. Claudin-4 membrane positivity of ileum in neonatal, unsuckled piglet IPEC-J2 cells showed homogenous, intense membranous claudin-4 positivity (brown discoloration)
Eredmények és megvitatás
A kiindulási sejttenyészeten mért transepithelialis elektromos rezisztencia értékei meghaladták a kísérletek elkezdésének feltételéül szabott 8000 Ohm/cm2 értéket. A H2O2 hozzáadása jelentôs mértékben csökkentette a TER-értéket, ezt az epithelbarrier rezisztenciáját csökkentô hatást a peroxidkezeléssel egy idôben alkalmazott 2 mM nátrium-n-butirát hatékonyan mérsékelte. A butirát védôhatása a 24 órás regenerálódást követôen is szignifikánsnak adódott (p<0,05), ami arra utal, hogy a peroxidkezelés butirát jelenléte mellett sem károsította az enterocytamonolayer integritását (3. ábra). Kísérleti eredményeink szerint a nátrium-n-butirát hatása az E. coli 30037 szaporodásának gátlásában is megnyilvánul, koncentrációfüggô módon, már 11 mM koncentrációban alkalmazott butirát hatására is szignifikánsan csökkent a baktériumok száma a kezelést követôen 4 óra elteltével. Az Lp. 2142 törzs szaporodását viszont a butirát egyetlen vizsgált koncentráció esetében sem (egészen 100 16000 TER a kontroll százalékában kifejezve
14000 12000
0,5 mM H202
10000
2mM SB 0,5 mM H202 + 2 mM SB
8000 6000 4000 2000 0
kezelés elôtt
1 órával a kezelés után regenerálódás (24 óra) után
3. ábra. IPEC-J2-sejtek apicalis és basolateralis kompartmentjei között mért TER-érték meghatározása 0,5 mM H2O2 hozzáadására, valamint a peroxiddal együtt alkalmazott 2 mM nátrium-n-butirát- (SB) kezelés mellett A butirát védôhatása a 24 órás regenerációt követôen is szignifikáns volt (*p<0,05). Az adatokat átlag±S.E.M.-ként tüntettük fel (n=3) Figure 3. TER values measured between apical and basolateral compartments of IPEC-J2 cells were determined by the addition of 0.5 mM H2O2 and by the administration of peroxide + 2 mM butyrate bolus Beneficial effect of butyrate was also significant after 24 hr recovery time (*p<0.05). The data were indicated as means ±S.E.M. (n=3)
Oxidatív stressz okozta bélgyulladás kezelése sertésben
729 122
0,4
1.2
4 0,3
OD 630 nm
OD 630 nm
0,8
0,4
0,2
0,1
0
0 0
2
4 6 idô (óra)
––◆–– 100 mM
––■–– 33,3 mM
––●– 3,7 mM
– - 0 mM
8
24
-▲- 11,1 mM
0
2
4 6 idô (óra)
––◆–– 100 mM
––■–– 33,3 mM
––●– 3,7 mM
– - 0 mM
8
24
-▲- 11,1 mM
4. ábra. A Lactobacillus plantarum 2142 (bal oldali ábra) és az E. coli 30037 (jobb oldali ábra) szaporodása nátrium-n-butirát-kiegészítés (butirátkoncentráció 0–100 mM) hatására pH=6,5-ön A baktériumok szaporodásának meghatározása optikai denzitásméréssel (OD) történt Figure 4. Proliferation of Lactobacillus plantarum 2142 (on left side) and E. coli 30037 (on right side) after sodium-butyrate supplementation (butyrate concentration 0–100 mM) at pH=6 Optical density measurements were applied for determination of microbial proliferation
mM koncentrációig) gátolta (4. ábra). Az in vivo kísérletekben a butirátetetés hatására a vékonybélben szignifikánsan nôtt a tejsavbaktériumok száma és ennek következtében az L-tejsav mennyisége (2. táblázat). BOKORI és GÁLFI (2, 3) korábbi sertéskísérleteiben azt találták, hogy a butirátetetés nem csak a lactobacillusok számát növelte a vékonybélben, hanem szignifikánsan csökkentette a coliform baktériumok számát is. A Lactobacillus-szám és a coliform baktériumok száma között szignifikáns, negatív korreláció volt. A butiráttal etetett sertések bélhámsejtjeiben a szaporodás mértéke szignifikánsan nagyobb volt a kontrollértékekhez képest. A szaporodó sejtek Ki67-et expresszáltak a kései G1-, S-, G2- és M-fázisokban, ezért a Ki67-pozitivitás a sejtosztódásra utal. Megállapítható, hogy a Ki67-pozitív sejtek aránya szignifikánsan nagyobb volt a butiráttal kezelt sertések ileumának cryptáiban a kezeletlen kontrollhoz viszonyítva (p<0,05) (5. ábra). A butiráttartamú takarmány etetésének hatására az ileum nyálkahártyaredôin
5
5. ábra. Ki67 immunreaktivitás különbözô mintázatai A takarmányba kevert nátrium-n-butirát a sertésvékonybél (ileum) cryptasejtjeinek osztódási mértékét szignifikánsan növelte Barna elszínezôdés jelzi az osztódó sejteket. Bal oldalon a kontroll-, jobb oldalon a butirátot fogyasztó csoport Fénymikroszkópos felvétel, bar 200 µm Figure 5. Different patterns of Ki67 immunoreactivity Significant stimulating effect of butyrate supplementation on cell proliferation rate along crypt cells could be detected in swine small intestine (ileum). Cells were scored as positive when brown staining was evidently observed
122 730
Magyar Állatorvosok Lapja 2012. december
2. táblázat. A butiráttartalmú takarmány etetésének hatása a tejsavbaktérium-számra, a tejsavtartalomra és a pH-értékre sertések ileumában Table 2. The effect of supplemented butyrate on lactobacilli amount, content of lactic acid and pH in swine ileum
elôforduló bélbolyhok száma megnövekedett a kontrollértékekhez képest, ez a növekedés (36%) statisztikailag szignifikáns volt. Kísérleti eredményeink szerint feltételezhetjük, hogy a gyulladásos bélbetegségekben a táp nátrium-n-butiráttal történô kiegészítése sertésben Jellemzôk Kontroll Kísérleti kedvezô hatású. A gyulladás csökkentése egyrészt átlag±S.E.M. az epithelialis barrier erôsítésén keresztül valósul 8,4±0,32a 9,39±0,40b Lactobacillus-szám (Log10 meg, másrészt az egészséges bélflóra megtartáCFU/g ileumtartalom) sán keresztül – tejsavbaktériumok számának, jótéD-tejsav (mM/kg)2 1,9±1,80 2,4±2,03 kony hatású anyagcseretermékek mennyiségének L-tejsav (mM/kg)2 21,32±3,81a 30,8±2,12b növelésével – a butirát oxidatív stressz esetén a védekezômechanizmust, továbbá a bélflóra élettapH3 6,26±0,16 6,2±0,13 ni állapotának fennmaradását támogatja. A butirát mM/kg nedves tömeg; az ileumtartalom pH-értéke; az eltérô betûk terápiás hatásának bizonyítására a sertésvékonyszignifikáns különbséget jeleznek (p<0,1) bélben a butirátkezelés hatására megfigyelhetô bélhámsejt-szaporodás és a bélbolyhok számának szignifikáns növekedése további adatokat szolgáltat. 2
3
a, b
Köszönetnyilvánítás A kutatást a 100701 számú OTKA pályázat anyagi támogatása tette lehetôvé.
IRODALOM 1. BERSCHNEIDER, H. M.: Development of normal cultured small intestinal epithelial cell lines which transport Na and Cl. Abstract of the Annual Meeting of the American Gastroenterological Association. Digestive Disease Week and the 90th annual meeting of the American Gastroenterological Association. Elsevier. Washington D. C., 1989. 2. BOKORI J. – GÁLFI P.: A választási kortól etetett butirát elônyös hatása hízósertésekre. Magy. Állatorv. Lapja, 1990. 45. 539–543. 3. BOKORI J. – GÁLFI P. – BOROS I.: Sertéskísérlet Na-nbutirátot tartalmazó táppal. Magy. Állatorv. Lapja, 1989. 44. 501–508. 4. BUGAUT, M. – BENTEJAC, M.: Biological effects of short-chain fatty acids in nonruminant mammals. Ann. Rev. Nutr., 1993. 13. 217–241. 5. CASTANON, J. I. R.: History of the use of antibiotic as growth promoters in European poultry feeds. Poult. Sci., 2007. 86. 2466–2471. 6. CHRISTENSEN, H. R. – FROKIAER, H. et al.: Lactobacilli differentially modulate expression of cytokines and maturation surface markers in murine dendritic cells. J. Immunol., 2002. 168. 171–178. 7. CORR, S. C. – LI, Y. et al.: Bacteriocin production as a mechanism for the antiinfective activity of Lactobacillus salivarius UCC118. Proc. Nat. Acad. Sci., 2007. 18. 7617–7621. 8. CUMMINGS, J. H.: Short chain fatty acids in the human colon. Gut, 1981. 22. 763–779. 9. FERNANDEZ-RUBIO, C. – ORDONEZ, C. et al.: Butyric acidbased feed additives help protect broiler chickens from Salmonella Enteritidis infection. Poult. Sci., 2009. 88. 943–948.
10. GAGGIA, F. – MATTARELLI, P. et al.: Probiotics and prebiotics in animal feeding for safe food production. Int. J. Food Microbiol., 2010. 141. Suppl. 1. 15–28. 11. GÁLFI, P. – BOKORI, J.: Feeding trial in pigs with a diet containing sodium n-butyrate. Acta Vet. Hung., 1990. 38. 3–17. 12. K ARCZEWSKI, J. – TROOST, F. J. et al.: Regulation of human epithelial tight junction proteins by Lactobacillus plantarum in vivo and protective effects on the epithelial barrier. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol., 2010. 298. 851–859. 13. MALDONADO GALDEANO, C. – DE MORENO DE LEBLANC, A. et al.: Lactic acid bacteria as immunomodulators of the gut-associated immune system. In: MOZZI, F. – RAYA, R. R. – VIGNOGO, G. M (eds): Biotechnology of Lactic Acid Bacteria. Wiley-Blackwell. Ames, Iowa, USA, 2010. 125–140. 14. MANZANILLA, E. G. – NOFRARIAS, M. et al.: Effects of butyrate, avilamycin, and a plant extract combination on the intestinal equilibrium of earlyweaned pigs. J. Anim. Sci., 2006. 84. 2743–2751. 15. MCINTOSH, G. H. – LE LEU, R. K. et al.: A comparative study of the influence of differing barley brans on DMH-induced intestinal tumours in male SpragueDawley rats. J. Gastroenterol. Hepatol., 1996. 11. 113–119. 16. MCINTYRE, A. – GIBSON, P. R. et al.: Butyrate production from dietary fibre and protection against large bowel cancer in a rat model. Gut, 1993. 34. 386– 391. 17. PASZTI-GERE, E. – CSIBRIK-NEMETH, E., – SZEKER, K. – CSIZINSZKY, R. – JAKAB, CS. – GALFI, P.: Acute oxidative
Oxidatív stressz okozta bélgyulladás kezelése sertésben
731 122
stress affects IL-8 and TNF-alpha expression in IPECJ2 porcine epithelial cells. Inflammation, 2012. 35. 994–1004. 18. PASZTI-GERE, E. – SZEKER, K. – CSIBRIK-NEMETH, E. – CSIZINSZKY, R. – MAROSI, A. – PALOCZ, O. – FARKAS O. – GALFI, P.: Metabolites of Lactobacillus plantarum 2142 prevent oxidative stress-induced overexpression of proinflammatory cytokines in IPEC-J2 cell line. Inflammation, 2012. DOI: 10.1007/s10753-0129462-5. 19. PENG, L. – LI, Z. R. et al.: Butyrate enhances the intestinal barrier by facilitating tight junction assembly via activation of AMP-activated protein kinase in Caco-2 cell monolayers. J. Nutr., 2009. 139. 1619–1625. 20. SAEMANN, M. D. – BOHMIG, G. A. et al.: Antiinflammatory effects of sodium butyrate on human monocytes: potent inhibition of IL-12 and up-
21.
22.
23.
24.
regulation of IL-10 production. FASEB J., 2000. 14. 2380–2382. SCHIERACK, P. – NORDHOFF, M. et al.: Characterization of a porcine intestinal epithelial cell line for in vitro studies of microbial pathogenesis in swine. Histochem. Cell Biol., 2006. 125. 293–305. URNOV, F. D.: Chromatin remodeling as a guide to transcriptional regulatory networks in mammals. J. Cell Biochem., 2003. 88. 684–694. WENK, C.: Growth promoter alternatives after the ban on antibiotics. Pig News Inform., 2003. 1. 11– 16. WHITELEY, L. O. – HIGGINS, J. M. et al.: Evaluation in rats of the dose-response relationship among colonic mucosal growth, colonic fermentation, and dietary fiber. Dig. Dis. Sci., 1996. 41. 1458–1467.
Közlésre érk.: 2012. jún. 4.
■ TALLÓZÁSOK Fejõstehenek csecsbimbóinak hyperkeratosisa. A hyperkeratosis a bimbócsatorna nyílása körül kialakuló sima vagy barázdált keratindudor, amelyet négy súlyossági fokozatba sorolnak. Tõgygyulladásra hajlamosít, mert a bõrelváltozáson baktériumok tapadhatnak meg, amelyek eltávolítása nehéz. A leggyakoribb kiváltó ok a hosszú fejési idõ és a kedvezõtlen idõjárás. A bimbócsatorna bejáratát különösen a fejés elején és a végén a kevés tejátfolyás (1 liter alatt percenként) károsítja. Ennek csökkentésére a csecsbimbók tisztításának és fertõtlenítésének legalább 12 másodpercnyi ideig kell tartania. A bimbók elsõ érintését követõen 90– 120 másodperc múlva kell felhelyezni a fejõkelyheket az oxitocinhatás kedvezõ kihasználásához. A bimbócsatorna nyílásának elváltozása miatt a fejõk gyakran csökkentik a vákuumot. Ez a helyzeten csak ront, mert a fejési idõ meghosszabbodik. Egyes kutatók a vákuum optimális értékét 267–318 Hgmm közöttinek javasolják. Kicsivel nagyobb érték, jó tõgyelõkészítés esetén, lerövidíti a fejési idõt és kíméli a csecsbimbókat. A vakfejés elkerülésére a fejés végét úgy kell meghatározni, hogy az automatikusan 2 másodperc múlva bekövetkezzék, ha az összes tej mennyisége egy l/perc alá esik. A már kialakult hyperkeratosis kezelésére szerves savakat tartalmazó bimbóápolókat lehet alkalmazni. A savak fel-
122 732
Magyar Állatorvosok Lapja 2012. december
puhítják a keratint, így az a következõ fejésnél könnyen eltávolítható. [VETimpulse, 2012. 21. (19.) 7. –ViL–] Horrorisztikus számok az antibiotikum-felhasználásban. Németországban riadót fújtak a zöld szervezetek az állatgyógyászatban felhasznált antibiotikumok rohamos növekedése miatt. 2005-ben 784 tonna mennyiséget használtak fel, 2011-ben pedig több mint a dupláját: 1734 t-t. A rohamos növekedés okaként szóba került, hogy az állatlétszámok is nõttek, baromfi esetében 30, sertésnél 20%-kal. A gyártók is megváltoztatták az adagolási ajánlataikat. Amoxicillin esetében a korábbi kétszeresére, tetraciklinek esetében pedig négyszeresére. Ebbõl a két szerbõl ezer tonnánál is több került felhasználásra. Az emberi összehasonlításban is meghökkentõek a számok. Az iparszerû állattelepeken negyvenszer több antibiotikumot használnak fel, mint a német kórházakban és hétszer többet, mint a humángyógyászatban összességében. Mindezekre tekintettel, a felhasználást a felére kívánják csökkenteni. Az új, 2013-ban életbe lépõ gyógyszerrendelet antibiotikum-monitoringot vezet be. Ez nem a felhasznált mennyiséget, hanem az egyes üzemekben alkalmazott kezelések gyakoriságát fogja mérni és az üzemeket minõsíteni. [VETimpulse, 2012. 21. (19.) 2. –ViL–]
