Protokoly z Lab. cv. z mikrobiológie, externé bakalárske štúdium Meno: Dátum: Názov: Aseptická práca, sterilizácia, živné médiá, izolácia čistej kultúry, metódy na stanovenie počtu mikroorganizmov 1.
Vymenujte základné princípy aseptickej práce:
2.
Uveďte, čo je to sterilizácia a aký je jej význam:
3.
Stručne uveďte, čo je to kultivačné médium a aký je jeho význam:
4.
Charakterizujte živné médiá pripravené v priebehu cvičenia (názov, používaná skratka, chemický základ, skupina mikroorganizmov pre ktorú je určené)
5.
Uveďte podmienky sterilizácie
a) živných médií pripravených v priebehu cvičenia:
b) Petriho misiek používaných na cvičeniach:
6.
V bodoch popíšte postup prípravy
a) agarových platní:
b) šikmých agarov:
7.
Na aké účely slúžia
a) agarové platne:
b) šikmé agary:
8.
Ako možno získať mikroorganizmy z okolitého prostredia:
9.
Charakterizujte čistú kultúru mikroorganizmov:
10. Stručne opíšte použitú metódu izolácie čistej kultúry:
11. Zhodnoťte úspešnosť Vašej izolácie čistej kultúry zo zmesi mikroorganizmov z okolitého prostredia a uveďte prípadne problémy a príčiny:
12. Vymenujte základné metódy na stanovenie počtu mikroorganizmov a ich princípy:
13. Aké sú podmienky stanovenia počtu kvasiniek priamou mikroskopickou metódou (v Bürkerovej komôrke):
14. Uveďte spôsob výpočtu a výsledok pri stanovení počtu kvasiniek v 1 ml suspenzie:
2
Názov: Baktérie (makroskopické a mikroskopické pozorovanie, základné biochemické diagnostické testy) 1.
Vymenujte, aké znaky charakterizujú kolóniu baktérií:
2.
Aké základné tvary baktérií poznáte a ako môžu byť usporiadané:
3.
Čo je to natívny preparát a aké je jeho praktické uplatnenie:
4.
Popíš použitý postup negatívneho zobrazenia:
5.
Prečo sa preparáty fixujú a aký je najčastejší postup fixácie v bakteriológii:
6.
Uveďte druhy diagnostických farbení aj s ich princípmi:
7.
Popíšte, ako ste farbili fixované preparáty pri
a) Gramovom farbení:
b) farbení bakteriálnych endospór:
8.
Na čo sa používa "pomocný KOH test" a čo je jeho princípom:
3
9.
Zakreslite výsledky makroskopického a mikroskopického pozorovania modelových baktérií a doplňte chýbajúce údaje
a) Bacillus subtilis Makrovzhľad kolónie:
Natívny preparát:
Negatívne zobrazenie:
zväčšenie: tvar buniek: usporiadanie buniek:
zväčšenie: pohyb: Gramovo farbenie:
Farbenie bakteriálnych endospór:
zväčšenie: farba: Gram pozitívne - negatívne
zväčšenie: farba:
KOH test:
Gram pozitívne - negatívne
b) Micrococcus luteus Makrovzhľad kolónie:
Natívny preparát:
Negatívne zobrazenie:
zväčšenie: tvar buniek: usporiadanie buniek:
zväčšenie: pohyb: Gramovo farbenie:
zväčšenie: farba: Gram pozitívne - negatívne KOH test:
Gram pozitívne - negatívne
c) Escherichia coli
4
Makrovzhľad kolónie:
Natívny preparát:
Gramovo farbenie:
zväčšenie: farba: Gram pozitívne - negatívne
zväčšenie: pohyb: KOH test:
Gram pozitívne - negatívne
d) Pseudomonas aeruginosa Makrovzhľad kolónie:
Natívny preparát:
Gramovo farbenie:
zväčšenie: pohyb:
zväčšenie: farba:
KOH test:
Gram pozitívne - negatívne
10. Oxidačno-fermentačný test - O/F test a) význam a princíp:
b) spôsob detekcie:
c) zloženie živného média:
0.2 g peptónu, 0.5 g NaCl, 2 g glukózy, 0.03 g K2HPO4, 2 g agaru a 100 ml H2O rozvariť, pridať 1 ml brómtymolovej modrej a upraviť pH na modrozelenú farbu média d) použité mikroorganizmy a spôsob očkovania:
Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa F - zaliať asi 1 cm vrstvou zmesi pafin:vazelína (1:1) e) kultivačné podmienky:
37 °C, 24 h, tma, staticky
5
f) výsledok:
11. Utilizácia laktózy a) význam a princíp:
b) spôsob detekcie:
c) zlozenie živného média:
1 %-ná peptónová voda (1 g peptónu, 0.5 g NaCl, 0.1 ml brómtymolovej modrej, 100 ml H2O, pH upravené na modrozelenú farbu média) obsahujúca 1 % laktózy d) použité mikroorganizmy a spôsob očkovania:
Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, e) kultivačné podmienky:
37 °C, 24 h, tma, staticky f) výsledok:
12. Metylred a Vogest-Proskauerov test a) význam a princíp:
b) spôsob detekcie:
c) zloženie živného média:
peptón-glukózová pôda (5 g peptónu, 5 g glukózy, 5 g K2HPO4, 100 ml H2O) d) použité mikroorganizmy a spôsob očkovania:
Escherichia coli, Serratia marcescens, Pseudomonas aeruginosa, e) kultivačné podmienky:
37 °C, 24 h, tma, staticky f) výsledok:
6
13. Oxidázová skúška a) význam a princíp:
b) spôsob detekcie:
c) zlozenie živného média:
Mäsopeptónovy agar d) použité mikroorganizmy a spôsob očkovania:
Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, e) kultivačné podmienky:
37 °C, 24 h, tma, staticky f) výsledok:
14. Katalázová skúška a) význam a princíp:
b) spôsob detekcie:
c) zlozenie živného média:
Mäsopeptónový agar d) použité mikroorganizmy a spôsob očkovania:
Bacillus subtilis, Micrococcus luteus, e) kultivačné podmienky:
37 °C, 24 h, tma, staticky f) výsledok:
7
Názov: Vláknité huby (makroskopické a mikroskopické pozorovanie) 1.
Charakterizujte vláknité huby (zaradenie do systému, morfológia, rozmnožovanie)
2.
Aké makroskopické a mikroskopické znaky sa sledujú pri charakterizácii vláknitých húb:
3.
Popíšte postup prípravy preparátov na mikroskopické pozorovanie vláknitých húb:
4.
Zakreslite a šípkami k obrázku popíšte znaky modelových vláknitých húb
a) Rhizopus taxonomické zaradenie: makroskopické: mikroskopické:
zväčšenie: b) Mucor taxonomické zaradenie: makroskopické: mikroskopické:
zväčšenie:
8
c) Aspergillus taxonomické zaradenie: makroskopické: mikroskopické:
zväčšenie: d) Penicillium taxonomické zaradenie: makroskopické: mikroskopické:
zväčšenie: e) Alternaria alternata taxonomické zaradenie: makroskopické: mikroskopické:
zväčšenie: f) Fusarium taxonomické zaradenie: makroskopické: mikroskopické:
zväčšenie:
9
Názov: Kvasinky (makroskopické a mikroskopické pozorovanie, základné biochemické diagnostické testy) 1.
Charakterizujte kvasinky (zaradenie do systému, morfológia, rozmnožovanie)
2.
Aké makroskopické a mikroskopické znaky sa sledujú pri charakterizácii kvasiniek:
3.
Zakreslite a popíšte znaky modelových kvasiniek
a) Saccharomyces cerevisiae taxonomické zaradenie: makroskopické na stuženom médiu: v kvapalnom médiu: mikroskopické:
zväčšenie: b) Schizosaccharomyces pombe taxonomické zaradenie: makroskopické na stuženom médiu: v kvapalnom médiu: mikroskopické:
zväčšenie:
10
c) Candida utilis taxonomické zaradenie: makroskopické na stuženom médiu: v kvapalnom médiu: mikroskopické:
zväčšenie: d) Rhodotorula glutinis taxonomické zaradenie: makroskopické na stuženom médiu: v kvapalnom médiu: mikroskopické:
zväčšenie: e) Aureobasidium pullulans taxonomické zaradenie: makroskopické na stuženom médiu: v kvapalnom médiu: mikroskopické:
zväčšenie: f) Endomycopsis javanensis taxonomické zaradenie: makroskopické na stuženom médiu: v kvapalnom médiu: mikroskopické:
zväčšenie:
11
4.
Kvasné skúšky - utilizácia sacharózy a maltózy
a) význam a princíp:
b) spôsob detekcie:
c) zlozenie živného média:
1 % kvasničný autolyzát (100 ml, 1.5 ml brómtymolovej modrej, pH upraviť na modrozelenú farbu média) obsahujúci 2 % sacharózy, resp. laktózy d) použité mikroorganizmy a spôsob očkovania:
Candida albicans, Candida tropicalis, Candida utilis a Candida lipolytica e) kultivačné podmienky:
26 ºC, 24 h, svetlo-tma, staticky f) výsledok:
5.
Asimilácia C a N zdrojov - auxanografia
a) význam a princíp:
b) spôsob detekcie:
c) zlozenie živného média:
-C médium (0.5 g (NH4)2SO4, 0.1 g KH2PO4, 0.05 g MgSO4, 0.1 ml 1 % kvas. autolyzátu, 2 % agaru, 100 ml H2O) -N médium (2 g glukózy, 0.1 g KH2PO4, 0.05 g MgSO4, 0.1 ml 1 % kvas. autolyzátu, 2 % agaru, 100 ml H2O) d) použité mikroorganizmy a spôsob očkovania:
Saccharomyces cerevisiae, Rhodotorula glutinis, Candida albicans a Candida utilis hustá suspenzia kvasiniek vo fyziologickom roztoku, výsledná koncentrácia suspenzie v médiu 2 % e) kultivačné podmienky:
f) výsledok:
6.
Uveďte význam, princíp a využitie testu vitality kvasiniek:
12